DNase I (DNase)

别名: 脱氧核糖核酸酶;去氧核糖核酸酶;脱氧核糖核酸;胰道酶;胰克氧核糖核酸酶;除氧细胞核酸酶(牛胰);去氧细胞核酸酶;DNA酶;脱氧核糖核酸酶Ⅰ(牛胰);Deoxyribonuclease from Bovine Spleen 脱氧核糖核酸酶,从牛脾所得;DNAse I 脱氧核糖核酸酶I;DNA酶(脱氧核糖核酸酶);DNA酶,脱氧核糖核酸酶; DNA酶I 来源于牛胰腺(过滤);脱氧核糖核酸酶 I;脱氧核糖核酸酶,从牛脾所得;脱氧核糖核酸酶1(牛胰腺由来);脱氧核糖核酸酶
目录号: V64176 纯度: ≥2000 Kunitz units/mg
DNase I 脱氧核糖核酸酶是一种 DNA 降解酶,在细胞外 DNA 的切割中发挥关键作用,对于限制炎症反应和维持体内平衡至关重要。
DNase I (DNase) CAS号: 9003-98-9
产品类别: Nuclease
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: ≥2000Kunit Units/mg

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产品描述
DNase I 脱氧核糖核酸酶是一种 DNA 降解酶,在细胞外 DNA 的切割中起着关键作用,对于限制炎症反应和维持体内平衡至关重要。外源性脱氧核糖核酸酶在炎症性疾病和癌症中发挥有益作用。
DNase I(脱氧核糖核酸酶 I)是一种从牛胰腺中分离的内切核酸酶,主要用于从蛋白质样品中去除脱氧核糖核酸 (DNA)。它在中性 pH 值(最适 pH 值为 7.8)下切割单链和双链 DNA(包括染色质),产生 5'-磷酸基团和 3' 位游离羟基的多核苷酸。DNase I 是一种作用于嘧啶邻位磷酸二酯键的内切核酸酶,产生末端带有 5'-磷酸基团的多核苷酸。在 Mg2+ 存在下,DNase I 独立切割 DNA 的每条链,且切割位点是随机的。该酶的分子量约为 31 kDa,pI 约为 5。DNase I 也用于组织培养工作中,消化受损细胞中的 DNA,从而降低粘度并去除膜结合的 DNA 片段。
生物活性&实验参考方法
靶点
DNA
DNase I targets DNA. It is an endonuclease that cleaves phosphodiester bonds in DNA, producing polynucleotides with 5'-phosphates. Its activity is dependent on the presence of divalent cations such as Mg2+.
体外研究 (In Vitro)
细胞外DNA,也称为游离DNA,由死亡细胞或活化的免疫细胞释放,可被免疫系统识别为危险信号,从而引发或加剧炎症。细胞外DNA的裂解对于限制炎症反应和维持体内平衡至关重要。脱氧核糖核酸酶(DNase)作为降解DNA的酶,被认为在此过程中发挥关键作用,并决定着细胞外DNA浓度的变化。根据其生化和生物学特性以及组织特异性表达,DNase分为两大家族——DNase I和DNase II。研究表明,DNase活性降低既是系统性红斑狼疮的生物标志物,也是其致病因素。干预性实验证明,外源性DNase的给药对炎症性疾病具有有益作用。重组人DNase可降低肺部黏液黏度,并用于治疗囊性纤维化患者。本综述总结了目前已发表的关于DNase的数据,包括其作为潜在生物标志物的活性以及评估方法。此外,还概述了DNase全身给药的实验。低血浆DNase活性是否参与疾病的发病机制尚不清楚,需要进一步阐明。[1] DNase I是一种在中性pH条件下切割DNA的核酸内切酶。其体外活性通过其降解DNA的能力来测定,可通过多种方法进行评估,包括琼脂糖凝胶电泳、分光光度法或使用荧光标记的DNA底物。该酶的活性≥60,000 DNase单位/mg干重。
体内研究 (In Vivo)
除了抑制肝转移外,脱氧核糖核酸酶(0.1 U;腹腔注射;每日一次,连续3天)与原发肿瘤切除术联合使用可延长生存期[1]。
DNase I 用于治疗囊性纤维化和系统性红斑狼疮。它也用于分子生物学中从蛋白质样本中提取 DNA。
酶活实验
DNase I 的活性可以通过标准检测方法进行评估。一个 DNase 单位定义为在 30°C 下,10 分钟内使高度聚合 DNA 溶液的相对粘度从初始的 4.0 降低 1.0 个相对粘度单位所需的酶量。
细胞实验
DNase I 用于细胞培养中,可消化受损细胞的 DNA,降低培养基粘度并去除膜结合的 DNA 片段。它可添加到细胞培养基中,或用于细胞裂解方案中,以降低因死细胞释放 DNA 而导致的培养基粘度。
动物实验
动物/疾病模型: 雌性 BALB/cx DBA/2 小鼠,皮下注射鼠源肿瘤 L5178Y-ML 细胞[1]
剂量: 每只小鼠 0.1 U
给药途径: 静脉注射;0.1 U;每日一次,连续三天
实验结果: 肝脏重量从 2.26 g 降至 1.55 g,影响肝转移的强度,减少转移灶的数量和大小,并影响肿瘤细胞的滞留。

