| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Protease Cleavable Linker Cleavable Linker
Fmoc-Gly3-Val-Cit-PAB itself has no biological target; it is a structural component of an ADC. Its target, when incorporated into an ADC, is the lysosomal cysteine protease, cathepsin B. The Val-Cit dipeptide is a specific substrate for this enzyme, which is highly active in the endolysosomal compartments of cells, including cancer cells. The ultimate target is the intracellular machinery affected by the payload drug that is released. The tri-glycine spacer is introduced to reduce steric hindrance and improve enzyme accessibility to the cleavage site, thereby enhancing the efficiency of payload release from the ADC. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
ADC 由抗体组成，ADC 细胞毒素通过 ADC 连接子连接到抗体上[1]。
据报道，Fmoc-Gly3-Val-Cit-PAB 单独使用时未观察到直接的体外活性。含有该连接子的抗体药物偶联物 (ADC) 的“体外活性”是通过对一系列癌细胞系进行细胞毒性试验来测定的。IC₅0 值通常在纳摩尔到皮摩尔范围内。连接子的可裂解性通过体外溶酶体提取物试验得到证实。将 ADC 与纯化的组织蛋白酶 B 或溶酶体提取物孵育，并通过液相色谱-质谱联用 (LC-MS) 监测有效载荷的释放。与组织蛋白酶 B 抑制剂（例如 CA-074）共孵育后细胞毒性显著降低，证实了该激活机制。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无关于该连接子单独使用时体内活性的报道。对于含有Gly3-Val-Cit-PAB连接子的抗体药物偶联物（ADC），已在小鼠异种移植模型中证实了其体内疗效。典型的研究方法是将ADC静脉注射到已建立的人类肿瘤异种移植模型的小鼠体内。Val-Cit连接子以其在循环系统中的稳定性以及高效的肿瘤内释放而著称，从而能够显著抑制肿瘤生长。其疗效通常优于使用不可裂解连接子的ADC。通过对肿瘤切片进行免疫组织化学分析，检测凋亡标志物裂解的caspase-3，并通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）测定肿瘤组织中释放的有效载荷浓度，证实了其药效学作用。
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| 酶活实验 |
典型的非细胞裂解实验是将该抗体药物偶联物（ADC，10-100 ug/mL）与 10-50 nM 纯化的人组织蛋白酶 B 在 100 uL 活化缓冲液（20 mM 乙酸钠，pH 5.0，含 2 mM DTT 和 1 mM EDTA）中于 37℃ 孵育。反应进行 1-24 小时。在不同时间点，加入半胱氨酸蛋白酶抑制剂 E-64 终止反应。然后通过 HPLC 或 LC-MS 分析样品，以分离和定量释放的有效载荷与完整的连接子-有效载荷复合物。裂解半衰期 (t1/2) 可根据动力学数据确定。同时进行不含酶的对照实验以评估稳定性。
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| 细胞实验 |
典型的体外细胞检测方法用于检测含有该连接子的抗体药物偶联物（ADC），该方法采用流式细胞术和免疫荧光技术追踪连接子的裂解情况。将细胞接种于腔室载玻片或6孔板中，并与ADC（10 ug/mL）孵育6-24小时。之后，固定细胞，进行透化处理，并用抗有效载荷抗体进行染色。通过与溶酶体示踪剂（LysoTracker，一种酸性细胞器标记物）进行共定位，以确认ADC到达溶酶体（裂解发生的部位）。有效载荷出现在胞质和细胞核中是连接子有效裂解的有力指标。最后，通过碘化丙啶染色评估其对细胞周期的影响。
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| 动物实验 |
该连接子的动物研究是抗体药物偶联物（ADC）评估的一部分。标准的体内疗效研究采用5-6周龄的雌性BALB/c裸鼠，并植入抗原阳性的人类癌细胞。当肿瘤体积达到约100-200 mm³时，将小鼠（每组n=8-10只）随机分组，并分别以3、10和30 mg/kg的剂量单次静脉注射ADC（每组n=8-10只）。每周测量两次肿瘤体积。在药代动力学-药效学（PK-PD）研究中，分别在给药后6、24、48、72和168小时处死部分小鼠。收集主要器官并进行匀浆处理，用于液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析，以定量完整的ADC和释放的有效载荷。可以使用近红外染料标记的ADC进行离体成像研究。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
未报告仅连接子的药代动力学特性。对于含有缬氨酸-柠檬酸连接子的抗体药物偶联物（ADC），抗体成分主导整体药代动力学。其药代动力学曲线通常为双相：快速分布相（α相）后接较慢的消除相（β相）。ADC在人体内的半衰期（t1/2）通常为1-2周，在小鼠体内则为数天。缬氨酸-柠檬酸连接子的设计旨在保持稳定性，因此在循环中观察到的有效载荷释放量极少。有效载荷一旦释放，通常会迅速从血浆中清除。ADC的主要消除途径是通过蛋白水解降解以及随后有效载荷代谢物的排泄。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无Fmoc-Gly3-Val-Cit-PAB单独使用的毒性数据。使用该连接子的抗体药物偶联物（ADC）的毒性主要取决于偶联的有效载荷。在临床前研究中，最大耐受剂量（MTD）是在啮齿动物中确定的。剂量限制性毒性（DLT）通常包括骨髓抑制（导致中性粒细胞减少症和血小板减少症）和肝毒性。使用Val-Cit连接子是一种降低全身毒性的策略，它能确保有效载荷的释放主要限制在靶细胞溶酶体酸性且富含蛋白酶的环境中，从而与传统化疗相比拓宽治疗窗口。
