| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CRAC channel 402 nM (IC50) Orai1/Stim1 channels 25 nM (IC50) IL-2
RO2959 monohydrochloride targets the calcium release-activated calcium (CRAC) channel, which is composed of Orai1 (the pore-forming subunit) and STIM1 (the calcium sensor in the endoplasmic reticulum). It is a potent and specific CRAC channel inhibitor with an IC50 of 402 nM. RO2959 mono HCl is also a potent blocker of store-operated calcium entry (SOCE) mediated by Orai1/Stim1 channels with an IC50 of 25 nM. It has an IC50 of 265 nM for SOCE in activated CD4+ T lymphocytes and is a potent inhibitor of human IL-2 production. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
RO2959 对 Orai1 的 IC50 值为 25 nM，对 Orai3 的 IC50 值为 530 nM。RO2959 的 IC50 值为 265 nM，可抑制活化 CD4+ T 淋巴细胞中的储存操纵性钙内流 (SOCE)[1]。作为一种强效的 SOCE 抑制剂，RO2959 可抑制表达 CRAC 的 RBL-2H3 细胞和稳定表达人 Orai1 和 Stim1 的 CHO 细胞中的 IP3 依赖性电流，以及经 TCR 激活或毒胡萝卜素治疗刺激的人原代 CD4+ T 细胞中的 SOCE。当使用 TCR 刺激或混合淋巴细胞反应 (MLR) 刺激 T 细胞时，RO2959 可完全阻断细胞因子生成和 T 细胞增殖[1]。
体外实验表明，RO2959单盐酸盐是一种强效且选择性的CRAC通道抑制剂（IC50 = 402 nM）。它能有效阻断Orai1/Stim1通道介导的胞内钙库操纵性内流（SOCE）（IC50 = 25 nM）。RO2959对活化的CD4+ T淋巴细胞中的SOCE也具有抑制作用，IC50为265 nM。它能有效抑制人IL-2的产生，并能阻断T细胞受体（TCR）触发的基因表达和T细胞功能通路。RO2959对Orai1的IC50为25 nM，对Orai3的IC50为530 nM。此外，它还能强烈抑制表达CRAC的RBL-2H3细胞中的IP3依赖性电流，以及由TCR刺激或thapsigargin处理触发的人原代CD4+ T细胞中的SOCE。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚未发表RO2959单盐酸盐的具体体内活性数据。然而，作为一种强效的CRAC通道抑制剂，它能阻断T细胞活化和IL-2的产生，因此推测其在类风湿性关节炎、多发性硬化症和银屑病等自身免疫性疾病的动物模型中可能有效。T细胞活化在这些疾病中起着关键作用，而RO2959对SOCE的抑制可能减轻T细胞介导的炎症。此外，该化合物还具有用于移植研究以预防移植物排斥的潜力。
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| 酶活实验 |
评估 CRAC 通道抑制的具体方案是在人原代 CD4+ T 细胞或 Jurkat T 细胞中采用毒胡萝卜素诱导的 SOCE 检测。将细胞在含有 2 uM 毒胡萝卜素（用于耗竭内质网钙库）的无钙缓冲液中，于 37℃ 孵育 30 分钟，并加入荧光钙指示剂（例如 Fura-2 AM 或 Fluo-4 AM）。然后将细胞转移至荧光酶标仪或成像系统。记录 60 秒的基线荧光值。加入 RO2959 单盐酸盐（0.1-1000 nM）并孵育 2 分钟。随后加入 CaCl2（2 mM）以启动通过 SOCE 的 Ca2+ 内流。记录细胞内钙浓度的增加值（以 ΔF/F0 表示）。根据浓度-反应曲线计算 SOCE 抑制的 IC50 值（25 nM）。
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| 细胞实验 |
对于体外细胞实验，从健康供体血液中分离人外周血单核细胞 (PBMC)。将 PBMC 以 2×10⁵ 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中。用抗 CD3/CD28 抗体（各 1 ug/mL）刺激细胞以激活 T 细胞受体 (TCR) 信号通路。在刺激的同时加入浓度为 0.1-1000 nM 的 RO2959 单盐酸盐。72 小时后，收集细胞培养上清液。采用 ELISA 法定量检测人 IL-2、IFN-γ 和 TNF-α 的水平。在培养的最后 18 小时加入 [3H]-胸苷（1 uCi/孔），然后进行闪烁计数，以检测 T 细胞增殖。计算抑制 IL-2 产生的 IC50 值。在混合淋巴细胞反应（MLR）中，将来自两名供体的外周血单核细胞（PBMC）进行共培养，并在培养开始时加入RO2959。5-7天后，通过[3H]-胸苷掺入或CFSE稀释流式细胞术评估T细胞增殖情况。
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| 动物实验 |
