| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The NLS peptide acts as a ligand for the nuclear import receptor Importin alpha. In the cytoplasm, the NLS sequence binds directly to the importin alpha subunit of the importin alpha/beta heterodimer with high affinity. This binding triggers the transport of the cargo-NLS complex through the nuclear pore complex (NPC) via a RanGTP-dependent mechanism. Once inside the nucleus, the binding of RanGTP to importin beta causes the disassembly of the import complex, releasing the NLS-tagged cargo into the nucleoplasm. The importins are then recycled back to the cytoplasm for another round of transport. This specific interaction and the subsequent nuclear translocation cascade are essential for the function of many nuclear proteins. The NLS peptide can be chemically conjugated to non-native cargos to artificially drive their nuclear localization.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，NLS肽能够显著增强细胞实验中结合货物的核内积累。在使用透化细胞或活细胞成像的研究中，添加NLS肽（通常浓度为10-50 uM）可使荧光标记蛋白货物的核输入率提高5-10倍。NLS肽已被广泛用于提高基因组编辑工具（例如CRISPR-Cas9）的效率。例如，将多个SV40 NLS拷贝融合到Cas9蛋白上可显著改善其核定位，从而提高其基因编辑活性。这种方法现在已成为基因组工程Cas9载体设计中的标准步骤。
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| 体内研究 (In Vivo) |
虽然NLS肽本身并非治疗药物，但其在体内研究中的应用却十分广泛。当与质粒DNA、蛋白质或纳米颗粒偶联时，NLS已被证明能够提高这些载体在活体动物体内的核递送效率。在异种移植瘤模型中，全身性给药NLS偶联的纳米颗粒可显著提高有效载荷在肿瘤细胞核内的积累，而肿瘤细胞核内有效载荷的积累通常是基因疗法疗效的关键障碍。然而，单独给药时，NLS肽会迅速从血液循环中清除。其在体内的主要用途是作为更大、更稳定结构上的功能域。
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| 酶活实验 |
NLS肽与输入蛋白α之间的相互作用可通过表面等离子共振（SPR）等生物物理方法进行测量。在SPR检测中，重组输入蛋白α通过胺偶联化学方法固定在传感器芯片表面（例如CM5芯片）。NLS肽溶解于运行缓冲液（例如10 mM HEPES、150 mM NaCl、0.005% Tween-20，pH 7.4）中。将NLS肽进行系列稀释（浓度范围为0.1至100 uM），并以恒定流速（例如30 uL/min）注入固定化的输入蛋白α表面。结合阶段持续1-2分钟，随后进行2-5分钟的解离阶段。在每个循环之间，用低pH缓冲液（例如10 mM甘氨酸，pH 2.0）进行短脉冲再生。将所得的传感图谱全局拟合到 1:1 结合模型，以计算结合速率 (ka)、解离速率 (kd) 和平衡解离常数 (KD)。NLS 通常以低纳摩尔级的亲和力与输入蛋白 α 结合。
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| 细胞实验 |
检测核定位信号（NLS）功能的标准细胞分析方法是洋地黄皂苷透化细胞分析。将HeLa细胞或其他贴壁细胞培养于盖玻片上，直至汇合度达到约70%。用冰冷的转运缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.3，110 mM KOAc，2 mM Mg(OAc)2，2 mM DTT）洗涤细胞。将细胞置于含有洋地黄皂苷（例如，40 ug/mL）的转运缓冲液中，冰上孵育5分钟，选择性地透化细胞质膜。透化后，洗涤细胞，然后与导入反应混合物孵育。该混合物包含：荧光标记的货物蛋白（例如，1 uM 的 BSA-NLS-FITC）、重组输入蛋白 α/β（各 1 uM）、能量再生系统（ATP、磷酸肌酸、肌酸激酶）以及待研究的 NLS 肽（PKKKRKV），其浓度范围为 0-100 uM。将细胞在 30°C 下孵育 30 分钟以促进输入。用冰冷的转运缓冲液洗涤终止反应，并用 4% 多聚甲醛固定细胞。将盖玻片用含 DAPI 的封片剂封片于载玻片上。然后使用荧光显微镜定量分析核荧光强度，并将数据表示为核荧光与胞质荧光的比值，以确定输入效率。
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| 动物实验 |
用于研究NLS介导递送的体内模型是使用异种移植小鼠模型进行成像。将5×10⁶个表达荧光素酶的癌细胞（例如HeLa-Luc）皮下接种到6-8周龄的无胸腺裸鼠体内。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分配到不同的治疗组。将治疗性纳米颗粒、质粒DNA或siRNA与NLS肽（PKKKRKV）偶联或配制在一起。将偶联物（例如，相当于10-50 mg/kg的NLS肽）每2-3天静脉注射一次，持续2周。每两周使用游标卡尺监测肿瘤生长情况。对于成像，可以将NLS与近红外（NIR）染料（例如Cy5.5）偶联并注射（10 mg/kg）。使用IVIS光谱仪在注射后0、1、2、4、8、12和24小时进行体内荧光成像。实验结束时，切除肿瘤和主要器官进行离体成像和生物分布分析，以确定NLS介导的核递送的有效性。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
NLS (PKKKRKV) 盐酸盐为冻干粉末。应密封保存于-20℃，避免受潮，可稳定保存长达3年。用于实验时，其易溶于水或PBS缓冲液，浓度至少为10 mg/mL。分子量约为919.6 g/mol。盐酸盐(HCl)形式的使用可提高其溶解度和长期稳定性。由于其为小肽（分子量<1 kDa），可通过肾脏滤过迅速从血液循环中清除，导致其体内血浆半衰期极短（数分钟）。这限制了其作为独立治疗药物的应用，但使其成为研究应用中理想的瞬时递送载体。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
本产品仅供研究使用，不可用于临床。目前尚无NLS肽单独使用的具体毒性数据。该肽本身来源于病毒蛋白，在大多数研究应用中通常被认为无毒且无免疫原性。然而，当与其他分子偶联时，偶联物的毒性主要取决于所连接分子的性质。盐酸盐形式可安全用于实验室。处理该化合物时，应遵循标准化学安全预防措施，包括穿戴实验服和手套。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
SV40 NLS（PKKKRKV）是一种经典的、功能最强大且研究最深入的NLS序列之一。它是一种单体NLS，这意味着其信号包含在单个碱性氨基酸簇中。几十年来，这种肽一直被用于研究核转运的基本原理。在现代研究中，它是开发更高效基因递送载体的重要工具，因为DNA无法穿过核膜是无病毒基因治疗的主要障碍。盐酸盐形式是一种常用的合成抗衡离子，用于改善肽的理化性质，以用于研究应用。它可以被整合到脂质纳米颗粒（LNP）中，或直接与蛋白质偶联，以提高蛋白质向细胞核的递送效率。
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| 分子式 |
C40H79CLN14O8
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| 相关CAS号 |
NLS (PKKKRKV);95088-49-6;NLS (PKKKRKV) (TFA)
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~500 mg/mL (~543.71 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (108.74 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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