| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
- Cdc25 phosphatases (based on the compound's class as a Cdc25 inhibitor, though specific IC50 values for this compound are not provided in this study). [1]
Cdc25 (cell division cycle 25) phosphatases, including Cdc25A, Cdc25B, and Cdc25C. DA 3003-2 is a potent and selective Cdc25 inhibitor that blocks the dephosphorylation and activation of cyclin-dependent kinases (CDKs), leading to cell cycle arrest. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
抗增殖活性：在PC-3人前列腺癌细胞中，DA 3003-2连续作用48小时后，IC50约为5 µM。与同系物NSC 672121（IC50约为10 µM）相比，DA 3003-2的相对IC50低2倍（效力更强）。[1]
- 细胞周期效应：用10 µM DA 3003-2（IC70浓度）处理异步PC-3细胞24小时，可诱导细胞在G2/M期积累。该浓度下的细胞周期分布为：G1期：19.6±1.8%，S期：7.3±0.6%，G2/M期：70.3±1.4%。相比之下，未经处理或DMSO处理的对照细胞中约有52-53%的细胞处于G2/M期。较低浓度（5 µM）并未引起G2/M期细胞积累的显著变化。[1] - 作用机制 - Cdc2过度磷酸化：DA 3003-2可导致细胞周期蛋白B₁和细胞周期蛋白A复合物中Cdc2酪氨酸15 (Tyr¹⁵)位点的过度磷酸化。用10 µM DA 3003-2处理1小时后，这些免疫沉淀复合物中磷酸化Cdc2 (Tyr¹⁵)水平升高。 [1] - 对蛋白表达水平的影响：DA 3003-2处理24小时后，未下调Cdc25A、Cdc25B、Cdc25C、G2/M期细胞周期蛋白（细胞周期蛋白A、细胞周期蛋白B₁）或细胞周期蛋白依赖性激酶（Cdc2、Cdk2）的蛋白表达水平。[1] 在PC-3细胞中，DA 3003-2（0.3-30 µM；48 h）表现出抗增殖作用，IC50值为5 µM[1]。在PC-3细胞中，DA 3003-2（5、10 µM；24、1 h）增强P-Tyr15 Cdc2的表达，并促进细胞周期阻滞于G2/M期[1]。 DA 3003-2 在癌细胞系中显示出抗增殖活性。它能诱导细胞周期停滞于 G2/M 期，并增加 P-tyr15 Cdc2 (CDK1) 的表达，表明其抑制了 CDC25 介导的 CDK 活化。在 20 uM 浓度下，它能使异步 PC-3 前列腺癌细胞停滞于 G2/M 期。该化合物在前列腺癌研究中具有潜在的应用价值。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内研究表明，DA 3003-2 在前列腺癌研究中具有潜在应用价值。它通过抑制 Cdc25 磷酸酶，阻止 CDK1 和 CDK2 的激活，从而导致细胞周期阻滞和肿瘤增殖减少。需要进一步的体内研究来评估其在动物癌症模型（尤其是前列腺癌异种移植模型）中的疗效。
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| 酶活实验 |
对于非细胞检测，将重组人Cdc25B磷酸酶与荧光底物（例如3-O-甲基荧光素磷酸酯（OMFP））在检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，50 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT）中孵育。加入不同浓度（0.5-100 uM）的DA 3003-2。测量荧光释放（激发波长485 nm，发射波长530 nm）以计算针对Cdc25亚型的IC50值。
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| 细胞实验 |
MTT 细胞毒性试验：为确定 PC-3 细胞对 DA 3003-2 和 NSC 672121 的敏感性，进行了微量滴定试验。将 4 x 10³ 个细胞接种于 96 孔微量滴定板中，培养 24 小时，然后持续暴露于 0.3 - 30 µM 的测试化合物中 48 小时。通过分光光度计在 540 nm 处测定 MTT 还原反应的显色反应来检测细胞活力。DA 3003-2 的 IC50 值约为 5 µM。 [1]
- 流式细胞术用于细胞周期分析：将PC-3细胞（5 x 10⁵ 个细胞/皿）接种并培养24小时，然后用DMSO、NSC 672121或DA 3003-2处理。24小时后，用胰蛋白酶消化细胞，用PBS洗涤，并用含碘化丙啶和RNase A的溶液染色。进行流式细胞术分析以确定细胞周期分布。用于诱导G2/M期细胞积累的DA 3003-2浓度为10 µM（IC70浓度）。 [1] - 蛋白质印迹和免疫沉淀：收集经载体或化合物处理的细胞，并在含有 HEPES、Triton X-100、NaCl、甘油、MgCl₂、NaF、EDTA、Na₃VO₄ 和蛋白酶抑制剂的缓冲液中裂解。离心后测定蛋白浓度。为免疫沉淀细胞周期蛋白 B₁、细胞周期蛋白 A、Cdc2 和 Cdk2 蛋白，将 2 µg 相应的抗体和 Protein G Sepharose 4B 与 1 mg 裂解液孵育 16 小时。洗涤磁珠后，取等量的蛋白进行 SDS-PAGE 电泳分离，并将蛋白转移至硝酸纤维素膜。使用化学发光检测系统检测免疫复合物。为了研究 Cdc2 的磷酸化，细胞用 5 或 10 µM 的 DA 3003-2 或 20 µM 的 NSC 672121 处理 1 小时，然后裂解细胞，并用抗细胞周期蛋白 B₁ 或抗细胞周期蛋白 A 抗体进行免疫沉淀，随后用抗磷酸化 Cdc2 (Tyr¹⁵) 和抗 Cdc2 抗体进行免疫印迹分析。为了研究蛋白质表达水平，细胞处理 24 小时后，用抗 Cdc25A、Cdc25B、Cdc25C、细胞周期蛋白 A、细胞周期蛋白 B₁、Cdc2、Cdk2 和肌动蛋白的抗体对全细胞裂解物进行免疫印迹分析。 [1] 细胞毒性试验[1] 细胞类型： PC-3 细胞 测试浓度： 0.3-30 µM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 显示出剂量依赖性的抗增殖活性，IC50 值为 5 µM。 细胞周期分析[1] 细胞类型： PC-3 细胞 测试浓度： 5、10 µM 孵育时间： 24 小时 实验结果： 诱导细胞周期阻滞于 G2/M 期。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： PC-3 细胞 测试浓度： 5, 10 µM 孵育时间： 1 小时 实验结果： 增加了 P-tyr15 Cdc2 的表达。 对于基于细胞的检测，将癌细胞系（例如，PC-3前列腺癌细胞、HeLa细胞或MCF-7细胞）用DA 3003-2（1-50 uM）处理24-72小时。采用碘化丙啶染色和流式细胞术分析细胞周期分布；G2/M期细胞比例的增加表明Cdc25受到抑制。使用磷酸化特异性抗体通过Western blot检测CDK1在Tyr-15位点的磷酸化水平。通过MTT或克隆形成实验评估细胞增殖。 |
