| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BCL6
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| 体外研究 (In Vitro) |
含氯和氟取代吡啶的化合物CCT374705具有最佳的性质平衡，包括增加的溶解度和微粒体清除率，类似于CCT374284[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
我们选择使用Karpas 422异种移植物模型对CCT374705进行疗效研究，在该细胞系中CCT347405具有最强的抗增殖作用。本工作的目的是研究BCL6在体内的抑制作用。为了评估这一点，我们希望确保我们的抑制剂（>IC90）在整个研究中完全覆盖。为了达到这种高水平的持续暴露，该研究采用每天两次50 mg/kg的口服给药方案进行。我们能够通过测量ARID3A mRNA表达的增加来证实靶点与BCL6的结合。PK/PD分析显示CCT374705的游离浓度在给药后12小时内保持远高于游离IC90。然而，与我们之前报道的BCL6降解剂CCT373566的疗效结果类似，仅观察到中等的体内疗效。在优化了CCT374705的体内药代动力学特征后，该化合物是检测BCL6在小鼠模型内疾病中的作用和功能的合适探针[1]。
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| 酶活实验 |
TR-FRET测定[1]
在384孔黑色Proxiplate（Perkin-Elmer）中在测定缓冲液（25mM Hepes pH8、100mM NaCl、0.05%Tween20、0.5mM TCEP、0.05%牛血清白蛋白）中进行测定，所述Proxiplated含有1nM Trx-6xHis-BCL6（内部生产的人BCL6 BTB结构域覆盖氨基酸序列5-129）、300nM BCOR-AF633肽（RSEIISTAPSSWVVPGP Cys-AlexaFluor 633酰胺）和0.5nM抗6xHis-铒隐窝。使用ECHO550声学分配器将DMSO或单独DMSO中的测试化合物添加到孔中，以在0.7%v/v DMSO中得到合适的测试浓度。在室温下孵育2小时后，在具有337nm激光激发、第一发射滤光片APC 665nm和第二发射滤光片Europium 615nm的Envision读板器上读取板，或者在配备有337nm激光激励滤光片、620nm的第一发射滤光片和665nm的第二发射滤光器的Pherastar FSX读板器中读取板。通过将FRET比率标准化为适当的高（DMSO具有所有试剂）和低（DMSO不具有BCL6）对照来计算在每个浓度下的抑制%。IC50值使用GraphPad Prism 6.0或Domatics软件通过将归一化数据拟合到S形四参数逻辑拟合方程来确定。 NanoBRT测定[1] 细胞纳米生物发光共振能量转移（nanoBRET）测定法用于检测BCL6-SMRT（也称为NCOR2）辅压蛋白-蛋白相互作用的抑制作用。将编码全长BCL6和SMRT的DNA插入pFC32K中。NanoLuc和pFC14K。HaloTag载体，分别产生C末端标记的融合蛋白BCL6 nanoLuc和SMRT HaloTag。将HEK293T细胞接种（5x105）在T75组织培养瓶中，48小时后用Fugene 6试剂和编码BCL6 nanoLuc作为供体和SMRT HaloTag作为受体的18µg总DNA质粒以1:25的供体与受体DNA比例进行批量转染。转染后24小时，收集HEK293T细胞，并将其储存在90%FBS和10%DMSO的液氮中。在测定时，使用Echo550声学分配在干燥的384孔NUNC白色测定板中分配化合物（100nL/孔）和NanoBRET 618配体（10nL的1mg/ml储备溶液/孔）。将冷冻转染的HEK293T细胞解冻、离心，并用不含酚红的OptiMEM+4%FBS代替冷冻培养基。将细胞密度调节至3x105个细胞/ml，并将20µL（6000个细胞）接种在每个孔中，每个孔含有试验化合物（0.0125-50µM）的DMSO或DMSO单独溶液和0.5µg/ml NanoBRET 618荧光配体，最终浓度为0.55%v/v DMSO。将细胞在37°C/5%CO2下孵育6小时，然后加入NanoBRET呋嗪底物，得到10µM的最终浓度。在短暂离心后，在配备有LUM/D600双镜、LUM 450/40nm带通滤波器和D605nm长通滤波器的Envision（Perkin-Elmer）读板器上读取板，读取0.2秒以确定BRET比。或者，在配备有BRET模块LP610nm（第一发射滤光片）/450-80nm（第二发射滤光片）的Pherastar FSX上读取板。通过将BRET比率标准化为适当的高和低对照，计算每个试验浓度下的抑制%。使用Graphpad Prism 6.0或Domatics软件通过将归一化数据拟合到S形四参数逻辑拟合方程来确定化合物IC50。 |
| 细胞实验 |
将细胞以2500个细胞/孔的密度接种在96孔培养板中，接种在补充有10%FBS的RPMI-1640培养基中。首先使用Echo 550声学分配器将化合物分配到96孔U形底板中，然后在RPMI-1640%培养基中稀释并转移到细胞上。用8种浓度的化合物处理细胞，一式两份，范围从1.07 nM到10µM，最终DMSO浓度为0.1%，最终体积为100µl。将细胞与化合物孵育14天，第3、7和10天的培养基变化如下：制备新鲜的96孔细胞培养板，其中含有100µl培养基加上测定浓度的化合物（第10天使用白色平板以优化发光测量）。将含有细胞的测定板涡旋混合，并使用Coulter Z2细胞计数器计数一个对照孔中的细胞密度。计算对照孔中含有2500个细胞的培养基的体积，并将该体积的细胞从测定板的每个孔转移到含有化合物的新鲜板的相应孔中。14天后，将CellTiter-Glo reagen以1:2的比例添加到测定板的每个孔中的培养基中，在摇板器上混合，然后在室温下孵育10分钟。使用Envision读板器测量发光，并计算在每种化合物浓度下与单独的DMSO相比的相对发光。GI50是使用Dotmatics中的4参数曲线拟合来确定的[1]。
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| 动物实验 |
体内药代动力学研究[1]
