| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
LNP for siRNA delivery
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 293T、HepG2、A549 和 HeLa 细胞系中，NP-3（0.05–1.6 mg/mL；24 小时）不会减轻细胞毒性；然而，DPPC 和 DMG-PEG 负载的纳米粒子却可以。此外，将 DPPC/DMG-PEG/(lPEI/DNA) 纳米颗粒 (NP-3) 转染 293 细胞后，eGFP 阳性细胞的最大转染效率约为 76%[1]。
DPPC/DMG-PEG/（lPEI/DNA）纳米粒子的合成与表征[1] 将质粒DNA在25mM HEPES缓冲液中稀释至200μg/mL的最终浓度，并将pH调节至6.5。将lPEI以预定浓度溶解在水中以获得最终氮磷比（N/P）为6-16的lPEI/DNA复合物。称重DPPC和Chol并将其溶解在乙醇中，浓度分别为3和1.3mg/mL，形成DPPC/Chol溶液。称取DPPC、Chol和DMG-PEG，分别以3、1.3和1mg/mL的浓度溶解在乙醇溶液中，形成DPPC/DMG-PEG/Chol溶液。制备过程在两步FNC设置上进行（图1）。利用2孔受限撞击射流（CIJ）装置，以25mL/min的流速撞击lPEI溶液和质粒DNA溶液以形成lPEI/DNA纳米颗粒。将获得的lPEI/DNA纳米颗粒通过入口2和3引入3-入口射流FNC装置；并且DPPC/Chol或DPPC/DMG-PEG/Chol溶液以1、5、10、15、20、25或30mL/min的流速（所有三个入口的流速相同）通过入口1引入，以实现用脂质包被lPEI/DNA纳米复合物核心。将产物用水透析过夜以除去乙醇。为了证明FNC方法的优点，还使用了包括蒸发-旋转、水合和过夜孵育的传统制备方法来用DPPC和DMG-PEG涂覆lPEI/DNA纳米复合物。用Malvern Zetasizer NanoZS90测定了未涂覆的lPEI/DNA纳米粒子（NP-1）、DPPC/（lPEI/脱氧核糖核酸）涂覆的纳米粒子（NP-2）和DPPC/DMG-PEG/（lPEI/脱氧核糖核苷酸）涂覆的纳米颗粒（NP-3）的尺寸分布3次。用磷钨酸对纳米粒子样品进行染色；然后在透射电子显微镜下检查形态。为了研究所选纳米颗粒样品的结构，使用了冷冻TEM。简言之，在样品加载之前，对碳涂覆的铜格栅进行40秒的等离子体处理（N2辉光放电）。使用Vitrobot和保持在95%湿度的腔室制备成像栅格。将6μL浓缩样品溶液的等分试样逐滴加入处理过的格栅中，静置1分钟。然后将格栅吸干，并立即放入由液氮预冷的液态乙烷储液器中，在格栅表面形成薄的玻璃冰膜。之后，将格栅转移到低温支架中，并在成像前在液氮温度下保持不超过24小时。在成像期间，低温保持器温度也保持在液氮温度，以防止玻璃化水升华。在100 kV下运行的FEI Tecnai 12 Twin TEM上进行成像。所有图像均由16位2k×2k FEI Eagle底部安装相机或MegaView III广角相机拍摄[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
为了确认 NP-3 的渗透性（口服给药；每只动物 150 μg DNA；单剂量），在分娩后 12、24 和 36 小时腹腔内给予荧光素底物。治疗后12-24小时，NP-3组在肠道、肺和肝脏区域仍然表现出高水平的荧光素酶表达。此外，与 NP-1 或 NP-2 组相比，口服注射后 12 至 24 小时，NP-3 的信号强度增加了 1.5 倍[2]。
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| 细胞实验 |
DPPC/DMG-PEG/（lPEI/DNA）纳米粒子的体外细胞毒性和转染效率[1]
本研究中使用的所有细胞，包括293T（人胚胎肾细胞）、A549（腺癌性人肺泡基底上皮细胞）、HepG2（人肝细胞癌症细胞）和HeLa（人癌症细胞）细胞系，均购自American Type Culture Collection。将所有细胞系在添加有青霉素（100单位/mL）、链霉素（50单位/mL）和胎牛血清（10%）的DMEM培养基中，在37°C、5%CO2气氛的湿润培养箱中孵育。为了评估纳米颗粒的毒性，将细胞以2×105个细胞/mL的密度接种在96孔板中24小时，然后用连续浓度的纳米颗粒处理72小时。之后，将溶解在PBS中的MTT加入到每个孔中。孵育4小时后，去除每个孔中的培养基，改为向每个孔中加入DMSO。然后通过微孔板读取器测量每个孔在570nm处的吸光度。 为了评估纳米颗粒的转染效率，将细胞以1×106个细胞/mL的密度接种在24孔板中24小时。之后，用具有不同N/P比的DPPC/DMG-PEG/（lPEI/DNA）纳米颗粒处理细胞（相当于每孔1μg质粒DNA）并孵育24小时。在荧光显微镜下观察细胞，然后收获细胞并通过流式细胞术进行分析，以基于eGFP阳性细胞的群体确定转染效率。 |
| 动物实验 |
体内荧光成像吸收研究[1]
为了验证DPPC/DMG-PEG/(lPEI/DNA)纳米颗粒的黏液渗透性，我们按照先前描述的方法进行了胃肠道体内吸收研究。简而言之，Balb/c小鼠禁食8小时后，通过灌胃给予NP-1、NP-2或NP-3（质粒DNA用SYTOX Orange标记）。2小时后，处死所有小鼠，收集其小肠并冷冻于OCT包埋剂中。将肠道组织切片、染色，并在共聚焦显微镜（Leica SP8）下观察。 DPPC/DMG-PEG/(lPEI/DNA)纳米颗粒的体内转染效率[1] 为了初步了解体内基因表达谱，我们使用报告基因荧光素酶质粒来监测转染效率。将Balb/c小鼠随机分为三组，分别对应三个纳米颗粒组（NP-1、NP-2和NP-3）。所有纳米颗粒均携带编码荧光素酶的质粒DNA。给药前8小时，所有小鼠仅喂食水。每组小鼠均通过灌胃给予相当于150 μg DNA的纳米颗粒。在腹腔注射荧光素底物后12、24和36小时，使用IVIS Spectrum成像系统对小鼠进行全身成像，分析基因表达情况。36小时后，处死小鼠，并根据我们之前的方案，使用组织匀浆定量转基因表达水平。重复上述步骤，使用另一组Balb/c小鼠，随机分为三组，分别注射NP-1、NP-2和NP-3，这次注射的是编码GLP-1的质粒DNA。分别在注射后12小时和24小时处死小鼠。收集包括肝脏、肺脏和小肠在内的器官用于GLP-1表达分析。 DPPC/DMG-PEG/(lPEI/DNA)纳米颗粒的体内治疗效果[1] BKS-Leprem2Cd479/Nju小鼠（又称db/db小鼠）被用作II型糖尿病模型。为了检测其体内降血糖作用，将db/db小鼠随机分为对照组（PBS）和另外三组，分别灌胃给予含有GLP-1质粒DNA的NP-1、NP-2或NP-3。实验前，小鼠仅喂食水8小时。每隔一天，对照组灌胃PBS溶液，实验组灌胃含有相当于每只小鼠150 μg GLP-1质粒DNA的纳米颗粒。共6天，连续给药3次。小鼠在纳米颗粒给药后12小时自由进食6小时。使用血糖仪每2小时监测一次小鼠的血糖水平（BGL），夜间每6小时监测一次。监测6天后，所有小鼠均被安乐死，并采集血液样本和器官（包括心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠和胰腺）。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
