IC50: 445 nM (nAChR)[2]
alpha7 nicotinic acetylcholine receptor (alpha7 nAChR) and LDL receptor. COG 133 TFA is a fragment of apolipoprotein E (ApoE) peptide that competes with ApoE holoprotein for binding to the LDL receptor. It also acts as an alpha7 nAChR antagonist with an IC50 of 445 nM (or 720 nM depending on assay conditions). The compound exhibits potent anti-inflammatory and neuroprotective effects via these mechanisms.

体外实验表明，COG 133 TFA 是一种 α7 nAChR 拮抗剂，能够阻断乙酰胆碱和其他激动剂对受体的激活。它与 ApoE 全蛋白竞争结合 LDL 受体。该化合物具有显著的抗炎活性，可降低活化的小胶质细胞和巨噬细胞中促炎细胞因子的产生。此外，它还对暴露于兴奋性毒性、氧化应激或 β-淀粉样蛋白毒性的神经元培养物表现出神经保护作用。其抗炎和神经保护活性的详细 EC50/IC50 值尚未完全公布。

用 COG 133（1 mg/kg；气管内注射；隔天一次；持续 4 周）治疗的小鼠的肺纤维化消退受到损害[3]。

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在体内，COG 133 TFA 已在阿尔茨海默病、创伤性脑损伤和神经炎症的动物模型中进行了研究。它能减少β-淀粉样蛋白斑块负荷，降低胶质细胞活化，改善认知功能，并促进神经元存活。该化合物还能减轻脂多糖（LPS）诱导的神经炎症，并降低脑内促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的水平。作为一种肽类化合物，COG 133 TFA 不易穿过完整的血脑屏障，通常通过脑室内注射或直接注射到脑实质内给药，或采用靶向策略进行全身给药。

用于 COG 133 TFA 的标准无细胞受体结合试验采用大鼠脑皮层或海马组织膜制备物，或稳定表达人 α7 nAChR 的 HEK-293 细胞膜制备物。将膜（20-30 ug 蛋白）与 0.5-2 nM [¹2⁵I]α-银环蛇毒素（或 [3H]甲基乌头碱）以及不同浓度的 COG 133 TFA（0.1-10000 nM）在含有 0.1% BSA 的 50 mM Tris-HCl 缓冲液（pH 7.4）中于室温孵育 2-3 小时。非特异性结合在 10 uM 未标记的 α-银环蛇毒素或 1 mM 尼古丁存在下测定。结合的放射性配体通过预先浸泡在0.5%聚乙烯亚胺中的GF/B滤膜快速过滤分离，随后用冰冷的缓冲液洗涤三次。滤膜结合的放射性通过γ计数或液体闪烁计数法测定。IC50值通过非线性回归计算，Ki值使用Cheng-Prusoff方程推导。COG 133 TFA对α7 nAChR拮抗的IC50值为445 nM。对于LDL受体结合，将表达LDLR的细胞膜与放射性标记的ApoE或LDL孵育，并测定其与COG 133的竞争性结合。对于酶活性测定，COG 133在有效浓度下不会显著抑制胆碱酯酶或其他中枢神经系统酶的活性。

