DCIP hydrate sodium (Dichlorophenylindophenol hydrate sodium; DCPIP hydrate sodium; Indochlorophenol hydrate sodium)

目录号: V68941 纯度: ≥98%
DCIP 水合钠是一种生化化合物,可用作生物医学研究的生物材料或有机/化学试剂。
DCIP hydrate sodium (Dichlorophenylindophenol hydrate sodium; DCPIP hydrate sodium; Indochlorophenol hydrate sodium) CAS号: 283164-79-4
产品类别: Biochemical Assay Reagents
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产品描述
DCIP水合钠是一种生化化合物,可用作生物材料或生物医学研究中的有机/化学试剂。
二氯苯基靛酚水合钠(DCIP水合物钠,也称DCPIP或2,6-二氯酚靛酚钠盐水合物,CAS号283164-79-4)是一种蓝色氧化还原指示剂,广泛应用于生物化学和分析化学领域。该化合物在pH 7.0时相对于标准氢电极(SHE)的氧化还原电位为+217 mV。氧化态下呈深蓝色,还原后变为无色。这一特性使其成为优良的电子受体,并可作为研究氧化还原反应和酶活性(特别是脱氢酶和还原酶)的底物。常见应用包括通过滴定法测定维生素C(抗坏血酸)浓度、测定线粒体电子传递链复合物I(NADH脱氢酶)活性以及测定植物类囊体膜中光系统II的活性。钠盐水合物形式可提高其水溶性。该化合物的分子式为 C12H₈Cl2NNaO3(分子量 308.09 g/mol)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Aminoimidazole carboxamide ribonucleotide transformylase/inosine monophosphate cyclohydrolase (ATIC)[1]
The primary biological targets of DCIP hydrate sodium are enzymes that catalyze reduction-oxidation reactions, including NADH dehydrogenase (Complex I of the mitochondrial electron transport chain), succinate dehydrogenase (Complex II), and various other flavin-dependent oxidoreductases. In photosynthesis research, DCIP acts as an artificial electron acceptor for photosystem II (PSII), accepting electrons from the primary electron acceptor QA. The compound also targets ascorbate (vitamin C) via direct chemical reduction. It does not bind to G protein-coupled receptors or protein kinases; its target class is redox enzymes.
体外研究 (In Vitro)
利用DCIP进行的体外活性测定,通过分光光度法在600 nm处监测蓝色染料还原为无色形式的速率(pH 7.0时ε = 21 mM-¹ cm-¹)。600 nm处吸光度随时间降低对应于还原反应。对于复合物I(NADH:泛醌氧化还原酶),DCIP作为人工电子受体:NADH + H⁺ + DCIP(蓝色)→ NAD⁺ + DCIPH2(无色)。活性测定在线粒体制剂或纯化酶中进行。对于抗坏血酸的定量,与样品混合后蓝色消失的程度与维生素C浓度成正比。
体内研究 (In Vivo)
DCIP水合钠不作为治疗药物使用;因此,不适用于体内动物研究。然而,该化合物可用于离体组织分析。例如,在大鼠缺血再灌注损伤模型中,可使用DCIP作为电子受体,评估心脏或脑匀浆中线粒体复合物I和II的活性。将分离的线粒体(50-100微克蛋白)与NADH和DCIP一起孵育,并测量A600值的降低。活性降低与氧化损伤相关。由于DCIP并非药物,因此无法测量其药效学效应。
酶活实验
使用DCIP测定NADH脱氢酶(复合物I)活性的标准方案:配制反应缓冲液,其中包含50 mM磷酸钾(pH 7.5)、1 mM KCN(抑制细胞色素c氧化酶)、2 ug/mL抗霉素A(抑制复合物III)和100 uM DCIP。加入10-50 ug线粒体蛋白或5-25 ug纯化酶。加入100 uM NADH(终浓度)启动反应。在25℃下,记录600 nm处2-5分钟的吸光度下降值。一个活性单位定义为在25℃下每分钟还原1 umol DCIP。设置不含NADH的空白对照和鱼藤酮(10 uM,复合物I抑制剂)对照。
细胞实验
