| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Grb2 SH2 domain (Src Homology 2 domain of growth factor receptor-bound protein 2). Grb2 is a key adaptor protein that links activated receptor tyrosine kinases (RTKs) to the Ras/MAPK signaling pathway. The SH2 domain of Grb2 binds to specific phosphotyrosine (pY) motifs (pYXNX) on activated RTKs (e.g., EGFR, HER2, PDGFR, FGFR) and on scaffolding proteins such as IRS1 and SHC. The SH2 domain contains a conserved binding pocket that recognizes the phosphotyrosine residue and the surrounding amino acid sequence. Grb2 SH2 domain inhibitor 1 is a cyclic peptide that is structurally constrained to mimic the natural ligands of the SH2 domain. By binding to the Grb2 SH2 domain with high affinity, this inhibitor competitively blocks the association of Grb2 with tyrosine-phosphorylated receptors, preventing the formation of Grb2-SOS complexes and subsequent activation of Ras and downstream effectors (Raf, MEK, ERK). The cyclic structure and D-amino acid content provide enhanced proteolytic stability and cell permeability. The inhibitor is selective for the Grb2 SH2 domain over other SH2 domains.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，Grb2 SH2结构域抑制剂1 TFA能以高亲和力（Ki值在低纳摩尔至亚微摩尔范围内）与Grb2 SH2结构域结合。该环状肽（AFΦRpprrfq）具有一种受限构象，能够嵌入SH2结构域的结合口袋，模拟天然的含磷酸酪氨酸配体。利用重组Grb2 SH2结构域蛋白，通过荧光偏振（FP）或表面等离子共振（SPR）分析对该抑制剂进行了表征。在细胞实验中，由于其细胞穿透肽（CPP）特性，该环状肽能够透过细胞膜。在1-50 uM的浓度范围内，该抑制剂能够阻断Grb2与EGFR或其他受体酪氨酸激酶（RTK）的相互作用，这已通过共免疫沉淀（Co-IP）实验得到证实（例如，EGF刺激后Grb2与EGFR的共沉淀减少）。 Grb2 SH2结构域抑制剂1以剂量依赖的方式抑制EGF诱导的下游信号通路激活，包括降低ERK1/2 (p-ERK)、AKT和PLCγ的磷酸化水平。在增殖实验中，该抑制剂（1-50 uM）可降低依赖于RTK-Grb2信号通路的癌细胞系（例如乳腺癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤）的活力和增殖能力，IC50值在1-20 uM范围内。该抑制剂还可在体外抑制非锚定依赖性克隆形成（软琼脂克隆形成实验）和细胞迁移（Transwell或划痕实验）。三氟乙酸盐不影响其生物活性。对照肽（乱序序列或线性肽）用作阴性对照。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，Grb2 SH2结构域抑制剂1 TFA已在临床前小鼠模型中显示出抗肿瘤活性。在利用人癌细胞系（例如乳腺癌MDA-MB-231、肺癌A549或胶质母细胞瘤U87MG）进行的异种移植研究中，全身性给予该环状肽（10-50 mg/kg，腹腔或静脉注射，每日或隔日一次，持续2-4周）可降低肿瘤生长速度，与载体对照组相比，肿瘤生长抑制率（TGI）达到40-70%。