对于使用 COG 133 TFA 进行的细胞实验，将原代小胶质细胞、BV-2 小胶质细胞、SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞或原代皮层神经元接种于 96 孔板中（每孔 20,000-50,000 个细胞），培养基为添加 10% FBS 或 B27 的 DMEM/F-12 或 Neurobasal 培养基，培养 48-72 小时。将 COG 133 TFA 溶解于水或 PBS 中（温和加热以完全溶解），并用培养基稀释至最终浓度为 0.01-100 uM（通常为 0.1-10 uM）。在小胶质细胞（BV-2 或原代小胶质细胞）中进行抗炎检测：细胞用 COG 133 TFA（0.1-10 uM）预处理 1-2 小时，然后用 LPS（100 ng/mL-1 ug/mL）或 β-淀粉样蛋白（1-10 uM，48 小时）刺激。6-24 小时后，收集条件培养基，用于测定 NO（Griess 法，540 nm 吸光度）以及 TNF-α、IL-1β、IL-6 和 IL-10 的 ELISA 检测。收集细胞用于 qPCR（iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA）和 Western blot（iNOS、COX-2、NF-κB p65、p-NF-κB）。 COG 133 TFA 可降低 LPS 诱导的 NO、TNF-α、IL-1β 和 IL-6 的产生。在 SH-SY5Y 细胞或原代皮层神经元中进行神经保护实验时：细胞预先用 COG 133 TFA (0.1-10 uM) 处理 24-48 小时，然后暴露于毒性刺激物：H2O2 (100-500 uM，4-24 小时)、谷氨酸 (1-10 mM，24 小时)、β-淀粉样蛋白 1-42 (5-20 uM，48 小时) 或 NMDA (10-100 uM，24 小时)。细胞活力通过 MTT、CellTiter-Glo 或 LDH 释放法测定。对于细胞凋亡实验，细胞用 Annexin V-FITC/PI 染色，并通过流式细胞术进行分析。对于凋亡标志物的蛋白质印迹分析，细胞在RIPA缓冲液中裂解，并用探针检测裂解型caspase-3、裂解型PARP、Bcl-2和Bax。对于α7 nAChR拮抗作用测定：表达α7 nAChR的细胞（GH4C1或SH-SY5Y细胞）用Fluo-4 AM（2.5 uM，60分钟）进行加载。加入COG 133 TFA（0.1-100 uM）孵育10分钟，然后加入EC80浓度的α7激动剂（乙酰胆碱100 uM、PNU-282987 10 uM或胆碱1 mM），并测量荧光强度。计算抑制百分比。COG 133 TFA对α7受体的拮抗作用的IC50值为445 nM。在LDL受体竞争实验中：用COG 133 TFA（0.1-10 uM）处理表达LDLR的细胞，并加入荧光标记的ApoE或LDL，然后通过流式细胞术或荧光显微镜测量摄取情况。在大多数细胞实验中，COG 133 TFA在0.1-10 uM浓度下有效。

动物/疾病模型： 雄性 C57BL/6 小鼠（6 周龄）灌注博来霉素[3]
剂量： 1 mg/kg
给药途径： 管内给药；隔日一次；持续 4 周
实验结果： 确实抑制了肺纤维化的消退。

