| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The primary biochemical role of NHC-diphosphate is as an intermediate in the intracellular activation of NHC. The enzyme nucleoside diphosphate kinase (NDPK) converts NHC-diphosphate to the active NHC-triphosphate. As such, it does not directly bind to or inhibit viral targets like the RdRp with high affinity. However, it can act as a weak alternative substrate for viral polymerases in cell-free systems, though with much lower efficiency than the triphosphate. The compound is an essential tool for mapping the complete metabolic pathway of NHC and for studying the kinetics of its phosphorylation by cellular kinases. Understanding the kinetics of NHC-DP conversion to NHC-TP is critical for optimizing the pharmacology of this class of antiviral agents.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在细胞内代谢实验中，用 10 μM 的 3H 标记的 NHC 处理 HCV 复制子细胞。孵育 1、2 和 8 小时后，测量细胞内核苷酸水平。NHC 迅速转化为单磷酸、二磷酸和三磷酸形式；8 小时内，NHC-TP 的浓度可达到 71.12 pM[1]。在缺乏 NHC-三磷酸三铵 (NHC-TP) (3-5 μM) 的情况下，会生成全长聚合产物，因此 NHC-TP 可能是一种较差的替代底物。此外，在无细胞 HCV NS5B 聚合反应中，观察到明显的电泳迁移，并且与插入 CTP 相比，插入 NHC-TP 后聚合产物的分子量增加了 16（多一个氧原子）[1]。将 NHC (10–50 μM；4 小时) 或 NHC 的 McGuigan 磷酰胺前药在 Huh-7 细胞中培养。液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）用于评估细胞内初级化学物质和磷酸化代谢物的水平。虽然NHC-三磷酸三铵仍然是最主要的代谢物，但也能检测到痕量的NHC-单磷酸（MP）和NHC-二磷酸（DP）[2]。代谢物NHC-三磷酸三铵（NHC-TP）可能作为非必需链终止剂，直接靶向病毒聚合酶。它通过链终止或诱变作用，显著抑制早期负链RNA的合成。这可能会阻碍复制酶复合物的正确组装。
在利用HCV复制子细胞进行的细胞内代谢分析中，用10 uM 3H标记的NHC处理后，观察到NHC-二磷酸是磷酸化代谢物之一。在无细胞HCV NS5B聚合酶分析中，三磷酸形式的掺入是主要的作用机制，而二磷酸形式的作用甚微。研究表明，NHC在细胞内可迅速转化为其单磷酸、二磷酸和三磷酸形式。在某些细胞环境中，NHC-二磷酸转化为NHC-三磷酸是限速步骤，二磷酸形式可作为中间体积累至可测量的水平。三铵盐主要用作分析标准，通过LC-MS/MS定量细胞裂解液和组织样品中的NHC-DP。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无该盐直接给药的体内数据。母体NHC前药的体内活性已得到充分表征。口服前药后，其迅速脱酯化为NHC，随后进入细胞。在细胞内，NHC依次磷酸化为NHC单磷酸（NHC-MP）、NHC二磷酸（NHC-DP），最终磷酸化为活性NHC三磷酸（NHC-TP）。二磷酸是关键的中间体，其浓度可作为细胞代谢激活药物能力的生物标志物。在药代动力学和药效学研究中，使用三铵盐来精确测量该中间体的水平，以了解前药在不同组织（如肝脏和肺脏）中的激活速率和程度。
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| 酶活实验 |
可进行无细胞检测，以测定 NHC-二磷酸对 NDPK 的底物活性或其对 RdRp 的直接（弱）抑制活性。对于 NDPK 活性测定，在 96 孔板中加入反应混合物：50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM MgCl2、1 mM DTT、10% 甘油和不同浓度 (0-500 uM) 的底物 NHC-二磷酸。加入 10 ng 重组人 NDPK-A、1 mM ATP 和 ATP 再生系统（磷酸烯醇式丙酮酸和丙酮酸激酶）启动反应。将反应板置于 37℃ 孵育。30 分钟后，将反应加热至 95℃ 并保持 5 分钟以终止反应。产物 NHC-三磷酸可通过 HPLC-UV 或 LC-MS/MS 进行定量。这使得我们可以测定NDPK对NHC-DP的Km值和催化效率。对于RdRp活性测定，采用与三磷酸盐相同的方案，但需添加二磷酸盐以评估其对CTP的直接竞争性抑制作用。