RO2959 的体内研究方案将采用 T 细胞介导的自身免疫小鼠模型，例如实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE，一种多发性硬化症模型) 或胶原诱导性关节炎 (CIA)。对于 EAE 模型，雌性 C57BL/6 小鼠先用完全弗氏佐剂中的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (MOG35-55) 肽进行免疫，随后注射百日咳毒素。将 RO2959 盐酸盐溶解于合适的溶剂中（例如，10% DMSO/40% PEG300/5% Tween-80/45% 生理盐水），从第 0 天（预防性给药）或临床症状出现时（治疗性给药）开始，每日一次或两次口服 1、3 或 10 mg/kg 的剂量。每日对疾病严重程度进行评分（0-5 分制）。在研究结束时（第 21-28 天），收集脊髓和脑组织进行组织病理学评估，以检测炎症浸润。收集脾细胞，用 MOG 肽进行体外再刺激，并通过 ELISA 或 ELISpot 检测细胞因子产生情况。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无公开的RO2959单盐酸盐的详细药代动力学数据。作为一种小分子CRAC通道抑制剂，在C57BL/6小鼠中进行的标准药代动力学研究将包括静脉注射（1 mg/kg）和口服（5-10 mg/kg）给药。将在多个时间点（0-24小时）采集系列血样。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量分析血浆中RO2959单盐酸盐的浓度。计算关键参数，包括半衰期（T1/2）、最大血药浓度（Cmax）、曲线下面积（AUC0-∞）、清除率和口服生物利用度。预计该化合物具有中等的口服生物利用度，其半衰期适合每日一次或两次给药。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无RO2959单盐酸盐的具体毒理学数据。作为一种CRAC通道抑制剂，RO2959可阻断T细胞活化，其主要安全性问题是免疫抑制，可能导致感染和恶性肿瘤风险增加。此外，RO2959对Orai3的非靶向抑制作用（IC50 = 530 nM）可能对其他细胞类型产生额外影响。标准安全性评估包括体外hERG通道抑制试验、CYP450酶抑制筛选以及为期14天的大鼠重复给药口服毒性研究，以确定最大耐受剂量（MTD）并评估其对免疫功能（例如T细胞依赖性抗体反应）的影响。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RO2959单盐酸盐是一种研究级化学品，尚未获准用于临床。其分子式为C21H20ClF2N5OS，分子量为463.93。它是一种强效且选择性的CRAC通道抑制剂（IC50 = 402 nM），也是Orai1/Stim1通道介导的储存操纵性钙离子内流（SOCE）的强效阻断剂（IC50 = 25 nM）。RO2959单盐酸盐能有效抑制人T细胞活化、IL-2产生和T细胞增殖，使其成为研究自身免疫性疾病和炎症性疾病的重要工具。该化合物储存于-20℃，可溶于DMSO。
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| 分子式 |
C21H20CLF2N5OS
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|---|---|
| 分子量 |
463.931208610535
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| 精确质量 |
463.104
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| CAS号 |
2309172-44-7
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| 相关CAS号 |
RO2959 hydrochloride;1219927-22-6
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| PubChem CID |
45274292
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| 外观&性状 |
Light brown to brown solid powder
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| tPSA |
99.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
655
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
Cl.S1C(C)=CN=C1N1CC(C2C=NC(=CN=2)NC(C2C(=CC=CC=2F)F)=O)=C(C)CC1
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| InChi Key |
GMLSDODALBRLPE-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H19F2N5OS.ClH/c1-12-6-7-28(21-26-8-13(2)30-21)11-14(12)17-9-25-18(10-24-17)27-20(29)19-15(22)4-3-5-16(19)23;/h3-5,8-10H,6-7,11H2,1-2H3,(H,25,27,29);1H
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| 化学名 |
2,6-difluoro-N-[5-[4-methyl-1-(5-methyl-1,3-thiazol-2-yl)-3,6-dihydro-2H-pyridin-5-yl]pyrazin-2-yl]benzamide;hydrochloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 25 mg/mL (53.89 mM)
H2O: < 0.1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.48 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1555 mL | 10.7775 mL | 21.5550 mL | |
| 5 mM | 0.4311 mL | 2.1555 mL | 4.3110 mL | |
| 10 mM | 0.2155 mL | 1.0777 mL | 2.1555 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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