动物/疾病模型: 雌性BALB/cx DBA/2小鼠,携带鼠源性肿瘤,并进行皮下(sc)肿瘤切除术[1]
剂量: 每只小鼠0.1 U
给药途径: 静脉注射;0.1 U;每日一次,连续3天,可在原发肿瘤切除术前或术后给药
实验结果: 与未治疗组相比,肿瘤细胞接种后小鼠的生存期显著延长。
DNase I常用于动物模型中,以研究其在囊性纤维化和系统性红斑狼疮等疾病中的治疗效果。它通过吸入或注射给药,以降解气道或循环系统中的DNA。
药代性质 (ADME/PK)
DNase I 的分子量约为 31 kDa,等电点约为 5。它由 4 种同工酶组成,其中 DNAse A 最为常见。该酶应储存在 2-8°C 的温度下。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
DNase I 的毒理学数据并不十分详尽。它是一种通常被认为对研究和临床应用安全的酶。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。
参考文献

[1]. Deoxyribonucleases and Their Applications in Biomedicine. Biomolecules. 2020 Jul 11;10(7):1036.

[2]. Deoxyribonuclease treatment prevents blood-borne liver metastasis of cutaneously transplanted tumour cells in mice. Br J Cancer. 1993 Jan;67(1):66-70.

其他信息
将小鼠来源的L5178Y-ML细胞皮下移植到(BALB/cx DBA/2)F1小鼠侧腹部,导致局部细胞生长和自发性肝转移。即使在肿瘤细胞接种后5或7天进行原发肿瘤切除术,所有小鼠仍因肝转移在18天内死亡。利用该肿瘤转移模型,我们研究了丝氨酸蛋白酶或脱氧核糖核酸酶I (DNase I) 是否影响转移。在肿瘤细胞接种后第3、4和5天或第5、6和7天全身性给予α-胰凝乳蛋白酶可增强L5178Y-ML细胞的自发性肝转移。该结果与先前关于血行肺转移的报道一致。相反,在肿瘤细胞接种后第3、4和5天或第5、6和7天全身性给予DNase I可抑制肝转移。两种治疗方法均未影响原发肿瘤的生长。扫描电镜结果提示,DNase I 可能影响肿瘤细胞在肝脏微血管中的滞留。DNase I 治疗可显著延长生存期,但效果并不理想。将原发肿瘤切除术与 DNase I 治疗联合应用,可获得更显著的抗转移效果,从而更有效地延长生存期。这些结果提示,DNase I 可能是一种潜在的治疗药物,可与手术联合使用以预防临床血行转移。[2] DNase I 是一种广泛应用于分子生物学的酶,用于从蛋白质样本中去除 DNA。它也用于组织培养以降低黏度,并作为囊性纤维化和系统性红斑狼疮的治疗药物。该酶尚未获准用于所有适应症的治疗,目前仅用于实验室研究。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H22N4O6
分子量
318.32628
CAS号
9003-98-9
外观&性状
Off-white to light yellow solid powder
密度
100 g/mL at 20 °C
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 43.48 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: 5 mg/mL (Infinity mM) in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液; 超声助溶 (<60°C).
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1414 mL 15.7070 mL 31.4139 mL
5 mM 0.6283 mL 3.1414 mL 6.2828 mL
10 mM 0.3141 mL 1.5707 mL 3.1414 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们