DCIP通常不用于细胞活力或增殖检测,因为它是一种氧化还原染料,会与电子传递链相互作用。然而,基于细胞的检测方法可以测量NADH驱动的DCIP还原。一个典型的实验方案是:将细胞(例如HEK293、HepG2)接种于96孔板中(每孔20,000个细胞)。第二天,移除培养基,用PBS洗涤细胞,加入100 uL检测缓冲液(50 mM Tris-HCl pH 7.5、0.1% Triton X-100、100 uM DCIP、1 mM KCN)。加入NADH至终浓度为100 uM,并使用酶标仪在600 nm处测量10分钟内的吸光度。或者,也可以用测试化合物(例如线粒体毒素)预处理细胞,以评估其对脱氢酶活性的影响。对于细胞活力检测,MTT或刃天青(Alamar Blue)优于DCIP。
动物实验
动物组织匀浆分析:将大鼠或小鼠安乐死,迅速取出组织(例如脑、心、肝、肾),置于冰冷的组织分离缓冲液(250 mM 蔗糖、10 mM Tris-HCl pH 7.4、1 mM EDTA)中。匀浆后,通过差速离心分离线粒体。将线粒体沉淀重悬于缓冲液中,测定蛋白质浓度。活性测定时,取 10-20 μL 线粒体悬液(20-50 μg 蛋白质)加入到装有 1 mL 测定缓冲液(50 mM KPi pH 7.5、0.5 mM KCN、100 μM DCIP)的比色皿中。测定基线后,加入 NADH(100 μM),记录 600 nm 处吸光度的线性下降。加入鱼藤酮(10 μM)作为复合物 I 特异性活性的对照。除测定(室温)外,所有步骤均在 4°C 下进行。
药代性质 (ADME/PK)
由于DCIP水合物钠并非药物,因此目前尚无其药代动力学数据。若在体内给药,DCIP很可能被内源性还原剂(例如抗坏血酸、谷胱甘肽)迅速还原为无色形式,并从循环中清除。它不能被胃肠道完整吸收。还原形式(DCIPH2)极不稳定,很可能被迅速氧化或代谢。目前尚未有关于其口服生物利用度、半衰期、分布容积或清除率的报道。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
二氯异丙醇钠水合物是一种刺激物,可能引起皮肤和眼睛刺激。根据其化学结构(二氯苯酚衍生物),它具有潜在毒性;游离苯酚已知具有毒性。根据全球化学品统一分类和标签制度(GHS),该化合物未被列为致癌物、致突变物或生殖毒素。尚未测定急性经口LD50,但氯代苯酚在大鼠中的LD50值通常在500-4000 mg/kg之间。避免吸入粉末和直接接触皮肤。在通风橱内使用,并佩戴适当的个人防护装备(手套、实验服、护目镜)。如不慎接触,请立即用水冲洗。
其他信息
DCIP水合钠并非药物,也未获得任何临床或监管部门的批准。它仅作为实验室试剂用于研究用途。然而,其衍生物DPIP(钠盐)在教学实验室中用于光合作用测量(希尔反应)和维生素C滴定。该化合物也用于食品科学中检测还原剂和防腐剂。在药物研发中,DCIP可用于筛选针对神经退行性疾病(例如帕金森病)的药物研发项目中复合物I的抑制剂,这些疾病与线粒体功能障碍有关。目前尚无任何已获批准的药物基于DCIP本身。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H8CL2NNAO3
分子量
308.0926
精确质量
306.977
CAS号
283164-79-4
PubChem CID
23676747
外观&性状
Brown to black solid powder
tPSA
53.5
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
19
分子复杂度/Complexity
400
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1=CC(=CC=C1N=C2C=C(C(=O)C(=C2)Cl)Cl)[O-].O.[Na+]
InChi Key
XHSOLXWCGCVQHE-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C12H7Cl2NO2.Na.H2O/c13-10-5-8(6-11(14)12(10)17)15-7-1-3-9(16)4-2-7;;/h1-6,16H;;1H2/q;+1;/p-1
化学名
sodium;4-[(3,5-dichloro-4-oxocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)amino]phenolate;hydrate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 100 mg/mL (324.58 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (8.11 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.2458 mL 16.2290 mL 32.4580 mL
5 mM 0.6492 mL 3.2458 mL 6.4916 mL
10 mM 0.3246 mL 1.6229 mL 3.2458 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们