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| 细胞实验 |
测定细胞内 NHC-DP 水平的典型方案包括用母体 NHC 或其前药处理细胞。将 Huh-7 细胞或原代人肝细胞以每孔 7×10⁵ 个细胞的密度接种于 6 孔板中。次日，用 10-50 uM 的 NHC 处理细胞 4-24 小时。然后用冰冷的 PBS 洗涤细胞三次以去除细胞外药物。通过加入 0.5 mL 含有内标（例如，¹3C 标记的 NHC-DP）的冰冷 80% 甲醇提取代谢物。刮取细胞，并将混合物转移至微量离心管中。涡旋混匀样品，在 -20℃ 下孵育 20 分钟，然后在 4℃ 下以 13,000 rpm 离心 10 分钟。将上清液转移至洁净的小瓶中，并在37℃下用氮气吹干。将残余物用50 uL等体积的水和甲醇混合液复溶。将复溶后的样品注入与三重四极杆质谱仪联用的C18色谱柱。以NHC-二磷酸三铵盐为一级标准品，绘制定量校准曲线。监测NHC-DP和NHC-TP的水平，以评估细胞磷酸化级联反应的效率。
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| 动物实验 |
与三磷酸盐一样，二磷酸盐由于带电荷且不透膜，因此不用于体内研究。其主要的体内应用是作为分析物，用于在给药前药后检测组织样本中的含量。在典型的鼠药代动力学研究中，6-8周龄的BALB/c小鼠通过灌胃给予前药（例如，莫努匹拉韦，200 mg/kg）。在给药后的不同时间点（0.5、1、2、4、6、8和24小时），处死小鼠（每时间点n=3）。通过心脏穿刺采集血液，并立即切取目标组织（例如，肝脏、肺），用液氮速冻，然后储存在-80℃。将组织在含有内标的冷提取液中匀浆。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）提取匀浆液中的NHC-DP和NHC-TP，并以NHC-二磷酸三铵盐作为校准标准。所得浓度-时间数据用于计算靶组织中活性代谢物的药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、t½）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
该化合物的分子式为C9H24N6O12P2，分子量为470.27 g/mol。外观为白色至类白色固体。应在-20℃下避光保存，并在惰性气氛（例如氮气）下储存以防止降解。在此条件下，粉末可稳定保存长达3年，溶液在-80℃下可稳定保存长达6个月。该三铵盐具有高极性，易溶于水（通常溶解度>10 mg/mL）。它不具有细胞渗透性，不适用于体内直接治疗。该化合物是药理学研究的必要标准品。纯度通常>98%。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
本产品仅供研究使用，不可用于人体诊断或治疗。目前尚无该三铵盐的具体毒性数据。其主要潜在危害是铵根离子，虽然含量较低，但可能具有刺激性。处理粉末时应遵循标准化学卫生规程，包括穿戴实验服、手套和护目镜。作为一种核苷酸类似物，研究人员应谨慎使用，因为它可能代谢为具有强效抗病毒活性的活性三磷酸盐，但经皮肤接触发生这种情况的可能性很小。本产品不适用于三氟乙酸盐形式；本产品为三铵盐，常用于提高极性核苷酸的溶解度。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
NHC-二磷酸盐是莫努匹拉韦广谱抗病毒活性的关键药理活性中间体。二磷酸盐形式的直接活性极低，但可被细胞NDPK酶迅速转化为具有活性的三磷酸盐。三铵盐可提高溶解度和稳定性，使其适用于生化分析和抗病毒机制研究。它被广泛用于病毒复制和RNA病毒抑制的研究，为理解药物活化动力学提供了一种工具。在药代动力学研究中，它作为关键标准，用于区分不同细胞类型中代谢活化瓶颈（二磷酸盐缺乏与三磷酸盐缺乏）。在某些生化条件下，二磷酸盐有时可以作为三磷酸盐的更稳定替代物。该产品是代谢谱分析和分析化学的专用工具。
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| 分子式 |
C9H24N6O12P2
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| 分子量 |
470.27
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| 相关CAS号 |
NHC-diphosphate;39023-73-9
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~160 mg/mL (~340.23 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (106.32 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1264 mL | 10.6322 mL | 21.2644 mL | |
| 5 mM | 0.4253 mL | 2.1264 mL | 4.2529 mL | |
| 10 mM | 0.2126 mL | 1.0632 mL | 2.1264 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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