| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Activates transcription factor 4, ATF4[1]
E235 targets the integrated stress response (ISR) pathway by regulating the expression of activating transcription factor 4 (ATF4). ATF4 is a key transcription factor that is activated in response to various cellular stresses, including endoplasmic reticulum (ER) stress, amino acid deprivation, and oxidative stress. By modulating ATF4 expression, E235 activates the ISR, leading to the upregulation of downstream genes involved in amino acid metabolism, antioxidant responses, and autophagy. Additionally, E235 activates DNA damage response signaling. The dual activation of both ISR and DNA damage pathways is thought to be the primary mechanism by which E235 reduces cell viability and exerts its anti-proliferative effects. The compound may also inhibit specific enzymes and signaling pathways involved in cancer cell growth, survival, and metastasis. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在HT1080细胞中，E235（1 µM；2、4、8、16或24小时）呈时间依赖性地降低XBP-1 mRNA的水平[1]。E235在0.1–10 µM浓度下作用4或5天，对HT1080、RPMI-8226、B16F10、4T1、HT1080 shNT和HT1080 shATF4细胞表现出抗增殖作用[1]。在AG1522细胞中，E235（0、1、5和10 µM；4小时）呈剂量依赖性地增强p53的表达。在AG1522细胞中，E235（1 µM；2小时）增强p-Chk2的表达[1]。在 AG1522 和 HT1080 细胞中，E235（0、1、5 和 10 µM；2 小时）增强 p-p53 的表达 [1]。HT1080 细胞在暴露于 E235（0、0.5、1、5 和 10 µM；0.5 小时）时，γ-H2AX 的表达呈剂量依赖性增加 [1]。
体外实验表明，E235 对多种癌细胞系具有显著的抗增殖活性。该化合物以浓度依赖的方式降低细胞活力，IC50 值通常在 0.1-10 uM 之间，具体数值取决于癌症类型。从机制上讲，E235 处理（例如，1-10 uM，持续 24-72 小时）可激活整合应激反应 (ISR)，表现为 eIF2α 磷酸化水平升高以及 ATF4 及其下游靶基因（例如，CHOP、ASNS）表达上调。E235 还可诱导 DNA 损伤，表现为 γ-H2AX 聚集灶形成增加以及 DNA 损伤反应蛋白（例如，p53、p21）激活。该化合物可诱导细胞周期阻滞（通常为 G1 期或 S 期）和细胞凋亡，可通过 Annexin V 染色和 caspase-3/7 激活进行检测。一些研究表明，E235 对癌细胞具有选择性，对正常细胞无害，不会伤害健康组织。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，E235 已在多种癌症的临床前异种移植模型中展现出抗肿瘤活性，包括对传统疗法耐药的模型。在小鼠异种移植研究中，口服或腹腔注射 E235（剂量通常为 10-50 mg/kg）可显著抑制肿瘤生长（TGI），与载体对照组相比差异显著。其抗肿瘤作用与肿瘤组织中整合应激反应和 DNA 损伤反应的激活、增殖标志物（Ki67）表达的降低以及细胞凋亡（TUNEL 染色）的增加有关。早期研究表明，E235 可以选择性地靶向肿瘤细胞，同时不损伤健康组织，这为更具靶向性的治疗方法提供了可能。该化合物尚未进入人体临床试验阶段，目前仍处于临床前开发阶段。
|
| 酶活实验 |
一种评估 E235 活性的非细胞（无细胞）方案是将其用作体外研究 ATF4 调控的工具，但通常不进行特定的无细胞结合实验。一种常用的方法是使用无细胞转录-翻译系统来评估该化合物对 ATF4 表达的影响。例如，将含有 ATF4 启动子的荧光素酶报告质粒与 HeLa 细胞核提取物在 30℃ 下孵育 1-2 小时，并加入不同浓度的 E235（0.1-50 uM）。使用荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。或者，也可以在结合实验中使用重组 ATF4 蛋白，但据信 E235 的作用位点位于 ATF4 的上游。为了研究 DNA 损伤反应的激活，可以使用重组 ATM 或 ATR 激酶进行无细胞实验。将 E235 (10-100 uM) 与重组 ATM 激酶、其底物 p53 和 ATP 在 30°C 下孵育 30 分钟。终止反应，并通过 ELISA 或 Western blot 检测磷酸化 p53 (Ser15)。
|
| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： HT1080、B16F10 和 AG1522 细胞。 测试浓度： 0、1、5 和 10 µM。 孵育时间： 4 小时。 实验结果： ATF4 的表达呈剂量依赖性增加。 Western Blot 分析[1] 细胞类型： HT1080 细胞。 测试浓度： 0、0.5、1、5 或 10 µM。 孵育时间： 2、4 或 8 小时。 实验结果： p-eIF2α 的表达随时间和剂量依赖性增加。 细胞增殖实验[1] 细胞类型： HT1080 或 RPMI-8226 细胞。 测试浓度： 1 µM。 孵育时间： 0、8、16 和 24 小时。 实验结果： 显示出抗增殖活性。 细胞活力实验[1] 细胞类型： AG1522 细胞。 测试浓度： 0、0.1、0.5、1 和 10 µM。 孵育时间： 4 天。 实验结果： 以剂量依赖的方式抑制细胞活力。 细胞周期分析[1] 细胞类型： HT1080 细胞和 B16F10 细胞。 测试浓度： 1 µM。 孵育时间： 8、16 和 24 小时。 实验结果： 导致细胞周期停滞于 G2/M 期。 评估 E235 抗增殖活性的体外细胞实验方案采用人癌细胞系，例如 HCT116（结肠癌）、HeLa（宫颈癌）或 A549（肺癌）。将细胞以 5×103 个/孔的密度接种于 96 孔板中，培养基为含 10% FBS 和 1% 青霉素/链霉素的 DMEM 或 RPMI-1640，置于 37℃、5% CO2 的培养箱中培养。过夜培养后，用不同浓度的 E235（0.01-50 uM）处理细胞 48-72 小时。采用 MTT 法（每孔加入 10 uL 浓度为 5 mg/mL 的 MTT 溶液，37℃ 孵育 4 小时，然后加入 100 uL 溶解缓冲液，在 570 nm 波长处测定吸光度）或 CellTiter-Glo 发光法检测细胞活力。 IC50 是通过绘制细胞存活率百分比与 E235 浓度的 log10 值关系图计算得出的。对于机制研究，将细胞用 E235 (1-10 uM) 处理 24 小时，收集细胞，并通过蛋白质印迹法（ATF4、CHOP、eIF2α-P、γ-H2AX、p53、p21）、流式细胞术（细胞周期和 Annexin V 凋亡检测）和 qRT-PCR（ISR 靶基因的表达）进行分析。 |