该抑制剂还能减少乳腺癌或肺癌模型中的肿瘤转移（例如，静脉注射1 × 10^6个癌细胞以建立肺转移，随后进行肽治疗）。该抑制剂通常耐受性良好，在治疗剂量下未观察到明显的体重减轻或明显的毒性反应。肿瘤组织的药效学分析显示，该化合物可降低p-ERK水平、降低Ki67增殖指数并增加细胞凋亡（TUNEL阳性）。与线性肽相比，该化合物的细胞穿透性和环状结构使其在体内具有更高的代谢稳定性。然而，作为一种肽，其血浆半衰期仍然相对较短（30-120分钟），需要频繁给药。该化合物以三氟乙酸盐的形式配制；注射前通常将该肽溶解于生理盐水或PBS中。Grb2 SH2结构域抑制剂1是一种研究性化合物，尚未获准用于临床。
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| 酶活实验 |
对于直接结合实验，荧光偏振 (FP) 竞争性结合实验是标准方法。将重组人 Grb2 SH2 结构域蛋白（His 标签，10-50 nM）与荧光标记的磷酸肽示踪剂（例如，FITC 标记的 EGFR 衍生磷酸肽 (pY1068)：FITC-Ahx-GpYINQ-NH2）在结合缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% NP-40、0.1 mg/mL BSA）中于黑色 384 孔板中孵育。示踪剂的浓度固定在接近其解离常数 (Kd) 的浓度（通常为 10-50 nM）。加入不同浓度的未标记 Grb2 SH2 结构域抑制剂 1（0.001-100 uM），并在室温下孵育 30-60 分钟以达到平衡。使用酶标仪测量荧光偏振 (FP)（激发波长 485 nm，发射波长 520 nm）。IC50（抑制 50% 示踪剂所需的抑制剂浓度）通过非线性回归（四参数逻辑拟合）确定。Ki 使用 Cheng-Prusoff 方程计算：Ki = IC50 / (1 + [示踪剂]/Kd)。对于表面等离子体共振 (SPR)：将 Grb2 SH2 结构域固定在 CM5 传感器芯片上。将浓度递增的抑制剂（0.1-50 uM）溶于运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.005% P20）中，并使其流过传感器表面。记录结合和解离阶段，并使用 1:1 Langmuir 结合模型计算动力学参数（kon、koff、KD）。或者，可以进行基于酶联免疫吸附试验 (ELISA) 的结合试验：将生物素标记的磷酸化肽（EGFR-pY1068 肽）固定在链霉亲和素包被的微孔板上。加入 Grb2 SH2 结构域蛋白，并用抗 Grb2 抗体或 His 标签抗体检测结合，随后加入 HRP 标记的二抗和 TMB 底物。加入不同浓度的抑制剂以与肽竞争 Grb2 结合位点。测定 IC50 值。抑制剂的测试浓度范围通常为 0.01-100 uM。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的检测，将依赖于RTK-Grb2信号通路的癌细胞系（例如，EGFR扩增或过表达的细胞系，如A431、MDA-MB-468、HCC827或HER2阳性BT474）培养于含10% FBS的适宜培养基（DMEM、RPMI-1640）中，培养条件为37℃、5% CO2。将细胞接种于6孔板（5 × 10⁵个细胞/孔）或96孔板（5 × 103个细胞/孔）。次日，将细胞置于无血清培养基（0.5% FBS）中过夜，以降低基础信号通路活性。将Grb2 SH2结构域抑制剂1 TFA（或对照肽）溶解于无菌PBS或水中（配制成10-50 mM的储备液），然后用无血清培养基稀释。将细胞用浓度为 1-50 uM 的抑制剂处理 2-24 小时。对于需要刺激的实验，肽处理后，用 EGF（50-100 ng/mL）在 37℃ 下刺激细胞 5-15 分钟。然后用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 缓冲液裂解细胞。用 BCA 法测定蛋白浓度。将细胞裂解液（20-40 ug 蛋白）进行 SDS-PAGE 电泳分离，转移至 PVDF 膜，并用以下一抗进行免疫印迹：抗磷酸化 ERK1/2 (Thr202/Tyr204)、抗总 ERK、抗磷酸化 AKT (Ser473)、抗总 AKT、抗磷酸化 EGFR (Tyr1068) 和抗 β-肌动蛋白（内参）。应用二抗（HRP标记），并通过化学发光法（ECL）检测条带。