| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TNFα (tumor necrosis factor alpha); CD40 25 nM (IC50)
The primary molecular target of TNF-alpha-IN-2 is the tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) protein itself. By binding to the TNFalpha homotrimer, the compound induces a specific structural distortion. This altered conformation prevents the proper signaling cascade that would normally occur when TNFalpha binds to its cognate receptors, TNF receptor 1 (TNFR1) and TNF receptor 2 (TNFR2). The resulting aberrant signal transduction is the basis for its anti-inflammatory effects. Unlike traditional TNFalpha inhibitors that act as receptor antagonists or blocking antibodies, TNF-alpha-IN-2 modulates the signaling pathway by directly modifying the cytokine's structure, representing a unique mechanism of action. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
TNF-α-IN-2（化合物 42）（30 分钟）的 IC50 为 30 nM，可抑制可溶性 TNFα 产生的 HUVEC 中 E-选择素的表达 [1]。
体外实验表明，TNF-α-IN-2 是一种高效的 TNFα 活性抑制剂，其在 HTRF 检测中的 IC50 值为 25 nM。该检测方法用于评估 TNFα 与 TNFR1 相互作用的破坏程度。该化合物对其他细胞因子（例如 IL-6）无生物活性，表明其具有选择性。已知 TNF-α-IN-2 与 TNFα 的结合会破坏 TNFα 三聚体的结构，从而导致异常信号复合物的形成。具体的细胞 EC50 值会因细胞类型和检测方法的不同而有所差异，但该化合物始终表现出对下游信号通路（例如 NF-κB 激活和其他炎症介质的产生）的高效阻断作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
小鼠的TNF诱导的IL-6可被TNF-α-IN-2（5-25 mg/kg；TNF刺激前1小时口服）抑制[1]。在小鼠中，TNF-α-IN-2（2-10 mg/kg；口服，每日两次，持续10天）呈剂量依赖性地降低白细胞表面受体水平、炎症细胞因子水平和临床评分[1]。静脉注射0.5 mg/kg TNF-α-IN-2的小鼠表现出较长的半衰期（6.2小时）、较低的清除率（6.6 mL/min·kg）和稳态分布容积（3.2 L/kg）[1]。口服给药后，小鼠体内TNF-α-IN-2（2 mg/kg）表现出较高的生物利用度（58%）、最大血药浓度（Cmax，0.47 μM）和总药时程曲线下面积（AUCtot，5.9 μM·h）[1]。
在体内，TNF-α-IN-2 已在小鼠炎症模型中展现出口服活性。研究人员测试了其降低小鼠白细胞表面受体（炎症的关键标志物）的能力。在一项典型的研究中，口服给予 0.5 mg/kg 等剂量的 TNF-α-IN-2 可产生可测量的效果。该化合物能有效降低标准模型中的炎症反应，例如脂多糖 (LPS) 诱导的血浆中 TNFα 的产生。已知该化合物通过破坏 TNFα 三聚体结构，导致 TNFR1 信号转导异常，从而产生其体内药理作用。它有望成为在炎症疾病模型（例如胶原诱导性关节炎 (CIA) 和葡聚糖硫酸钠 (DSS) 诱导的结肠炎）中进行进一步研究的候选药物。 |
| 酶活实验 |
一种典型的TNF-α-IN-2非细胞结合分析方法是均相时间分辨荧光（HTRF）分析，用于检测TNF-α-TNFR1相互作用。该分析在384孔低容量板中进行，反应体系为20 uL。反应体系包含0.25 nM重组人His标签TNF-α、0.25 nM重组人Fc标签TNFR1以及待测化合物，溶于分析缓冲液（PBS，0.1% BSA，0.4 M KF）中。反应在室温下孵育2小时。然后，加入5 uL抗His-Eu3⁺隐蔽供体和5 uL抗Fc-d2受体，继续孵育30分钟。使用微孔板读数仪测量HTRF信号，激发波长为340 nm，发射波长分别为620 nm（供体）和665 nm（受体）。信号强度降低与抑制程度成正比。绘制标准曲线，并使用非线性回归从剂量反应曲线计算IC₅0值。对于TNF-α-IN-2，该检测方法中报道的IC₅0值为25 nM。
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| 细胞实验 |
为了进行化合物处理和HUVEC活化，并测量抑制剂对E-选择素表达的药理学调节作用，将重组His裂解三聚体TNF（0.5 ng/ml，9.8 pM）与不同剂量的化合物42（0.66% DMSO）预处理30分钟，然后将HUVEC细胞（50,000个）加入培养板中，并在37℃下活化细胞3小时。已知TNFα依赖的E-选择素表达调控是通过TNFR1信号通路实现的。[1] 在用胰蛋白酶-EDTA（0.05%）在37℃下消化10分钟将HUVEC细胞从孔中分离之前，通过流式细胞术检测E-选择素的表达。将HUVEC细胞用E-选择素PE（1 μL/孔，克隆HCD62E）在50 μL FACS缓冲液中于冰上染色30分钟，然后用PBS洗涤。将胰蛋白酶消化的细胞重悬于 FACS 缓冲液中，并使用 BD Canto 流式细胞仪采集数据。对 HUVEC 细胞进行设门，并测量 HUVEC 细胞上 CD62E-PE 的 MFI（中值荧光强度），以此计算抑制率和 IC50 值（以载体处理组为对照）。[1]