| 动物实验 |
在动物研究中，DA 3003-2 通过腹腔注射或口服给药给荷瘤小鼠（例如，PC-3 前列腺癌异种移植瘤）。剂量通常在文献中已优化（可能为 10-100 mg/kg）。随时间推移测量肿瘤体积。收集肿瘤组织用于分析细胞周期标志物（细胞周期蛋白 B1、磷酸化 CDK1）和增殖（Ki-67）。监测小鼠体重以评估毒性。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
DA 3003-2 通常溶于 DMSO 中用于体外实验。用于体内给药时，可将其配制成含有 DMSO、PEG300、Tween-80 和生理盐水的溶剂。该化合物的分子量为 321.76，分子式为 C15H16ClN3O3。详细的药代动力学参数尚未见广泛报道，但可能在文献中有所记载。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
DA 3003-2 的临床前毒理学数据有限。体外实验表明，其在浓度高达 20 μM 时有效，且无即刻毒性。动物实验中，在治疗剂量下未报告明显的全身毒性。应遵循研究用化学品的标准安全操作规程。本品不适用于人体。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
化学名称和结构：DA 3003-2的化学名称为7-氯-6-(2-吗啉-4-基乙基氨基)喹啉-5,8-二酮。它是NSC 663284 (DA3003-1)的区域异构体，后者也是6-氯-7-(2-吗啉-4-基乙基氨基)喹啉-5,8-二酮。[1]
- 作用机制：DA 3003-2通过引起细胞周期蛋白B₁-Cdc2和细胞周期蛋白A-Cdc2复合物中Cdc2的Tyr¹⁵位点过度磷酸化，诱导异步PC-3前列腺癌细胞发生G2/M期细胞周期停滞。这种过度磷酸化抑制了细胞周期蛋白-Cdk复合物的激活，从而导致细胞周期阻滞。该化合物似乎并非通过下调 Cdc25、细胞周期蛋白或 Cdks 的表达发挥作用。[1] - 潜在的治疗意义：鉴于晚期前列腺癌中 G2/M 期转换激活因子（包括 Cdc25 和细胞周期蛋白 B₁）的表达增加，该研究表明，像 DA 3003-2 这样的 Cdc25 抑制剂可能是治疗雄激素难治性前列腺癌的重要小分子靶点。[1] DA 3003-2 (NSC663285) (CAS: 383907-47-9) 是一种强效且选择性的 Cdc25 磷酸酶抑制剂，可诱导 G2/M 期细胞周期阻滞，并在前列腺癌细胞中显示出抗增殖活性。Cdc25 磷酸酶是极具吸引力的抗癌靶点，DA 3003-2 是研究细胞周期调控和癌症生物学的重要工具。该化合物尚未获批上市。 |
| 分子式 |
C15H16CLN3O3
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|---|---|
| 分子量 |
321.758842468262
|
| 精确质量 |
321.088
|
| 元素分析 |
C, 55.99; H, 5.01; Cl, 11.02; N, 13.06; O, 14.92
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| CAS号 |
383907-47-9
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| PubChem CID |
379078
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| 外观&性状 |
Brown to red solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
478.8±45.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
243.4±28.7 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.2 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.626
|
| LogP |
0.33
|
| tPSA |
71.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
22
|
| 分子复杂度/Complexity |
488
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C(C2C(=CC=CN=2)C(C=1NCCN1CCOCC1)=O)=O
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| InChi Key |
LGTBDMBBPVNDSZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H16ClN3O3/c16-11-13(18-4-5-19-6-8-22-9-7-19)14(20)10-2-1-3-17-12(10)15(11)21/h1-3,18H,4-9H2
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| 化学名 |
7-chloro-6-(2-morpholin-4-ylethylamino)quinoline-5,8-dione
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| 别名 |
DA3003-2; NSC 663285; 383907-47-9; DA-3003-2; NSC-663285; 7-chloro-6-(2-morpholin-4-ylethylamino)quinoline-5,8-dione; DA 3003-2; NSC663285;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 150 mg/mL (466.19 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (11.65 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 37.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1079 mL | 15.5395 mL | 31.0791 mL | |
| 5 mM | 0.6216 mL | 3.1079 mL | 6.2158 mL | |
| 10 mM | 0.3108 mL | 1.5540 mL | 3.1079 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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