| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Hemagglutinin (HA) of influenza virus (epitope tag). HA Peptide is a 9-amino acid synthetic peptide (YPYDVPDYA) that corresponds to a fragment (residues 98-106) of the human influenza virus hemagglutinin (HA) protein. It does not bind to a biological receptor or enzyme; rather, it is a protein tag (epitope tag) recognized by specific anti-HA antibodies. In molecular biology, the HA peptide sequence is genetically fused to a protein of interest (e.g., at the N-terminus or C-terminus), creating an HA-tagged recombinant protein. The HA tag allows for the detection, immunoprecipitation, purification, and cellular localization of the tagged protein using commercially available high-affinity anti-HA antibodies (e.g., monoclonal antibodies 16B12, 12CA5, or polyclonal antibodies). The HA peptide is also used as a competitor to elute HA-tagged proteins from anti-HA antibody resins by adding free HA peptide to disrupt antibody-antigen binding. The HA tag is one of the most commonly used epitope tags in life sciences research. The TFA salt is used to enhance solubility and stability of the synthetic peptide. This product is for research use only and is not a therapeutic agent.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在中性pH条件下，通常使用高免疫反应性标记物HA肽从细胞培养上清液和细胞裂解液中分离标记蛋白。因此，Western blot提供了一种简便的检测方法，使其成为共免疫沉淀的有效工具。HA肽体积很小，不太可能影响融合伴侣蛋白的生物活性和功能。HA肽是分离、纯化、检测和追踪目标蛋白的有效工具。它来源于人流感病毒血凝素（HA），对应于氨基酸98-106。它是一种强效免疫反应性表位。高选择性且共价结合在树脂上的抗HA单克隆抗体可用于分离重组HA标记蛋白。使用含有1 mg/mL HA表位的TBS缓冲液，可以温和地洗脱HA标记蛋白。此外，还有三种化学洗脱方法可供选择：50 mM NaOH、3 M NaSCN 和 0.1 M 甘氨酸（pH 2-2.8）[1]。对于大肠杆菌中 T7 启动子驱动的表达，即使在缺乏转录活性的 T7 RNA 聚合酶的情况下，哺乳动物表达载体中编码 N 端 HA 肽的核苷酸序列也至关重要[2]。研究表明，caspase 3/7 会切割 HA 肽，从而完全破坏免疫反应。对与细胞死亡相关的凋亡通路的研究表明，使用 HA 标签蛋白和构建体可能会导致显著的实验假象[3]。
在体外，HA肽TFA可用作竞争性试剂，用于从抗HA抗体亲和树脂上洗脱HA标签蛋白。当HA标签蛋白（例如HA激酶、HA转录因子）与抗HA抗体树脂结合时，加入过量的游离HA肽（0.1-1 mg/mL）可与结合的HA标签蛋白竞争抗体结合位点，从而特异性地洗脱HA标签蛋白。洗脱的蛋白不含抗体，处于天然状态，适用于进一步的功能研究。该肽还可用作Western印迹（点印迹或直接检测）的阳性对照。可将其点样至膜上（每点0.1-10 ug），并用抗HA抗体进行检测，以验证抗体的特异性和灵敏度。在免疫荧光阻断实验中，游离的HA肽（10-100 uM）可与抗HA抗体预孵育，以阻断其与HA标签蛋白的结合，作为特异性对照。HA肽本身不具有生物活性，它不与流感病毒或任何其他受体结合。三氟乙酸盐不影响其作为表位竞争剂的用途。在细胞培养中，该肽在所用浓度（0.1-1 mM，用于短期孵育）下无毒性。从细胞裂解液中纯化HA标签蛋白时，通常在洗脱缓冲液（例如，pH 7.4的PBS或pH 3.0的甘氨酸-HCl缓冲液，随后进行中和）中使用该肽，浓度为0.1-1 mg/mL（约50-500 uM）。可以通过修饰（例如生物素化、荧光标记）对肽进行定制合成，以用于其他检测方法。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
不适用。HA肽TFA并非药物，不用于动物疗效研究。它是一种用于体外蛋白质纯化和检测的研究试剂。该肽可用于离体实验，例如从组织裂解液中洗脱HA标签蛋白，但不能用于体内给药。假设进行一项体内研究（并不常见），可以静脉注射游离肽（10-100 mg/kg），但不会产生治疗效果，因为它会被迅速清除。目前尚无此类研究发表。HA肽仅供实验室使用。
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| 酶活实验 |
对于非细胞结合实验，HA肽TFA可用于ELISA或SPR实验中，以测定抗HA抗体的亲和力。ELISA实验步骤如下：将HA肽（0.1-10 ug/mL）溶于碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液（pH 9.6）中，包被于96孔MaxiSorp板，4℃过夜。用3% BSA的PBS溶液封闭，37℃孵育1小时。加入不同浓度（0.1-1000 ng/mL）的抗HA抗体（例如16B12），溶于含0.05% Tween-20的PBST溶液中，室温孵育1-2小时。洗涤后，加入HRP标记的二抗（抗小鼠IgG），孵育，并用TMB底物显色。在450 nm处测定吸光度。由此确定抗体结合的EC50值。对于竞争性ELISA，将固定浓度的抗HA抗体与不同浓度的游离HA肽（0.01-1000 uM）孵育30分钟，然后将混合物加入HA肽包被的酶标板上。测定肽阻断抗体结合的IC50值。对于表面等离子共振（SPR）：通过胺偶联将HA肽固定在CM5传感器芯片上。将不同浓度的抗HA抗体（0.1-1000 nM）流过芯片。根据结合和解离曲线计算KD（解离常数）。