| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Proteins (broad substrate specificity). Proteinase K is a serine protease that preferentially cleaves the peptide bond adjacent to the carboxyl group of aliphatic and aromatic amino acids (hydrophobic residues).
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| 体外研究 (In Vitro) |
MTX 与 BSA 之间的酰胺键以及 BSA 结构内的酰胺键均可被蛋白酶 K 酶[2] 断裂。操作指南（以下是我们建议的方案；应根据您的具体需求进行调整；仅供参考）。无需提取 RNA，即可使用蛋白酶 K 直接从接种病毒转运培养基 (VTM) 中检测 SARS-CoV-2 病毒成分，蛋白酶 K 具有更强的蛋白质降解能力[3]。SARS-CoV-2 的 rRTPCR 检测步骤如下：1. 将每个 SARS-CoV-2 样本的 VTM 分装到三个 45 μL EP 管中；2. 加入 2.5 μL (20 mg/mL) 浓缩蛋白酶 K (PK)，使 VTM 中 PK 的最终浓度约为 1 mg/mL；3. 25 °C 孵育 5 分钟；4. 60 °C 孵育 15 分钟。 5. 98℃孵育10分钟，并将样品储存于4℃。6. 取5 µL提取的RNA作为模板进行rRTPCR检测；7. 使用BIORAD CFX96™实时荧光定量PCR仪进行rRTPCR检测，阳性标准为阈值循环数（Ct值）小于40。蛋白酶K可提高痰液样本中回收的核酸浓度，增强其均质化效果和阳性率[4]。甲型流感病毒（IAV）核酸提取步骤如下：1. 将样本分装至三个500 μL EP管中；2. 加入500 μL蛋白酶K缓冲液（0.4 mg/mL）；3. 55℃孵育25分钟，每5分钟涡旋振荡一次； 4. 使用自动化核酸提取系统（上海智江生物技术有限公司）提取 RNA，取 200 μL 样品；5. 评估纯 RNA 产物的 A260/A280 比值，标准范围为 1.8 至 2.0。
蛋白酶K具有广泛的底物特异性和高蛋白水解活性。即使在1% Triton X-100或0.5% SDS等去垢剂存在的情况下，它也能有效降解多种天然蛋白质。其活性范围广，pH值4-12，温度0-75℃，因此在多种生物化学应用中具有重要价值。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
蛋白酶K不作为全身治疗药物使用。然而，人们研究了它在局部环境中降解错误折叠或聚集蛋白的能力。在动物研究中，它已被用于体外组织消化和体内研究蛋白酶抑制剂活性，但由于其免疫原性，其全身应用受到限制。
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| 酶活实验 |
酶活性测定中，蛋白酶K与显色底物（例如琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺 (s-AAPF-pNA)）在测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，5 mM CaCl2）中孵育。底物水解释放对硝基苯胺，通过测量405 nm处的吸光度进行定量。一个酶活性单位定义为每分钟水解1微摩尔底物的酶量。
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| 细胞实验 |
蛋白酶K在细胞培养中用于温和地将贴壁细胞从培养容器中分离出来，是胰蛋白酶的替代方法。它也可用于在提取DNA或RNA之前消化裂解液中的细胞蛋白。在细胞活力检测中，它用于制备细胞裂解液，以便进行后续应用，例如蛋白质降解研究。
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| 动物实验 |
在体内抑制剂研究中，将假定的蛋白酶K抑制剂或对照品注射到动物体内。收集组织，并将提取物与蛋白酶K在显色底物（s-AAPF-pNA）存在下孵育。通过比较蛋白酶活性与未处理的对照组来确定抑制情况。这种体外方法用于评估全身性蛋白酶抑制剂的活性。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
蛋白酶K不作为药物使用，因此其在人体内的药代动力学数据并不具有意义。作为一种酶，它在体内能迅速降解蛋白质，且生物半衰期较短。在体外实验中，短期储存于4℃时稳定，长期储存于-20℃时稳定。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
蛋白酶K在采取标准实验室防护措施的情况下通常被认为是安全的。纯化的蛋白酶K本身并不具有急性毒性。然而，作为一种活性蛋白酶，如果以高浓度注射，则可能造成组织损伤。因此，蛋白酶K仅供研究使用。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
蛋白酶K（CAS号：39450-01-6）的分子量约为28.9 kDa。它通常以冻干粉末的形式供应，活性>30单位/mg蛋白。此外，它也有毕赤酵母表达的重组蛋白形式，可商购获得。它是分子生物学实验室的标准试剂。
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| 分子式 |
C29H27N2O12P
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|---|---|
| 分子量 |
626.5046
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| 精确质量 |
391.2
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| CAS号 |
39450-01-6
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.648
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| LogP |
2.5
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O: 25 mg/mL
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (Infinity mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5962 mL | 7.9808 mL | 15.9617 mL | |
| 5 mM | 0.3192 mL | 1.5962 mL | 3.1923 mL | |
| 10 mM | 0.1596 mL | 0.7981 mL | 1.5962 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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