与肠外给药途径相比，口服核酸疗法具有更高的患者依从性和治疗效率，因此是一种很有前景的治疗多种疾病的策略。然而，由于核酸滞留在胃肠道黏液层和上皮屏障中，导致转染效率低下，限制了其成功应用。本文描述了一种克服这一问题并提高口服DNA递送效率的方法，用于治疗2型糖尿病（T2D）。我们使用线性聚乙烯亚胺（lPEI）作为载体，与编码胰高血糖素样肽-1（GLP-1，一种常见的T2D治疗靶点）的质粒DNA形成复合物。然后，我们用1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱（DPPC）和1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇-2000（DMG-PEG）的混合物包覆这些纳米颗粒，使纳米颗粒表面具有亲水性和静电中性。表面修饰的lPEI/DNA纳米颗粒在胃肠道黏液层中表现出更高的扩散性和转运性，并在体外和体内均实现了较高的转染效率。此外，在T2D小鼠模型中，单次给药后，这些修饰的纳米颗粒在肝脏、肺脏和肠道中均表现出超过24小时的高水平GLP-1表达，并且至少在18小时内将血糖水平控制在正常范围内，多次给药后仍能保持可重复的治疗效果。综上所述，这项工作证明了通过简便的表面修饰提高纳米颗粒的黏液渗透性和递送效率，从而实现口服质粒DNA递送治疗T2D的可行性。[1]
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| 分子式 |
C34H66O6
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|---|---|
| 分子量 |
570.884252071381
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| 精确质量 |
570.485
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| CAS号 |
160743-62-4
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| PubChem CID |
10257450
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to light yellow solids at room temperature
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| LogP |
12.3
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| tPSA |
71.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
34
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| 重原子数目 |
40
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| 分子复杂度/Complexity |
539
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
HYXWVUFYXOOASK-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C34H66O6/c1-4-6-8-10-12-14-16-18-20-22-24-26-33(35)39-31-32(30-38-29-28-37-3)40-34(36)27-25-23-21-19-17-15-13-11-9-7-5-2/h32H,4-31H2,1-3H3
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| 化学名 |
[3-(2-methoxyethoxy)-2-tetradecanoyloxypropyl] tetradecanoate
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| 别名 |
160743-62-4; mPEG-Dimyristoyl glycerol; DMG-PEG 2000; DMG-PEG PEG 2000; mPEG-DMG; DMG-PEG PEG5000; DMG-PEG PEG10000; DMG-PEG PEG30000;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 125 mg/mL (49.49 mM)
Ethanol: 100 mg/mL (39.59 mM) H2O: 16.67 mg/mL (6.60 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 10 mg/mL (3.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.99 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.99 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (0.99 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，您可以将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清乙醇储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。 配方 5 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (0.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 6 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (0.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 7 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (0.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，要配制1 mL工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL 澄清DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混匀。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7517 mL | 8.7584 mL | 17.5168 mL | |
| 5 mM | 0.3503 mL | 1.7517 mL | 3.5034 mL | |
| 10 mM | 0.1752 mL | 0.8758 mL | 1.7517 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
DOPE-C8
1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-PA ammonium salt
Lipid PPz-2R1
Chol-mPEG2000
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