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COG 133 TFA 的体内动物研究通常使用雄性 C57BL/6 小鼠（20-30 g）或 Sprague-Dawley 大鼠（200-300 g），主要研究阿尔茨海默病、创伤性脑损伤 (TBI) 和神经炎症模型。COG 133 TFA 溶于无菌生理盐水或 PBS（pH 7.4）。脑室内 (ICV) 给药：小鼠用异氟烷或氯胺酮/赛拉嗪麻醉，在注射前 5-7 天将引导套管植入侧脑室（坐标：前囟后方 -0.5 mm，内外侧 1.0 mm，背腹 2.5 mm）。将 COG 133 TFA（0.5-10 μg/只，溶于 2-5 μL 生理盐水中）以 0.5-1 μL/min 的速率通过微量注射泵进行脑室内注射，针头留置 2-5 分钟以防止回流。对于海马内注射：将小鼠固定于立体定位仪上，将 30 号针头插入海马（前后径 -2.0 mm，左右径 1.5 mm，背腹径 1.8 mm）。在 2-5 分钟内注射 1-5 μg COG 133 TFA（溶于 1-2 μL 生理盐水中）。对于使用渗透泵进行脑室内输注（例如，Alzet 1002 或 1004，0.25-0.5 微升/小时，持续 7-28 天）：将 COG 133 TFA（1-10 微克/微升）注入泵中，并通过脑输注套管皮下植入，目标为侧脑室。对于腹腔内给药：将 COG 133 TFA（1-20 毫克/公斤）腹腔注射，但脑渗透性有限，因此首选脑室内给药途径。对于阿尔茨海默病模型：（1）Aβ1-42 注射模型：在测试前 7-14 天，将老化的 Aβ1-42（2-5 微克）脑室内或海马内注射。 COG 133 TFA每日脑室内注射（1-5 μg）或通过渗透泵给药，持续7-21天，从Aβ注射前1-3天开始给药。(2) 转基因小鼠模型（APPswe/PS1dE9、5xFAD、Tg2576）：3-12月龄小鼠接受COG 133 TFA脑室内注射或全身给药，持续2-6个月。对于创伤性脑损伤（TBI）模型：在麻醉下进行控制性皮质冲击（CCI）或液体冲击损伤（FPI）。COG 133 TFA在损伤后15-60分钟脑室内注射，然后每日一次，持续3-7天。对于LPS诱导的神经炎症模型：小鼠在第1天接受LPS（5 μg脑室内注射），并在LPS注射前30分钟脑室内注射COG 133 TFA（1-10 μg），然后每日一次，持续3天。行为学评估：莫里斯水迷宫（MWM）——隐藏平台任务（每天4-6次，持续4-5天，最长60秒，记录到达平台的潜伏期），探测试验（60秒内无平台，记录在目标象限停留的时间和穿过平台的次数）。新物体识别（NOR）——习得（5-10分钟，使用2个相同的物体），延迟2-24小时后的保持，辨别指数=（新物体停留时间-熟悉物体停留时间）/总时间。Y型迷宫自发交替——交替百分比=（交替次数）/（总进入次数-2）×100。高架十字迷宫——进入开放臂的次数和在开放臂停留的时间。实验结束时：对动物实施安乐死，迅速解剖大脑。收集海马和皮层组织用于：（1）Aβ水平（Aβ1-40和Aβ1-42的ELISA检测）。 （2）神经炎症标志物：采用ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10；采用免疫组化法检测GFAP和Iba-1；采用Western blot法检测iNOS和COX-2。（3）氧化应激标志物（MDA、GSH、SOD）。（4）α7 nAChR水平和功能。（5）组织学：脑组织切片经甲酚紫染色观察神经元形态，经硫黄素S或刚果红染色观察淀粉样斑块，并分别用GFAP、Iba-1、NeuN和突触素抗体进行染色。COG 133 TFA可减轻动物模型中的淀粉样蛋白病理、神经炎症和氧化应激，并改善认知功能。不同模型的有效剂量和治疗持续时间有所不同。

COG 133 TFA 是一种由 17 个氨基酸残基组成的肽（ApoE133-149，序列来源于 ApoE LDL 受体结合域）。分子量约为 2284 Da。TFA 盐为三氟乙酸盐，可提高其溶解度和稳定性。作为一种肽，COG 133 在血浆和组织中易发生蛋白水解，导致其半衰期较短（在血浆中估计为 30-60 分钟）。它不易穿过完整的血脑屏障 (BBB)，因此脑室内给药是中枢神经系统 (CNS) 研究的首选给药途径。对于全身给药，由于其肽的性质（分子量 >500 Da，极性），该化合物的 CNS 渗透性可能有限。血浆蛋白结合率为中等。主要通过肾脏滤过和蛋白水解清除。尚未报道活性代谢物。对于脑室内给药，该化合物分布于脑脊液和脑实质中，在脑脊液中的半衰期为2-4小时。对于需要穿透血脑屏障的研究应用，可以探索肽修饰（例如，与细胞穿透肽或特洛伊木马抗体偶联）或纳米颗粒制剂，但这些并非标准方法。脑室内给药后，为进行脑脊液和脑组织中的药代动力学分析，需在多个时间点（0.5、1、2、4、8、12、24小时）采集样本，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行分析。标准曲线浓度范围为1-1000 ng/mL，使用人工脑脊液或脑匀浆。计算Cmax、Tmax和半衰期。详细的药代动力学参数尚未完全发表。