一种常用的体外细胞TNFα抑制剂检测方法是使用稳定表达NF-κB-荧光素酶的报告细胞系，例如转染了含有NF-κB反应元件构建体的HEK293细胞。将细胞以2 × 10⁴个/孔的密度接种于96孔白色壁板中，培养基为含10% FBS的DMEM。过夜培养后，更换新鲜培养基，加入不同浓度的TNF-α-IN-2（0.1 nM - 10 uM），并在37℃下孵育1小时。然后，向孔中加入1 ng/mL重组人TNFα，继续孵育6小时。孵育结束后，加入50 uL ONE-Glo荧光素酶底物，振荡3分钟。使用微孔板发光仪测量发光值。 EC₅0 是指与仅含 TNFα 的对照组相比，使发光强度降低 50% 的化合物浓度。细胞毒性同时使用 CellTiter-Glo 进行评估。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雌性C57Bl/6小鼠[1]
剂量：5、25 mg/kg 给药途径：TNF刺激前1小时口服 实验结果：5 mg/kg剂量下IL-6抑制作用较弱，而25 mg/kg剂量下的抑制作用与小鼠恩利（Enbrel）相似，恩利在本研究中作为阳性对照。 小鼠TNFα诱导的PK/PD模型。[1] 本研究旨在确定目标化合物对小鼠TNF诱导的细胞因子（本研究中为IL-6）的影响。采用ELISA法测定血清IL-6水平。每组6至8只雌性C57Bl/6小鼠。实验用小鼠体重应至少为20克，并需在室内适应至少2周以减少实验差异。化合物42（TNF-α-IN-2）以5和25 mg/kg的剂量口服给药，于TNF刺激前1小时给药。小鼠恩利（Enbrel，10 mg/kg）腹腔注射，于TNF刺激前约16小时（即TNF刺激前一晚）作为阳性对照。另设2-3只未经处理的小鼠（未处理组）作为基线对照。化合物42给药后，将冻干的小鼠TNF用0.1%牛血清白蛋白（BSA）溶于无菌PBS中，新鲜配制小鼠TNF，然后用0.1% BSA适当稀释，配制成10 μg/ml的静脉注射液。经眼眶后静脉丛注射0.1 ml。静脉注射在异氟烷麻醉下进行。 TNF注射后2小时，采用心脏穿刺法采集终末血液样本。使用干血斑（DBS）基质进行全血药代动力学（PK）测定。PK测定时间点为化合物给药后3小时。同时采集血液样本进行血清分离，并用于通过ELISA法分析小鼠IL-6细胞因子水平。 胶原抗体诱导关节炎模型（CAIA）[1] 在该关节炎模型中，将4种单克隆抗小鼠II型胶原抗体（每种1 mg）的混合物腹腔注射（IP）给8-10周龄的雌性BALB/c小鼠。三天后，小鼠腹腔注射10 μg脂多糖（大肠杆菌O111:B4）。LPS刺激后6小时立即开始口服化合物42（TNF-α-IN-2）和安慰剂。化合物 42 (TNF-α-IN-2) 以 2 mg/kg 和 10 mg/kg 的剂量，每日两次口服给药。安慰剂组采用相同的给药方案，但使用空白制剂载体（90:5:5 PEG 400:TPGS:乙醇）。由于采用每日两次给药，因此剂量体积减少至 5 mL/kg/天。小鼠恩利 (mTNFR1B-mFC-IgG2a) 以 PBS 配制，并以 10 mg/kg 的剂量，每周两次皮下注射，作为阳性对照。从第 4 天开始，每天监测小鼠爪部炎症的发展和严重程度。通过目测评估爪部，并根据趾和爪的炎症/肿胀程度进行评分。临床评分基于以下编号系统：（1）每只爪子 1 个或多个趾肿胀；（2）轻度爪肿胀； （3）中度爪肿胀；（4）关节融合/强直，每只小鼠最高评分可达16分。于第12天处死小鼠。采集样本进行谷浓度药代动力学分析。此外，采集爪组织进行RT-PCR检测。 TNF-α-IN-2 的体内动物研究采用急性炎症小鼠模型。实验对象为雌性 BALB/c 小鼠（6-8 周龄，18-22 g）。在 LPS 刺激前 1 小时，小鼠经口预先给予 TNF-α-IN-2，剂量分别为 0.5、1、2 和 5 mg/kg，TNF-α-IN-2 溶于 10% DMSO + 90% 玉米油的溶剂中。为诱导 TNF-α 的产生，小鼠腹腔注射 10 mg/kg 的 LPS（大肠杆菌 O111:B4），LPS 溶于无菌生理盐水中。90 分钟后，通过心脏穿刺采集血液，离心后获得血浆。使用市售的小鼠 TNF-α ELISA 试剂盒，按照制造商的说明书测定血浆中 TNF-α 的水平。计算各处理组相对于溶剂对照组的 TNF-α 产生抑制率。所有动物实验程序必须经机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
TNF-α-IN-2 的详细药代动力学 (PK) 参数尚未公开报道。由于该化合物在小鼠中被描述为“口服活性”，预计其具有足够的口服生物利用度以达到靶点。该化合物的制剂指南建议使用 10% DMSO 和 90% 玉米油的溶液进行口服给药，表明其具有亲脂性。在典型的 TNF-α 小分子抑制剂 PK 研究中，该化合物将通过口服 (PO) 和静脉注射 (IV) 给药，以确定其半衰期 (t1/2)、清除率 (CL)、分布容积 (Vd) 和口服生物利用度 (F)。该化合物的分子量为 494.92 g/mol，其预测的 logP 值约为 3-4，这表明其分布容积适中。由于该化合物仅供研究使用，因此没有人体 PK 数据。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无TNF-α-IN-2的详细毒理学数据。作为一种研究用化学品，其毒理学特性尚未完全明确。在已报道的体内研究中，小鼠口服该化合物的剂量高达5 mg/kg。该文献中未描述任何明显的毒性迹象，例如体重减轻或行为异常。作为一般操作预防措施，应将该化合物视为潜在危险物质。建议使用标准个人防护装备（PPE），包括手套、实验服和护目镜。应在通风良好的区域（最好是化学通风橱）操作，以避免吸入或皮肤接触。与大多数小分子抑制剂一样，应将其视为刺激物。操作前应查阅供应商提供的详细材料安全数据表（MSDS）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