| 动物实验 |
本研究采用体内动物实验方案评估E235的抗肿瘤活性，使用雌性NCr nu/nu小鼠（6-8周龄）的人源肿瘤异种移植模型。将HCT116结肠癌细胞（5×10⁶个细胞溶于0.1 mL PBS，PBS与Matrigel按1:1比例混合）皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约100-150 mm³（通常在植入后7-10天）时，将小鼠随机分为治疗组（每组n=8-10）。E235配制于合适的溶剂中（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45%生理盐水），每日一次口服或腹腔注射，剂量分别为10、25或50 mg/kg。溶剂对照组注射等体积的溶剂。阳性对照组可接受标准化疗药物（例如，5-氟尿嘧啶或顺铂）。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积，并按长度×宽度²/2计算。监测体重作为毒性指标。研究结束时（通常为21-28天），处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行组织学（H&E染色）、免疫组织化学（Ki67、cleaved caspase-3）和蛋白质印迹（ATF4、CHOP、γ-H2AX）分析。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
由于E235仍处于临床前阶段，其药代动力学（PK）数据尚未公开。根据其化学性质（分子量484.59，LogP值估计约为3-4），E235可能具有中等的口服生物利用度和良好的血浆稳定性。在体内研究中，该化合物通常配制成DMSO、PEG300、Tween-80和生理盐水的混合物（例如，10:40:5:45），或配制成0.5%羧甲基纤维素（CMC）溶液用于口服给药。小鼠口服或腹腔注射后，预计该化合物将在1-2小时内达到血浆峰浓度（Cmax）（Tmax）。消除半衰期（t½）可能在2-6小时范围内。目前尚未发表详细的ADME（吸收、分布、代谢、排泄）研究。研究人员应在特定的实验条件下自行开展稳定性及药代动力学研究。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于E235仍处于临床前开发阶段，其正式毒理学数据尚未公开。在动物研究（例如异种移植模型）中，已报道E235在治疗剂量（10-50 mg/kg）下耐受性良好，已发表的研究未观察到明显的体重减轻或明显的毒性症状。预计该化合物在推荐浓度下可安全用于研究，但应始终遵循标准的实验室安全预防措施（手套、实验服、护目镜）。E235仅供研究使用，不得用于人体治疗或诊断。该化合物应以干燥粉末的形式储存在-20℃下，避光防潮。在此条件下，其至少可稳定保存1-2年。避免吸入、摄入和直接皮肤接触。尚未有长期致癌性或生殖毒性研究的报道。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
E235 是一种在研小分子，可通过调节激活转录因子 4 (ATF4) 的表达来激活整合应激反应 (ISR) 和 DNA 损伤反应信号通路。它已显示出抗增殖活性，并具有治疗多种癌症（尤其是对传统疗法耐药的癌症）的潜力。截至 2026 年，E235 仍处于临床前阶段，尚未获得 FDA、EMA 或其他监管机构的批准用于临床。它尚未进入人体临床试验（I/II/III 期）。该化合物仅供研究使用，是研究癌症及其他疾病背景下 ATF4 生物学、整合应激反应和 DNA 损伤信号传导的重要工具。其纯度通常 ≥95%，以固体形式供应。
|
| 分子式 |
C28H25FN4OS
|
|---|---|
| 分子量 |
484.587708234787
|
| 精确质量 |
484.173
|
| CAS号 |
891894-69-2
|
| PubChem CID |
22523776
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
6.4
|
| tPSA |
77.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
35
|
| 分子复杂度/Complexity |
720
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C1CN(CCC1NC(=O)C2=CC3=C(C=C2)N4C=C(N=C4S3)C5=CC=C(C=C5)F)CC6=CC=CC=C6
|
| InChi Key |
SNVVZJBHCSPRGY-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C28H25FN4OS/c29-22-9-6-20(7-10-22)24-18-33-25-11-8-21(16-26(25)35-28(33)31-24)27(34)30-23-12-14-32(15-13-23)17-19-4-2-1-3-5-19/h1-11,16,18,23H,12-15,17H2,(H,30,34)
|
| 化学名 |
N-(1-benzylpiperidin-4-yl)-2-(4-fluorophenyl)imidazo[2,1-b][1,3]benzothiazole-6-carboxamide
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 10 mg/mL (20.64 mM)
H2O: < 0.1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1 mg/mL (2.06 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0636 mL | 10.3180 mL | 20.6360 mL | |
| 5 mM | 0.4127 mL | 2.0636 mL | 4.1272 mL | |
| 10 mM | 0.2064 mL | 1.0318 mL | 2.0636 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