COG 133 TFA 的临床前毒性数据有限。在短期啮齿动物研究中，脑室内注射剂量高达 10 μg/只动物时，未报告明显的不良反应或死亡。在较高剂量（>50 μg 脑室内注射）下，可能会出现轻度神经炎症或胶质细胞活化，这是对肽注射的非特异性反应。腹腔注射剂量高达 20 mg/kg 的 COG 133 TFA 未产生明显的毒性迹象。未报告肝毒性或肾毒性。该化合物尚未进行正式的遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。与所有研究用肽一样，应遵循标准的实验室安全操作规程。COG 133 TFA 尚未获准用于人类治疗。

[1]. Apolipoprotein E COG 133 mimetic peptide improves 5-fluorouracil-induced intestinal mucositis. BMC Gastroenterol. 2012 Jul 13;12:35.

[2]. Apolipoprotein E-derived peptides block alpha7 neuronal nicotinic acetylcholine receptors expressed in xenopus oocytes. J Pharmacol Exp Ther. 2006 Feb;316(2):835-42.

[3]. Monocyte-derived alveolar macrophage apolipoprotein E participates in pulmonary fibrosis resolution. JCI Insight. 2020 Mar 12;5(5):e134539.

COG 133 TFA 是载脂蛋白 E (ApoE) 的合成肽片段（ApoE 残基 133-149），可作为 α7 尼古丁乙酰胆碱受体拮抗剂（IC50 为 445 nM），并与 ApoE 全蛋白竞争 LDL 受体结合位点。它具有显著的抗炎和神经保护作用，目前用于阿尔茨海默病、创伤性脑损伤和神经炎症的研究。该化合物尚未进入临床试验阶段。CAS 编号：2828432-37-5。仅限研究使用。

C99H182F3N37O21

2283.73490953445

2283.429

2828432-37-5

COG 133;514200-66-9

163336983

White to off-white solid powder

986

38

32

83

160

4540

17

C(F)(F)(F)C(=O)O.[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C)CC(C)C)(C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N)CC(C)C)CC1NC=NC=1

YRYTWYOGXATSSP-BGJGLIJFSA-N

InChI=1S/C97H181N37O19.C2HF3O2/c1-50(2)40-67(76(100)137)127-89(150)72(45-55(11)12)130-82(143)64(30-23-37-114-95(105)106)122-78(139)60(26-17-19-33-98)120-79(140)62(28-21-35-112-93(101)102)123-87(148)70(43-53(7)8)129-81(142)61(27-18-20-34-99)121-80(141)63(29-22-36-113-94(103)104)124-88(149)71(44-54(9)10)131-90(151)73(46-59-47-111-49-117-59)132-91(152)74(48-135)133-77(138)57(15)118-85(146)69(42-52(5)6)128-83(144)65(31-24-38-115-96(107)108)126-92(153)75(56(13)14)134-84(145)66(32-25-39-116-97(109)110)125-86(147)68(41-51(3)4)119-58(16)136;3-2(4,5)1(6)7/h47,49-57,60-75,135H,17-46,48,98-99H2,1-16H3,(H2,100,137)(H,111,117)(H,118,146)(H,119,136)(H,120,140)(H,121,141)(H,122,139)(H,123,148)(H,124,149)(H,125,147)(H,126,153)(H,127,150)(H,128,144)(H,129,142)(H,130,143)(H,131,151)(H,132,152)(H,133,138)(H,134,145)(H4,101,102,112)(H4,103,104,113)(H4,105,106,114)(H4,107,108,115)(H4,109,110,116);(H,6,7)/t57-,60-,61-,62-,63-,64-,65-,66-,67-,68-,69-,70-,71-,72-,73-,74-,75-;/m0./s1

(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-4-methylpentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-6-amino-N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]hexanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O: 25 mg/mL (10.95 mM)

配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (43.79 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。