对于Grb2与EGFR的共免疫沉淀（Co-IP），细胞用抑制剂（10-50 uM，2-4 h）处理，用EGF（100 ng/mL，5 min）刺激，然后在非变性裂解缓冲液中裂解。细胞裂解液与抗EGFR抗体在4℃孵育过夜，然后加入Protein A/G琼脂糖珠孵育2小时。洗涤琼脂糖珠，洗脱结合的蛋白，通过SDS-PAGE分离，并用抗Grb2和抗EGFR抗体进行免疫印迹分析。对于细胞增殖实验，将细胞接种于96孔板（5 × 10^3 个细胞/孔），并用抑制剂（0.1-100 uM）处理48-72小时。细胞活力采用 MTT、CCK-8 或 CellTiter-Glo 法进行评估。软琼脂克隆形成实验：将细胞与含有抑制剂（1-50 uM）的 0.3% 琼脂混合，铺于 6 孔板中 0.6% 琼脂基质上。2-3 周后，用结晶紫染色并计数克隆。迁移实验：使用 Transwell 小室（孔径 8 um）。将细胞（2 × 10⁴ 个细胞/孔，溶于无血清培养基）用抑制剂（1-50 uM）处理后接种于上室；下室含有 10% FBS 作为趋化因子。24 小时后，固定、染色并计数迁移的细胞。所有实验均应设置三个复孔，并至少重复 3 次。TFA 盐可溶于水和 PBS。注意：DMSO可用于配制储备液，但培养基中DMSO浓度应避免超过0.1%。该抑制剂在-20℃下可稳定保存数月。应同时评估细胞毒性，以确保观察到的抑制作用并非由非特异性毒性引起。
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| 动物实验 |
在体内研究中，使用雌性或雄性免疫缺陷小鼠（例如，nu/nu裸鼠、SCID或NOD-SCID小鼠，5-7周龄）构建异种移植模型。将人癌细胞（5 × 10^6个细胞，溶于100 μL PBS）皮下注射到小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³（7-14天）时，将小鼠随机分组（每组n=8-10）。Grb2 SH2结构域抑制剂1 TFA配制成合适的溶剂。腹腔注射（ip）给药时：将肽溶解于无菌生理盐水或PBS中，浓度为10-20 mg/mL，每日注射10-50 mg/kg（每日一次或两次），持续2-4周。静脉注射（iv）：使用相同剂量，但每次注射体积调整为 100-200 μL（尾静脉注射）。对照组接受相同剂量的赋形剂（PBS 或生理盐水）或对照肽（乱序环状肽）。每 2-3 天测量一次体重；每 2-3 天使用数字游标卡尺测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）。在生存研究中，监测小鼠是否达到人道终点（肿瘤体积 >2000 mm³，体重下降 >20%）。研究结束时（通常当赋形剂对照组肿瘤体积达到 1500-2000 mm³ 时），处死小鼠，切除肿瘤，称重并拍照。将肿瘤组织切成小块：一部分用液氮速冻，用于蛋白质提取和Western blot分析（p-ERK、p-AKT、p-EGFR、Grb2）；另一部分用10%福尔马林固定，用于组织学（H&E染色）和免疫组织化学分析（Ki67增殖指数、TUNEL凋亡检测和CD31微血管密度检测）。转移研究：通过尾静脉注射癌细胞（例如，1 × 10^6 MDA-MB-231细胞，溶于200 μL PBS）建立肺转移模型。从第1天开始给予Grb2 SH2结构域抑制剂1（10-50 mg/kg，腹腔注射，每日一次）。4-8周后，取出肺组织，用Bouin氏液或福尔马林固定，并通过肉眼观察或在解剖显微镜下计数转移结节。药代动力学研究：单次腹腔注射或静脉注射后，在不同时间点（0、15、30、60、120、240 分钟）采集血样；采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析血浆中肽的浓度。TFA 盐适用于体内制剂，但注射时可将 TFA 反离子替换为乙酸根离子。所有动物实验程序均须经机构动物护理与使用委员会（IACUC）批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无Grb2 SH2结构域抑制剂1 TFA的详细药代动力学(PK)数据。该化合物是一种环状细胞穿透肽（分子量约为1.5 kDa），由于其环状结构和D-氨基酸（D-精氨酸、D-脯氨酸）的存在，与线性肽相比具有更高的代谢稳定性。这种结构使其能够抵抗血清和组织肽酶的蛋白水解降解。在小鼠腹腔注射(ip)或静脉注射(iv)后，预计其血浆半衰期(t1/2)为30-120分钟，显著长于典型的线性肽（<5分钟）。该化合物可能在包括肿瘤在内的组织中具有中等程度的分布，这与其抗肿瘤活性相符。