给药前，动物在实验室条件下适应至少1周，并可自由摄取食物和水。化合物通过静脉注射或口服给药（小鼠，0.1 mL/10 g，溶于10% DMSO、5% Tween 20的生理盐水中）；在给药后6或24小时内，于7或8个时间点从尾静脉采集肝素化毛细管血样，并与标准曲线和加入对照血液的质控样品一起冷冻保存。样品用含有内标的水：甲醇混合物进行复溶，方法如前所述（Roberts等，2016）。离心后，提取物经0.1%甲酸和甲醇梯度分离后，使用Waters Xevo TQ-S或Sciex QTrap6500质谱仪，在Phenomenex Kinetex C18 UPLC色谱柱（50 × 2.1 mm，2.6 μM）上进行ESI-LCMS/MS分析，通过监测前体离子和产物离子的多反应监测（MRM）。定量采用外标法。质控样品浓度均在标称浓度的20%以内。药代动力学参数采用Phoenix Pharsight非房室模型分析软件（型号200和201）6.3版进行非房室模型分析。所有参数均基于6小时内的时间点计算。 CCT374705的制剂[1] SEDA公司开发了一种适用于较高浓度（> 5 mg/mL）CCT374705的溶液制剂，具体见表S4。将CCT374705溶解于预定体积的DMSO中，并在40℃下加入预定体积的Kolliphor HS15。短暂涡旋混合后，在40℃下加入预定体积的PEG400。再次短暂涡旋混合后，加入预定体积的HPMC水溶液（1.25%，粘度40-60cp级）。涡旋混合后，在40℃下超声处理约45-60分钟。以相同方式制备不含化合物的完整载体。制剂在室温下最多保存3-4天。化合物和赋形剂溶液均采用灌胃针经口给药（每只20克小鼠0.2毫升）——小鼠单独称重，并据此调整给药体积。 体内药效学（PK/PD）和疗效研究[1] 小鼠Karpas 422异种移植模型的制备。使用无血清RMPI-1640培养基和等体积的Matrigel®（两者均预冷至4℃）制备Karpas 422B细胞，最终浓度为5×10⁷个细胞/毫升。将细胞以每200微升10⁷个细胞的浓度皮下注射到雌性SCID小鼠体内，单点注射。注射后三周，随机选择荷瘤小鼠（平均直径0.5厘米²±0.1厘米），并将其分为治疗组和对照组（每组n=10）。 CCT374705 和载体的配制方法如补充实验 5.2 所述：CCT374705 (50 mg/kg) 和载体 (0.2 mL/20g 体重) 口服给药，每天两次，间隔约 12 小时，持续 35 天。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
B细胞淋巴瘤6 (BCL6) 是一种转录抑制因子，也是弥漫性大B细胞淋巴瘤 (DLBCL) 的致癌驱动因子。本文报道了我们之前报道的用于抑制BCL6的三环喹啉酮系列化合物的优化。我们旨在提高近期发表的降解剂CCT373566的非降解异构体CCT373567的细胞活性和体内暴露量。我们抑制剂的主要局限性在于其较高的拓扑极性表面积 (TPSA)，导致外排率增加。降低分子量使我们能够在不显著降低溶解度的情况下去除极性并降低TPSA。在药代动力学研究的指导下，我们对这些性质进行了仔细优化，最终发现了CCT374705，一种具有良好体内特性的强效BCL6抑制剂。在淋巴瘤异种移植小鼠模型中，口服给药后观察到了一定的体内疗效。[1]
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| 分子式 |
C21H18CLF3N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
450.841434001923
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| 精确质量 |
450.10703
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| CAS号 |
2640647-90-9
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| PubChem CID |
156276733
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
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| LogP |
4.2
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| tPSA |
66.5Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
765
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
ClC1C(=NC=CC=1NC1C=CC2=C(C=1)C1=C(C(N2C)=O)OCC([C@H](C2CC2)N1)(F)F)F
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| InChi Key |
MCRHRRIGPAVFNY-SFHVURJKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H18ClF3N4O2/c1-29-14-5-4-11(27-13-6-7-26-19(23)15(13)22)8-12(14)16-17(20(29)30)31-9-21(24,25)18(28-16)10-2-3-10/h4-8,10,18,28H,2-3,9H2,1H3,(H,26,27)/t18-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-10-[(3-chloro-2-fluoropyridin-4-yl)amino]-2-cyclopropyl-3,3-difluoro-7-methyl-2,4-dihydro-1H-[1,4]oxazepino[2,3-c]quinolin-6-one
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| 别名 |
CCT374705; 2640647-90-9; SCHEMBL23248186
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (221.81 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.55 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.55 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2181 mL | 11.0904 mL | 22.1808 mL | |
| 5 mM | 0.4436 mL | 2.2181 mL | 4.4362 mL | |
| 10 mM | 0.2218 mL | 1.1090 mL | 2.2181 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Lalistat 2
D-(-)-3-Phosphoglyceric acid disodium (3-Phospho-D-glyceric acid disodium)
STC-15
TSR-033
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