| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Sakamototide substrate peptide TFA targets the catalytic domain of AMPK family kinases, serving as a specific peptide substrate. It is not an inhibitor or drug target but rather a molecular tool that mimics the phosphorylation site of natural AMPK substrates. The peptide is recognized by the active site of the kinase, allowing researchers to measure its enzymatic activity in vitro by monitoring the transfer of a phosphate group from ATP to the peptide.
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| 体外研究 (In Vitro) |
坂本肽底物肽TFA用于体外激酶活性测定，以评估AMPK家族成员的功能。它可用于测定动力学参数，例如米氏常数（Km）和最大反应速率（Vmax）。此外，它还用于高通量筛选（HTS）方法，以鉴定和评估AMPK活性的小分子调节剂（抑制剂或激活剂），而AMPK活性是糖尿病和肥胖等代谢性疾病的关键靶点。
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| 体内研究 (In Vivo) |
该肽段并非设计用于体内实验，而是一种体外生化工具。其用途是定量分析细胞裂解液或纯化酶中的AMPK活性。作为底物，它本身不具有体内活性。该肽段用于研究细胞信号通路中AMPK的调控，而这些体外实验产生的数据可用于构建体内代谢模型。
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| 酶活实验 |
使用坂本肽底物肽TFA进行无细胞AMPK激酶活性测定。反应混合物（25-50 uL）包含激酶缓冲液（例如，50 mM HEPES，pH 7.5，5 mM MgCl2，1 mM DTT）、50-100 uM ATP（放射性测定使用γ-32P-ATP，发光测定使用未标记的ATP）和100-500 uM肽底物。加入纯化的AMPK（0.1-1 ug）启动反应。在30℃孵育30-60分钟后，加入0.5%磷酸终止反应。将反应混合物点样至P81磷酸纤维素滤纸上，该滤纸可结合磷酸化肽。洗涤滤纸后，通过闪烁计数定量测定掺入的放射性。对于非放射性检测，可以使用 ADP-Glo™ 检测法。
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| 细胞实验 |
坂本肽底物肽TFA可用于测定细胞裂解液中的AMPK活性。将细胞（例如HEK293或HepG2细胞）培养至80-90%汇合度，并用AMPK激活剂（例如二甲双胍、AICAR）或抑制剂处理。处理后，用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的非变性裂解缓冲液裂解细胞。将澄清的裂解液（10-50 ug蛋白）与肽底物在含有ATP的反应混合物中于30℃孵育30-60分钟。使用磷酸化特异性抗体通过ELISA或LC-MS/MS定量底物的磷酸化水平来测定AMPK活性。
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| 动物实验 |
坂本肽底物肽TFA不用于体内给药。然而，为了在体外评估组织中的AMPK活性，标准方案包括对动物进行处理（例如，给小鼠注射二甲双胍），然后收集组织（例如，肝脏、骨骼肌）。将组织样本在裂解缓冲液中匀浆，并将澄清的匀浆用于激酶活性测定，具体方法参见细胞实验方案部分。该肽底物能够灵敏地测量这些组织裂解液中的内源性AMPK活性。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
坂本肽底物肽TFA的分子式为C₇₁H₁₂₃F₃N₃₀O₂₅，分子量为1853.92。该肽应以冻干粉末形式储存于-20℃，密封避光保存，最长可达3年。溶液状态下，在-80℃可稳定保存6个月，在-20℃可稳定保存1个月。TFA盐可确保其在用于生化分析的水性缓冲液中的溶解性。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无该肽底物的具体毒性数据。作为一种研究级肽，它不适用于体内实验，预计其固有毒性较低。操作肽时应遵循标准的实验室安全预防措施，包括佩戴手套和护目镜，以避免意外接触。在这些实验中使用的低浓度TFA反离子被认为是安全的。
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| 参考文献 |
[1]. Banerjee S,et al. Characterization of WZ4003 and HTH-01-015 as selective inhibitors of the LKB1-tumour-suppressor-activated NUAK kinases. Biochem J. 2014 Jan 1;457(1):215-25.
[2]. Banerjee S, et al. Interplay between Polo kinase, LKB1-activated NUAK1 kinase, PP1βMYPT1 phosphatasecomplex and the SCFβTrCP E3 ubiquitin ligase. Biochem J. 2014 Jul 15;461(2):233-45. |
| 其他信息 |
坂本肽底物肽TFA是一种研究级肽，尚未获准用于临床。它是AMPK激酶家族的合成肽底物，广泛用于信号转导研究和药物发现等基础研究。TFA盐形式是研究应用的标准形式，可提高体外生化分析的溶解度和稳定性。本产品仅供研究使用，不得用于人体诊断或治疗。
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| 分子式 |
C71H123F3N30O25
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|---|---|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~100 mg/mL (~53.94 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (26.97 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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