| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MYF-03-69 targets all four members of the TEAD transcription factor family, with IC₅₀ values of 385 nM for TEAD1, 143 nM for TEAD2, 558 nM for TEAD3, and 173 nM for TEAD4. Additionally, MYF-03-69 inhibits TEAD transcriptional activity with an IC₅₀ of 56 nM. The compound irreversibly modifies TEAD proteins by covalently binding to the conserved cysteine in the TEAD palmitate-binding pocket, thereby disrupting YAP-TEAD interaction.
TEAD family proteins (TEAD1, TEAD3, TEAD4). The compound acts as a pan-TEAD inhibitor by covalently binding to a conserved cysteine residue (Cys359 in TEAD1) within the central lipid-binding pocket of the TEAD protein, which is critical for its folding, stability, and interaction with co-activators YAP/TAZ. This covalent binding irreversibly disrupts the TEAD-YAP/TAZ complex and downstream gene expression. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
MYF-03-69 选择性地抑制 Hippo 信号通路缺陷的间皮瘤细胞（例如 NCI-H226、MSTO-211H）的增殖，而对正常间皮细胞或 Hippo 信号通路完整的癌细胞几乎没有细胞毒性。在 0.1-10 μM 的浓度下，MYF-03-69 作用 48 小时可诱导 NCI-H226 和 MSTO-211H 细胞发生 G1 期细胞周期阻滞。在 2 μM 的浓度下，MYF-03-69 可抑制 TEAD 蛋白的棕榈酰化，下调 YAP-TEAD 靶基因（例如 CTGF、CYR61 和 ANKRD1）的表达，并上调促凋亡基因 BMF 的表达。将重组TEAD2 YBD蛋白与10倍摩尔过量的MYF-03-69在室温下孵育1小时，可达到100%的标记效率。对903种癌细胞系进行PRISM筛选，结果表明TEAD-YAP依赖性和对MYF-03-69的敏感性之间存在高度相关性。
在生化分析中，MYF-03-176 在报告基因检测中以 11 nM 的 IC50 值抑制 TEAD 转录活性。它直接抑制 TEAD1、TEAD3 和 TEAD4，IC50 值分别为 47、32 和 71 nM。在 Hippo 信号通路缺陷的 NCI-H226 恶性胸膜间皮瘤细胞中，该化合物以 20-500 nM 的浓度处理 24 小时后，可下调 YAP 靶基因（CTGF、CYR61、ANKRD1）的表达，并以 9 nM 的 IC50 值抑制细胞生长。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
对 MYF-03-69 的进一步优化得到了 MYF-03-176，这是一种口服生物利用度高的化合物，在恶性胸膜间皮瘤小鼠异种移植模型中，口服给药即可展现出强大的抗肿瘤功效。在细胞活力筛选中，MYF-03-69 对 Hippo 信号通路缺陷的间皮瘤细胞（如 NCI-H226 和 MSTO-211H）表现出选择性的抗增殖作用，而对 Hippo 信号通路完整的间皮瘤细胞（NCI-H2452）和非癌性间皮细胞（MeT-5A）的影响较小。
在人间皮瘤NCI-H226细胞来源的异种移植（CDX）小鼠模型中，连续28天每日两次口服30-75 mg/kg剂量的MYF-03-176，表现出强效的抗肿瘤活性，显著缩小了肿瘤体积。在SW1753异种移植模型中，每日两次口服100 mg/kg剂量的MYF-03-176联合KRAS抑制剂AMG510，可有效缩小肿瘤体积，且不影响体重。 |
| 酶活实验 |
TEAD棕榈酰化抑制实验：将1 μM TEADs-YBD重组蛋白与指定浓度的MYF-03-69在37°C孵育2小时，然后加入棕榈酰炔辅酶A，总体积为50 μL。反应30分钟后，加入5 μL 10% SDS和5 μL点击反应试剂，启动点击反应，反应1小时。加入4×上样缓冲液后，使用IRDye 800CW链霉亲和素进行生物素检测，并使用抗His标签抗体进行Western blot分析。质谱标记实验：将重组TEAD2 YBD蛋白与10倍摩尔过量的MYF-03-69在室温下孵育1小时，然后进行质谱分析以检测标记效率。结果显示，孵育 1 小时后标记率达 100%。共结晶实验：将 300 μM TEAD1 与 600 μM MYF-03-69 预孵育 1 小时后，加入结晶缓冲液（3 M (NH₄)₂SO₄ 和 0.1 M Tris pH 9.0），并在 384 孔悬滴气相扩散微孔板中加入 25 μL 结晶缓冲液，于 20°C 孵育 3 天以获得晶体。分子对接：使用 Schrödinger 套件软件（2019-02 版本）的共价对接程序，以默认参数对 MYF-03-69 与 TEAD2 结构（PDB 代码：）进行对接。细胞热位移分析 (CETSA)：CETSA 用于检测 MYF-03-69 与细胞中 TEAD 蛋白的结合。
