HKPerox-1

目录号: V67129 纯度: ≥98%
HKPerox-1是一种高灵敏度的绿色荧光探针,专门检测活细胞中的H2O2。
HKPerox-1 CAS号: 2240163-05-5
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
HKPerox-1 是一种高灵敏度的绿色荧光探针,可特异性检测活细胞中的 H2O2。其最大激发波长和发射波长分别为 520 nm 和 543 nm。
HKPerox-1 是一种高灵敏度的绿色荧光探针,用于特异性检测活细胞中的过氧化氢 (H2O2)。其最大激发波长和发射波长分别为 520 nm 和 543 nm。CAS 号:2240163-05-5,分子式:C40H30N2O11,分子量:714.67。
生物活性&实验参考方法
靶点
Hydrogen peroxide (H2O2) is the primary molecular target. The probe is designed for the selective detection of H2O2 with excellent selectivity and sensitivity, enabling molecular imaging of endogenous H2O2 in living cells.
体外研究 (In Vitro)
1.1 配制 HKPerox-1 工作液:将 1 mg HKPerox-1 用 140 μL 无水 DMF 稀释,配制成 10 mM 的储备液。建议将 HKPerox-1 储备液分装后避光保存于 -20°C 或 -80°C。1.2 配制工作液:配制 1-10 μM 的 HKPerox-1 工作液时,可使用温热的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储备液。注意:请根据实际情况调整 HKPerox-1 工作液的浓度,以便随时使用。2. 细胞染色(悬浮细胞):2.1 离心细胞,加入 PBS,洗涤两次,每次 5 分钟。细胞浓度为 1 × 10⁶ 个/mL。2.2 加入 1 mL HKPerox-1 工作液后,室温静置 5 至 30 分钟。 2.3 以 400 g 离心 3-4 分钟后,弃去上清液。2.4 加入 PBS,用 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。2.5 将细胞重悬于 1 mL 无血清培养基或 PBS 中,使用流式细胞仪或荧光显微镜观察细胞。3.3 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上进行细胞标记(贴壁细胞)。3.2 将盖玻片从培养基中取出,用吸液器吸去多余的培养基。3.3 加入 100 μL 染料工作液,轻轻摇晃使细胞完全浸没染料,然后静置 5-30 分钟。3.4 吸出染料工作液,用培养基洗涤 2-3 次,每次 5 分钟,然后使用流式细胞仪或荧光显微镜进行观察。
在无细胞检测中,HKPerox-1 对 H2O2 表现出优异的选择性和灵敏度,优于其他活性氧 (ROS)。与 H2O2 反应后,该探针发生特定的化学转化,产生强烈的荧光增强信号。
体内研究 (In Vivo)
目前尚无该化合物的具体体内活性数据。HKPerox-1 是一种高选择性的绿色荧光探针,可用于活细胞内源性 H2O2 的实时成像。类似的探针也用于小型动物模型中氧化应激的成像。
酶活实验
标准实验方案包括将HKPerox-1(例如,5-10 uM)与不同浓度的H2O2在缓冲溶液(例如,pH 7.4的PBS缓冲液)中于37℃孵育5-30分钟。然后用荧光分光光度计测量荧光强度(激发/发射波长:520/543 nm)。通过与其他活性氧/活性氮(ROS/RNS)的对比测试来验证其选择性。
细胞实验
细胞成像的一般流程包括:将细胞(例如 RAW264.7 巨噬细胞)接种于共聚焦培养皿中,并在 37℃ 下用 HKPerox-1(例如 1-20 uM)孵育 30 分钟。之后,洗涤细胞以去除过量的探针,并用 H2O2 供体(例如 50-200 uM H2O2)或氧化应激诱导剂(例如佛波醇肉豆蔻酸酯,PMA)处理。使用共聚焦显微镜进行荧光成像。对照组可预先用抗氧化剂(例如 N-乙酰半胱氨酸)处理以抑制信号。
动物实验
典型的体内成像方案包括将优化浓度的HKPerox-1通过静脉或腹腔注射到活体动物模型中。经过适当的循环时间(例如30分钟至2小时)后,将动物置于体内成像系统下,以监测H2O2诱导的荧光。
药代性质 (ADME/PK)
小分子探针的通用药代动力学特性不适用。HKPerox-1 可用于体内实验,可溶于含 1-5% DMSO 的 PBS 缓冲液或生理盐水中。用于细胞实验时,通常使用 DMSO 配制储备液(例如,10 mM)。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
成像探针的总体毒性被认为较低。据报道,HKPerox-1(1-20 μM;24 小时)对 RAW264.7 巨噬细胞无毒性。这表明其在工作浓度下具有良好的生物相容性。
参考文献

[1]. Trends Cell Biol. 2007 Sep;17(9):422-7. doi: 10.1016/j.tcb.2007.07.009. Epub 2007 Sep 4.

[2]. Tandem Payne/Dakin Reaction: A New Strategy for Hydrogen Peroxide Detection and Molecular Imaging. Angew Chem Int Ed Engl. 2018 Aug 6;57(32):10173-10177.

其他信息
HKPerox-1 是一种用于研究 H2O2 在氧化应激、氧化还原信号传导、炎症以及包括癌症、神经退行性疾病和心血管疾病在内的多种疾病中的作用的研究工具。其高灵敏度使其能够检测细胞在正常生理条件下或受到刺激后产生的内源性 H2O2。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C40H30N2O11
分子量
714.673011302948
精确质量
714.184
CAS号
2240163-05-5
PubChem CID
162640794
外观&性状
Yellow to orange solid powder
LogP
6
tPSA
169
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
11
可旋转键数目(RBC)
10
重原子数目
53
分子复杂度/Complexity
1280
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C1C2=CC=CC=C2C2(C3=CC=C(N(C)C(=O)OCC4C=CC(C=O)=C(O)C=4)C=C3OC3=CC(N(C)C(=O)OCC4C=CC(C=O)=C(O)C=4)=CC=C23)O1
InChi Key
WOSPPMBMPHNEFP-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C40H30N2O11/c1-41(38(48)50-21-23-7-9-25(19-43)33(45)15-23)27-11-13-31-35(17-27)52-36-18-28(42(2)39(49)51-22-24-8-10-26(20-44)34(46)16-24)12-14-32(36)40(31)30-6-4-3-5-29(30)37(47)53-40/h3-20,45-46H,21-22H2,1-2H3
化学名
(4-formyl-3-hydroxyphenyl)methyl N-[6'-[(4-formyl-3-hydroxyphenyl)methoxycarbonyl-methylamino]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3'-yl]-N-methylcarbamate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMF: 50 mg/mL (69.96 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.50 mM) = in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。=

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配方 3 中的溶解度: 1.25 mg/mL (1.75 mM) in 10% DMF 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。


配方 4 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (1.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMF 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.3992 mL 6.9962 mL 13.9925 mL
5 mM 0.2798 mL 1.3992 mL 2.7985 mL
10 mM 0.1399 mL 0.6996 mL 1.3992 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们