HKSOX-1 (5/6-mixture)

目录号: V76927 纯度: ≥98%
HKSOX-1 是一种荧光探针,用于成像和检测活细胞和体内的内源性超氧化物。
HKSOX-1 (5/6-mixture) 产品类别: Reactive Oxygen Species
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
HKSOX-1是一种荧光探针,用于对活细胞和体内内源性超氧化物进行成像和检测。HKSOX-1对超氧阴离子自由基具有优异的选择性和灵敏度。
HKSOX-1(5/6混合物)是一种用于检测超氧阴离子(O2•-)的荧光探针。它是HKSOX系列化合物的母体化合物(不含“r”或“m”修饰)。它能选择性地与超氧阴离子反应,生成荧光氧化产物。5/6混合物表示两种区域异构体的混合物。该探针可用于活细胞和组织中超氧阴离子的实时成像和定量分析。该探针可透过细胞膜,其激发/发射波长约为510/580 nm。它是一种用于研究炎症、神经退行性疾病和心血管疾病中氧化应激的研究工具。它并非药物。
生物活性&实验参考方法
靶点
Superoxide anion (O2•−). HKSOX-1 is a chemoselective fluorescent probe that specifically reacts with superoxide via a chemical mechanism (likely a reaction with the dihydroethidine core). The reaction yields a fluorescent product (ethidium-like). The 5/6 mixture indicates that the probe is a mixture of isomers where the substituent is at the 5 or 6 position on the benzene ring; both have similar properties. This probe has high selectivity for superoxide over other ROS (H2O2, •OH, ONOO−, NO). It is used in biochemistry and cell biology to monitor superoxide production from sources such as NADPH oxidases and mitochondria. There is no receptor target.
体外研究 (In Vitro)
在25 °C的磷酸钾缓冲液中,HKSOX-1 (10 μM) 与 O2+ 结合,产生强烈的、随时间增加的荧光,该荧光强度在60分钟内保持稳定。反应在10分钟内完成。HKSOX-1 (10 μM) 在pH 2.2–8.8范围内具有极佳的稳定性[1]。
体外实验表明,HKSOX-1(5/6混合物)(1-10 uM)可与黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶产生的超氧阴离子反应,导致荧光增强。该反应具有特异性:H2O2、过氧亚硝酸盐、一氧化氮或羟基自由基均不引起明显的荧光增强。该探针灵敏度高(检测限在低纳摩尔范围内)。在细胞培养中,用HKSOX-1(5 uM)孵育细胞30分钟后,再用PMA或LPS刺激,可通过流式细胞仪或酶标仪检测荧光强度的增加。超氧化物歧化酶(SOD)或NADPH氧化酶抑制剂(例如DPI)可抑制该信号。5/6混合物可直接使用;其异构体性能相似。该探针在5 uM浓度下孵育4小时无细胞毒性。由于其具有更高的特异性,因此优于二氢乙锭(DHE)。
体内研究 (In Vivo)
不适用。HKSOX-1 不是药物,而是一种荧光探针。它可用于离体组织或体内成像。在体内研究中,将探针静脉注射(1-5 mg/kg)至小鼠体内;可使用 IVIS 系统对器官中的荧光进行成像。例如,在脓毒症模型中,肝脏荧光与超氧化物生成相关。然而,该混合物主要用作研究试剂。
酶活实验
与 HKSOX-1r 和 HKSOX-1m 相同。在无细胞体系中,将 HKSOX-1 溶解于 PBS 缓冲液中(5 uM)。加入黄嘌呤(100 uM)和黄嘌呤氧化酶(0.1 U/mL)。于 37℃ 孵育 20 分钟。测量荧光强度(激发波长 510 nm,发射波长 580 nm)。通过其他活性氧(ROS)无信号以及超氧化物歧化酶(SOD)抑制来验证其特异性。5/6 混合物可直接使用。用 DMSO 溶解配制成 10 mM 的储备液,然后用 PBS 缓冲液稀释。该探针光敏,请在弱光下操作。
细胞实验
与 HKSOX-1r 相同。将 RAW 264.7 细胞接种于 96 孔板中,用 HBSS 缓冲液(5 uM HKSOX-1)孵育 30 分钟,洗涤后,用 PMA(100 nM)或 LPS(1 ug/mL)刺激 30-60 分钟。读取荧光值。流式细胞术检测时,细胞悬浮状态下进行上样和刺激。显微镜检测时,使用活细胞成像模式。5/6 混合物在这些实验中效果良好。设置 DMSO 和 SOD 作为对照。该探针无细胞毒性。
动物实验
与HKSOX-1r相同。体内实验中,将HKSOX-1(5 mg/kg,静脉注射)注射到小鼠体内,然后诱导炎症。使用IVIS成像系统进行成像。所有动物实验均需获得IACUC批准。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
无毒。使用浓度低。符合安全标准。
参考文献

[1]. Fluorescent Probe HKSOX-1 for Imaging and Detection of Endogenous Superoxide in Live Cells and In Vivo. J Am Chem Soc. 2015 Jun 3;137(21):6837-43.

其他信息
HKSOX-1 是 HKSOX 家族中最初的超氧化物探针。它对超氧化物具有高度选择性,远优于其他活性物质。5/6 混合物简化了合成。它广泛用于氧化应激研究。不可用于人体。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C23H6F10O11S2
分子量
712.40
外观&性状
Solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~110 mg/mL (~154.41 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 2.75 mg/mL (3.86 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 悬浮液;超声助溶。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (3.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 27.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.4037 mL 7.0185 mL 14.0371 mL
5 mM 0.2807 mL 1.4037 mL 2.8074 mL
10 mM 0.1404 mL 0.7019 mL 1.4037 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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