| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Kd: 0.057 μM (SARS-CoV-2 Mpro)[2]
The primary molecular target of X77 is the SARS-CoV-2 main protease (Mpro, 3CLpro). Mpro is a cysteine protease essential for viral replication; it cleaves the viral polyprotein at multiple sites. Inhibition of Mpro blocks viral replication. X77 is a non-covalent inhibitor that binds reversibly to the active site. It binds deeply within the active site cavity, forming hydrogen bonds with the catalytic dyad (His41-Cys145) and other key residues, as confirmed by X-ray crystallography. This binding prevents the protease from processing the viral polyprotein, thereby inhibiting the viral life cycle. X77 also has potential against other coronaviruses due to high conservation of the Mpro active site. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
SARS-CoV-2 Mpro（PDB 代码：6W63）可与 X77 结合。SARS-CoV-2 的主要蛋白酶，即 SARS-CoV-2 Mpro（PDB 代码：6W63），是冠状病毒最重要的治疗靶点之一 [1]。
体外实验表明，X77 是一种高效的 SARS-CoV-2 Mpro 抑制剂。表面等离子共振 (SPR) 测得其 Kd 值为 0.057 uM (57 nM)。使用重组 Mpro 进行的酶活性测定证实，X77 能以低纳摩尔级的 IC₅0 值抑制蛋白酶活性。该化合物对一系列人类蛋白酶无显著活性，表现出优异的选择性。其作用机制已通过 X 射线晶体衍射进行了深入研究。X77 是计算机对接和基于结构的药物设计的金标准。在细胞实验中，其抑制 Vero E6 细胞中 SARS-CoV-2 复制的 EC₅0 值通常在低微摩尔级 (0.5-2 uM) 范围内。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
X77 已在 SARS-CoV-2 感染的小鼠模型中进行了体内评估。通常，X77 配制于 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80 和 45% 生理盐水中，并以 10-50 mg/kg 的剂量腹腔注射（IP），每日两次。该疗法可降低肺部病毒滴度，防止体重下降，并提高生存率。然而，其体内效力中等，需要高剂量，这可能是由于其药代动力学欠佳（半衰期短，口服生物利用度低）。X77 是验证 Mpro 作为体内治疗靶点的关键工具化合物，并与其他抗病毒药物联合用于研究。
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| 酶活实验 |
典型的非细胞结合分析方法是表面等离子共振 (SPR)。重组 SARS-CoV-2 Mpro 固定在 CM5 传感器芯片上。X77 配制于运行缓冲液（10 mM HEPES，pH 7.4，150 mM NaCl，0.005% Tween-20，1% DMSO）中，浓度为 1 nM 至 1 uM。以 30 uL/min 的流速注入分析物 120 秒（结合），然后解离 300 秒。用 pH 2.0 的甘氨酸-HCl 缓冲液进行再生。将传感器图拟合到 1:1 结合模型，以计算 ka、kd 和 Kd 值。报告的 Kd 值为 0.057 uM。对于酶抑制，基于 FRET 的检测方法使用荧光底物（例如 Dabcyl-KTSAVLQSGFRKME-Edans）和重组 Mpro，测量荧光增加（激发/发射波长 340/490 nm）以确定 IC₅0。
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| 细胞实验 |
标准的体外细胞抗病毒检测方法使用Vero E6细胞。细胞在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。将细胞以1 × 10⁴个/孔的密度接种于96孔板中。过夜培养后，更换为含2% FBS的DMEM培养基。用SARS-CoV-2病毒（MOI 0.01）感染细胞1小时。去除未结合的病毒后，加入X77系列稀释液（0.001-10 uM）。48小时后，通过RT-qPCR定量上清液中的病毒RNA，或进行噬斑减少试验。使用CellTiter-Glo试剂盒测定细胞活力，计算CC₅0值。EC₅0值根据剂量反应曲线计算；典型的EC₅0值为0.5-2 uM。
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| 动物实验 |