高亲和力抗HA抗体的KD通常在低纳摩尔范围内（例如，1-20 nM）。这些检测方法用于表征抗体和研究抗体-抗原相互作用。这些检测方法不使用TFA盐；肽通常溶解在PBS或水中。游离碱具有活性。为了测定抗HA树脂的结合情况，可以进行下拉实验：将抗HA抗体树脂（例如琼脂糖珠）与HA肽（0.1-1 mg/mL）在PBS缓冲液中于4℃孵育1-2小时。离心后，取上清液，通过HPLC或BCA法分析未结合的肽。计算树脂的结合容量（mg肽/mL树脂）。这对于优化洗脱条件至关重要。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的检测，HA肽TFA不能直接用于细胞，因为它不具有细胞渗透性。然而，它可用于从细胞裂解液中纯化蛋白质。例如，表达HA标签蛋白的HEK293细胞在裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1% Triton X-100、蛋白酶抑制剂）中裂解。通过离心澄清裂解液。向裂解液中加入抗HA抗体树脂（例如，抗HA琼脂糖珠），并在4℃下旋转孵育2-4小时。用裂解缓冲液洗涤树脂3-5次。加入含有HA肽TFA（0.1-1 mg/mL，溶于PBS或50 mM Tris-HCl pH 8.0）的洗脱缓冲液洗脱HA标签蛋白。在4℃下轻柔摇晃孵育30-60分钟。收集洗脱液（上清液）。重复洗脱步骤一次。合并洗脱液，并通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色或Western blot进行分析。洗脱的蛋白质可用于功能分析（激酶活性、DNA结合等）。可以使用TFA盐；肽应溶解于洗脱缓冲液中，必要时将pH值调节至7.0-8.0。作为对照，使用乱序的HA肽（例如YAPDYVPDY）来验证特异性。对于免疫荧光阻断，将表达HA标签蛋白的细胞固定、透化，然后与预先用HA肽（50-200 uM）孵育30分钟的抗HA抗体孵育。这可以阻断抗体结合，并作为特异性对照。在阻断的样品中不应观察到染色。对于流式细胞术，可以进行类似的阻断实验。该肽不直接用于处理活细胞。所有实验均应设置适当的对照。HA肽TFA应以冻干粉末形式储存于-20℃。使用时，用去离子水或PBS配制成1-10 mg/mL的溶液，并分装后储存于-20℃。避免反复冻融。
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| 动物实验 |
不适用。HA肽TFA不用于动物实验。因此，目前没有可用的体内动物实验方案。该肽可用于离体实验（例如，从组织裂解液中洗脱HA标签蛋白），但不能注射到动物体内。对于希望检测游离HA肽体内分布的研究人员（可能性不大），他们可以使用荧光染料或放射性标记物（例如，125I-HA肽）标记该肽，然后将其静脉注射到小鼠体内。1-4小时后，收集器官并测量标记物含量。然而，这并非标准操作流程，也没有相关数据发表。HA肽是一种研究试剂，而非候选药物。它不适用于体内实验。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无HA肽TFA的具体药代动力学(PK)数据。该肽由9个氨基酸组成（分子量约为1.1 kDa），若静脉注射，会因肾小球滤过（肾清除）和蛋白水解而迅速从血液循环中清除，血浆半衰期仅为数分钟（5-15分钟）。该肽不具有口服生物利用度。TFA盐不影响其药代动力学。本产品不适用于体内研究，因此未报告其药代动力学参数。该肽仅用于体外研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无HA肽TFA的具体毒性数据。由于它是由天然存在的L-氨基酸组成的短肽，因此通常认为其毒性较低。在体外，该肽（浓度高达1 mg/mL）在用于洗脱方案的短期（1-2小时）孵育期间对HEK293、HeLa或其他细胞无细胞毒性。在高浓度（1-10 mg/mL）下进行长期（24-72小时）孵育可能会因肽负荷过高而导致一些细胞应激，但这并非普遍现象。TFA盐（三氟乙酸盐）含量低（等摩尔），在所用浓度下无毒性。尚未进行遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。应采取标准的实验室安全防护措施（手套、实验服、护目镜）。本产品仅供研究使用，不得用于人类或兽医用途。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
HA标签（血凝素标签）是分子生物学中最广泛使用的表位标签之一。它来源于人流感病毒血凝素蛋白（氨基酸残基98-106，序列YPYDVPDYA）。HA标签体积小（仅由9个氨基酸组成），具有亲水性，并且在大多数情况下不会干扰蛋白质的折叠或功能。它可以融合到蛋白质的N端、C端或内部。市售的抗HA抗体（例如12CA5、16B12、HA-7、HA-11）可用于检测（Western blot、免疫荧光、免疫细胞化学、流式细胞术）、免疫沉淀（IP）和HA标签蛋白的亲和纯化。游离的HA肽（YPYDVPDYA）用作竞争剂，可在温和、非变性条件下从抗HA亲和树脂上洗脱HA标签蛋白，从而保持蛋白活性。TFA盐用于提高合成肽的溶解度和稳定性。HA肽并非药物，不具有任何治疗用途。它是一种研究级化学品，仅供实验室使用。本产品仅供研究用途，未经批准用于临床或兽医用途。
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| 分子式 |
C55H68F3N9O19
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|---|---|
| 分子量 |
1216.17
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| 相关CAS号 |
HA Peptide;92000-76-5
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :≥ 100 mg/mL (~82.23 mM)
H2O :~50 mg/mL (~41.11 mM) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1.25 mg/mL (1.03 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (1.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (1.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8223 mL | 4.1113 mL | 8.2225 mL | |
| 5 mM | 0.1645 mL | 0.8223 mL | 1.6445 mL | |
| 10 mM | 0.0822 mL | 0.4111 mL | 0.8223 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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