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| 参考文献 |
[1]. Beck A, et al. Strategies and challenges for the next generation of antibody-drug conjugates. Nat Rev Drug Discov. 2017 May;16(5):315-337.
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| 其他信息 |
Fmoc-Gly3-Val-Cit-PAB并非药物，也未获准用于临床。它是一种先进的、研究级的连接子，用于开发抗体药物偶联物（ADC）。其作用机制在于：在血液中保持稳定，但在ADC被靶向癌细胞内化后，可被组织蛋白酶B高效切割，从而实现靶向有效载荷的释放。Gly3间隔基可提高切割效率。它是许多正在研发的现代ADC的关键组成部分。目前尚无针对该连接子单独开展的临床试验注册。仅供研究使用；不得用于人体治疗或诊断。
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| 分子式 |
C39H48N8O9
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|---|---|
| 分子量 |
772.85
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| 精确质量 |
772.354
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| CAS号 |
2647914-09-6
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| PubChem CID |
125373407
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
1.3
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| tPSA |
259
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| 氢键供体(HBD)数目 |
9
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
20
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| 重原子数目 |
56
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| 分子复杂度/Complexity |
1340
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| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(=O)N)C(=O)NC1=CC=C(C=C1)CO)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)OCC2C3=CC=CC=C3C4=CC=CC=C24
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| InChi Key |
ANTAWRUQHZQAGZ-ZJJOJAIXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C39H48N8O9/c1-23(2)35(37(53)46-31(12-7-17-41-38(40)54)36(52)45-25-15-13-24(21-48)14-16-25)47-34(51)20-43-32(49)18-42-33(50)19-44-39(55)56-22-30-28-10-5-3-8-26(28)27-9-4-6-11-29(27)30/h3-6,8-11,13-16,23,30-31,35,48H,7,12,17-22H2,1-2H3,(H,42,50)(H,43,49)(H,44,55)(H,45,52)(H,46,53)(H,47,51)(H3,40,41,54)/t31-,35-/m0/s1
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| 化学名 |
9H-fluoren-9-ylmethyl N-[2-[[2-[[2-[[(2S)-1-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-1-[4-(hydroxymethyl)anilino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]carbamate
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (129.39 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.23 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (3.23 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.2939 mL | 6.4696 mL | 12.9391 mL | |
| 5 mM | 0.2588 mL | 1.2939 mL | 2.5878 mL | |
| 10 mM | 0.1294 mL | 0.6470 mL | 1.2939 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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