TEAD抑制剂的标准生化检测方法是荧光偏振（FP）结合试验，该试验使用荧光标记的棕榈酸酯探针（例如BODIPY-C16）和重组TEAD蛋白。将待测化合物进行系列稀释，并与TEAD蛋白和探针一起孵育。通过测量偏振度来计算结合亲和力，并确认抑制剂是否能将探针从棕榈酰化口袋中置换出来。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖抑制实验：将NCI-H226、MSTO-211H、NCI-H2452间皮瘤细胞和MeT-5A间皮细胞接种于培养板中，并用0-10 μM MYF-03-69处理5天。采用CellTiter-Glo或MTT法检测细胞活力，计算GR₅₀值。细胞周期分析：将NCI-H226和MSTO-211H细胞用0.1-10 μM MYF-03-69处理48小时，并通过流式细胞术检测G1期细胞周期阻滞。蛋白质印迹分析：将细胞用2 μM MYF-03-69处理指定时间后裂解。采用蛋白质印迹法检测TEAD靶基因（CTGF、CYR61、ANKRD1）和促凋亡基因BMF的蛋白表达水平。TEAD转录活性报告基因检测：利用TEAD荧光素酶报告基因慢病毒构建稳定细胞系，用于监测TEAD转录活性。用MYF-03-69处理细胞，并通过荧光素酶活性检测评估TEAD转录抑制情况（IC₅₀ = 56 nM）。PRISM高通量筛选：对903个带有条形码的癌细胞系进行PRISM筛选。计算Log2(AUC)值以评估对MYF-03-69的敏感性，并与DepMap数据库中的CRISPR敲除评分进行相关性分析。
为了评估细胞活性，通常使用荧光素酶报告基因检测。将含有TEAD反应元件（例如，来自CTGF启动子）的质粒转染到细胞（例如NCI-H226）中，该元件驱动萤火虫荧光素酶的表达。转染后，用不同浓度的MYF-03-176处理细胞24-48小时。通过测量发光强度来量化TEAD转录活性，并以组成型海肾荧光素酶对照进行标准化。 |
| 动物实验 |
MPM异种移植小鼠模型：采用NCI-H226人恶性胸膜间皮瘤细胞建立CDX小鼠模型。口服给予优化的MYF-03-69类似物MYF-03-176，以评估其抗肿瘤疗效。
MYF-03-176 的体内疗效通常在异种移植模型中进行测试。将肿瘤细胞（例如 NCI-H226 或 SW1753）皮下植入裸鼠体内，使其生长至一定大小。然后将小鼠随机分组，分别给予赋形剂对照或受试化合物，每日灌胃一次或两次，持续数周。定期测量肿瘤体积和体重，以评估抗肿瘤疗效和耐受性。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
MYF-03-69 的分子量为 443.42，分子式为 C₂₂H₂₀F₃N₅O₂。它在 DMSO 中的溶解度为 80 mg/mL (180.42 mM)。优化后的类似物 MYF-03-176 具有良好的口服生物利用度。
MYF-03-176 是一种口服活性化合物，具有良好的生物利用度。在已描述的动物研究中，该化合物以不同剂量（30-100 mg/kg）通过灌胃给药，表明其适合口服给药。尽管文献中尚未详细描述其代谢和排泄特性，但作为一种共价抑制剂，由于其与靶点的不可逆结合，MYF-03-176 旨在产生持久的药效作用。盐酸盐形式可提高其溶解度和稳定性。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前毒性数据有限，但在已描述的动物研究中，MYF-03-176 治疗耐受性良好。在 SW1753 异种移植模型中，MYF-03-176 联合治疗未影响裸鼠的体重，表明在治疗剂量下未观察到明显的急性毒性。由于该化合物主要用作研究工具，因此尚未报道其长期毒性和脱靶毒性。临床开发需要进行更深入的毒理学研究。
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| 参考文献 |
[1]. Covalent Disruptor of YAP-TEAD Association Suppresses Defective Hippo Signaling. BioRxiv. doi: https://doi.org/10.1101/2022.05.10.491316. Now published in eLife doi: 10.7554/eLife.78810
[2]. Structure-Based Design of Y-Shaped Covalent TEAD Inhibitors. J Med Chem. 2023 Apr 13;66(7):4617-4632. [3]. YAP/TAZ mediates resistance to KRAS inhibitors through inhibiting proapoptosis and activating the SLC7A5/mTOR axis. JCI Insight. 2024 Dec 20;9(24):e178535. |
| 其他信息 |
MYF-03-176 是一种研究用化合物，源自一项旨在开发选择性半胱氨酸共价 TEAD 抑制剂的药物化学研究。它通过基于结构的药物设计方法筛选得到，也称为化合物 22。该化合物是一种强效抑制剂，能够显著抑制 TEAD 调控的基因表达以及 TEAD 依赖性癌细胞系（包括间皮瘤和脂肪肉瘤来源的癌细胞系）的增殖。目前，该化合物尚未获准用于临床，仅用于临床前研究。
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| 分子式 |
C19H19F4N4O2CL
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|---|---|
| 分子量 |
446.83
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| CAS号 |
2857937-59-6
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 别名 |
MYF-03-176 HCl; MYF03-176 HCl
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (243.68 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2380 mL | 11.1899 mL | 22.3799 mL | |
| 5 mM | 0.4476 mL | 2.2380 mL | 4.4760 mL | |
| 10 mM | 0.2238 mL | 1.1190 mL | 2.2380 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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