本文利用骨架转变和基于结构的药物设计方法，筛选出取代的4-氨基喹啉和4-氨基萘啶类化合物作为有效的小分子肿瘤坏死因子α (TNFα) 抑制剂。本文探讨了喹啉和萘啶系列化合物的构效关系，并最终鉴定出具有优异活性和药代动力学特征的化合物42/TNF-α-IN-2。X射线共晶结构分析和超速离心实验清楚地表明，这些抑制剂与TNFα三聚体结合后会引起其结构畸变，导致三聚体与TNF受体1 (TNFR1) 结合时出现异常信号转导。本文还将讨论化合物42在TNF诱导的IL-6小鼠模型中的药代动力学-药效学活性，以及其在胶原抗体诱导的关节炎模型中的体内活性，结果显示其体内疗效与生物制剂相似。[1]
TNF-α-IN-2 并非获批药物，也未进入临床试验阶段。它是一种强效且口服有效的科研工具，可特异性且高效地抑制 TNFα。其独特的作用机制在于破坏 TNFα 三聚体的结构，这使其区别于传统的 TNFα 拮抗剂，例如单克隆抗体（如英夫利昔单抗、阿达木单抗）。这种独特的机制可能在口服生物利用度方面具有优势，并且能够调节而非完全阻断 TNFα 信号通路。本品仅用于体外和体内研究，以探究 TNFα 在各种炎症和免疫疾病中的作用。仅供研究使用；不得用于人体治疗或诊断。 |
| 分子式 |
C25H21CLF2N6O
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|---|---|
| 分子量 |
494.92
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| 精确质量 |
494.143
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| 元素分析 |
C, 60.67; H, 4.28; Cl, 7.16; F, 7.68; N, 16.98; O, 3.23
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| CAS号 |
2074702-04-6
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| PubChem CID |
126532303
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
3.7
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| tPSA |
108
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
774
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C(#N)C1=CC=C(F)C([C@H](NC2C3C(N=C(C)C=2Cl)=CC(F)=C(C2=CN=C(C(O)(C)C)N=C2)N=3)C)=C1
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| InChi Key |
UDLNDXDUOBMZIQ-GFCCVEGCSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H21ClF2N6O/c1-12(16-7-14(9-29)5-6-17(16)27)33-23-20(26)13(2)32-19-8-18(28)21(34-22(19)23)15-10-30-24(31-11-15)25(3,4)35/h5-8,10-12,35H,1-4H3,(H,32,33)/t12-/m1/s1
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| 化学名 |
3-[(1R)-1-[[3-chloro-7-fluoro-6-[2-(2-hydroxypropan-2-yl)pyrimidin-5-yl]-2-methyl-1,5-naphthyridin-4-yl]amino]ethyl]-4-fluorobenzonitrile
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| 别名 |
TNF-alpha-IN-2; 2074702-04-6; TNF-; A-IN-2; CHEMBL4777447; SCHEMBL18451172; TNF-??-IN-2; BDBM50552391;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (202.05 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.05 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0205 mL | 10.1026 mL | 20.2053 mL | |
| 5 mM | 0.4041 mL | 2.0205 mL | 4.0411 mL | |
| 10 mM | 0.2021 mL | 1.0103 mL | 2.0205 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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