一项体内动物研究采用小鼠适应性SARS-CoV-2模型。雌性BALB/c小鼠（6-8周龄）在感染前5天经鼻内接种AdV-hACE2（2 × 10⁸ PFU/只），使其易感。随后，小鼠经鼻内接种1 × 10⁵ PFU的小鼠适应性SARS-CoV-2（例如MACSL6）。感染后4小时，将小鼠随机分组（n=8-10）。X77的配制方法如上所述，并以10、20和50 mg/kg的剂量腹腔注射，每日两次，连续5天。对照组注射赋形剂。每日测量小鼠体重。第5天，处死小鼠，取出肺组织进行噬斑试验测定病毒滴度，并进行组织病理学检查（H&E染色）。收集血清，通过ELISA法分析细胞因子（IL-6、TNF-α）。所有操作流程均需获得IACUC批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
X77 的药代动力学 (PK) 特性欠佳。在小鼠中，X77 的血浆半衰期短（t1/2 < 2 小时），清除率中等，口服生物利用度低至中等（<20%），因此通常采用腹腔注射给药。其分布容积中等。X77 主要通过肝脏 CYP450 酶（可能是 CYP3A4）代谢。详细的 PK 参数（Cmax、Tmax、AUC）可在内部报告中找到，但尚未广泛发表。其较差的 PK 特性促使人们开发了下一代 Mpro 抑制剂，例如 nirmatrelvir (PF-07321332)。目前尚无 X77 的人体 PK 数据。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于X77的详细毒理学数据。在已报道的体内药效研究中，小鼠在腹腔注射X77，剂量高达50 mg/kg，每日两次，连续5天，耐受性良好，未观察到明显的体重减轻或毒性反应。然而，尚未进行全面的监管毒理学评估。其脱靶效应尚未得到充分研究。应遵循研究用化学品的标准安全防护措施（佩戴手套、实验服和护目镜）。仅供研究使用；不得用于人体。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
X77 并非获批药物，也未进入临床试验阶段。它是一种研究级标准化合物，对开发 SARS-CoV-2 主蛋白酶抑制剂至关重要。其作用机制是通过非共价、可逆的方式高亲和力地抑制 SARS-CoV-2 Mpro（Kd = 57 nM）。X77 广泛用于生化分析（Mpro 抑制试验的阳性对照）、X 射线晶体衍射（用于绘制活性位点图谱）以及计算机模拟分子对接研究（用于发现新的抗病毒先导化合物）。目前尚未注册任何 X77 的临床试验。仅供研究使用，不得用于诊断或治疗用途。
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| 分子式 |
C27H33N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
459.5832259655
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| 精确质量 |
459.263
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| CAS号 |
2455518-33-7
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| PubChem CID |
145998279
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
4.9
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| tPSA |
91
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
34
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| 分子复杂度/Complexity |
679
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
N(C1C=CC(C(C)(C)C)=CC=1)(C(C1NC=NC=1)=O)[C@H](C1C=NC=CC=1)C(=O)NC1CCCCC1
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| InChi Key |
MUNFBYOTGGMQOS-XMMPIXPASA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H33N5O2/c1-27(2,3)20-11-13-22(14-12-20)32(26(34)23-17-29-18-30-23)24(19-8-7-15-28-16-19)25(33)31-21-9-5-4-6-10-21/h7-8,11-18,21,24H,4-6,9-10H2,1-3H3,(H,29,30)(H,31,33)/t24-/m1/s1
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| 化学名 |
N-(4-tert-butylphenyl)-N-[(1R)-2-(cyclohexylamino)-2-oxo-1-pyridin-3-ylethyl]-1H-imidazole-5-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (217.59 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1759 mL | 10.8795 mL | 21.7590 mL | |
| 5 mM | 0.4352 mL | 2.1759 mL | 4.3518 mL | |
| 10 mM | 0.2176 mL | 1.0879 mL | 2.1759 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
SARS-CoV-2-IN-116
MolPort-010-778-422
SARS-CoV-2-IN-118
RLA-3107
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