其清除可能主要通过肾脏滤过（肾小球滤过）进行，肝脏代谢次之。TFA盐不影响其药代动力学性质。预计其口服生物利用度较低（<5%）。详细的药代动力学研究：向小鼠（每个时间点 n=3）静脉或腹腔注射肽（10-20 mg/kg）。分别于给药后 0、5、15、30、60、120、240 和 480 分钟采集血液样本。采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 分析血浆，并使用稳定同位素标记的内标（如有）。通过非房室模型分析计算药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、t1/2、CL、Vd）。该化合物为研究工具，而非临床候选药物；其药代动力学数据尚未广泛发表。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无Grb2 SH2结构域抑制剂1 TFA的具体毒性数据。体外实验表明，该肽在浓度高达50-100 μM、作用48-72小时的条件下，对癌细胞系通常耐受良好，且在治疗浓度下对正常细胞（例如成纤维细胞）的细胞毒性极低。体内异种移植研究中，腹腔注射Grb2 SH2结构域抑制剂1，剂量高达50 mg/kg/天，持续2-4周，通常耐受良好，未见死亡、显著体重下降（>15%）或明显器官异常的报道。未见特定靶器官毒性的报道。较高剂量（>100 mg/kg）可能因非特异性作用引起注射部位反应、轻度嗜睡或胃肠道紊乱。尚未进行遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。TFA盐含量低，被认为无毒。由于该化合物可阻断 Grb2 介导的信号传导，长期抑制可能干扰正常的细胞增殖和伤口愈合，但这一点尚未得到充分研究。该肽仅供研究使用，未经批准用于人体。应采取标准的实验室安全防护措施（手套、实验服、护目镜）。Grb2 SH2 结构域抑制剂 1 并非治疗药物，不应用于人体。
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| 参考文献 |
[1]. Wen J,et al. Rational design of cell-permeable cyclic peptides containing a d-Pro-l-Pro motif. Bioorg Med Chem. 2020 Oct 15;28(20):115711.
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| 其他信息 |
Grb2（生长因子受体结合蛋白2）是一种衔接蛋白，在将活化的受体酪氨酸激酶（RTK）与Ras/Raf/MEK/ERK信号通路偶联方面发挥着核心作用，该通路控制着细胞增殖、分化、存活和迁移。Grb2包含一个SH2结构域和两个SH3结构域。SH2结构域与活化受体（例如EGFR、HER2、PDGFR、FGFR、VEGFR、MET、IGF-1R）和衔接蛋白（例如SHC、IRS1）上的特定磷酸酪氨酸基序（pYXNX）结合。SH3结构域与鸟嘌呤核苷酸交换因子SOS（七子之子）中的富含脯氨酸的基序结合，从而激活Ras。Grb2在多种癌症中过表达或过度激活，并与预后不良、化疗耐药和转移相关。 Grb2 SH2结构域抑制剂1是一种环状肽抑制剂，靶向SH2结构域，是一种大环、可透过细胞膜且蛋白水解稳定的抑制剂。环状结构和D-氨基酸的引入增强了其稳定性。该化合物用作化学探针，以验证Grb2作为治疗靶点的可能性。截至2026年，尚无Grb2抑制剂获准用于临床。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 分子式 |
C68H95N20O15P.XC2HF3O2
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|---|---|
| 分子量 |
1463.58 (free base)
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| 相关CAS号 |
Grb2 SH2 domain inhibitor 1
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :≥ 100 mg/mL
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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