| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Galpha subunits of heterotrimeric G proteins (Gi, Go, Gs). The G-Protein antagonist peptide is a hydrophobic, truncated substance P-related peptide that binds directly to Galpha subunits (or the receptor-G protein interface), thereby competing with activated GPCRs for G protein binding. Unlike many GPCR antagonists that act at the receptor orthosteric site, this peptide targets the G protein itself. By binding to Galpha subunits, it prevents the receptor-catalyzed exchange of GTP for GDP, effectively blocking G protein activation. This antagonism is receptor-independent and applies to multiple G protein subtypes, including Gi, Go, and Gs, as demonstrated by the peptide's ability to block M2 mAChR-mediated activation of Gi/Go and beta-adrenergic receptor-mediated activation of Gs in reconstituted phospholipid vesicles. The peptide does not discriminate among Galpha subtypes. Its hydrophobic nature may facilitate insertion into the membrane bilayer to access the G protein binding interface. The TFA salt is used for solubility. This peptide is a research tool for dissecting GPCR-G protein interactions.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，G蛋白拮抗肽TFA（pGlu-Gln-Trp-Phe-Trp-Trp-Met-NH2）以非竞争性方式抑制GPCR对异源三聚体G蛋白（Gi、Go、Gs）的激活。在含有纯化的M2毒蕈碱胆碱能受体（M2 mAChR）和Gi或Go的重组磷脂囊泡系统中，该肽（10-500 uM）可阻止激动剂诱导的GTPγS结合和GTP水解，其IC50值在10-100 uM范围内。具体而言，该肽阻断了M2 mAChR介导的Gi和Go激活，这可通过受体促进的GTP水解来检测。类似地，该肽在重组囊泡中抑制β-肾上腺素能受体介导的Gs激活。该肽无需受体即可与G蛋白结合；它可在体外直接与纯化的Gα亚基相互作用。其对G蛋白结合的抑制作用是竞争性的，但增加受体浓度并不能克服这种抑制作用，表明该肽直接作用于Gα亚基。该肽的作用机制被认为涉及与Gα亚基的C端区域或与受体相互作用的开关区域结合。由于其亲水性和分子量，该肽在未经透化或显微注射的完整细胞中不具有活性。它主要用于无细胞体系（纯化蛋白或膜制剂）中研究G蛋白偶联。三氟乙酸盐不影响该肽的活性。该序列有时被称为“G蛋白拮抗肽”或“M35”。
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| 体内研究 (In Vivo) |
不适用（用于无细胞体系）。G蛋白拮抗肽TFA不适用于体内给药；它仅用于无细胞生化分析或透化细胞。由于其分子量（约1.2 kDa）和亲水性，它无法穿过细胞膜。因此，目前尚无体内活性数据，也未见该肽在动物疾病模型中的研究。对于离体研究，可将该肽添加到组织（例如脑、心脏、肺）的膜制备物中，以阻断受体-G蛋白偶联。例如，在表达M2 mAChR或β-肾上腺素能受体的脑膜中，该肽（10-200 uM）可抑制激动剂刺激的GTPγS结合。然而，此类应用仅限于体外/离体，而非体内。对于基于细胞的实验，必须通过显微注射或电穿孔递送该肽，或者必须开发细胞可渗透版本。本产品是用于研究 G 蛋白信号传导机制的研究试剂，并非治疗药物。
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| 酶活实验 |
对于直接结合实验（非细胞实验），可使用荧光偏振 (FP) 或表面等离子共振 (SPR) 来测量肽与纯化的 Gα 亚基的结合。FP 实验中，将纯化的重组 Gαi1、Gαo 或 Gαs 蛋白（10-50 nM）与荧光标记的 G 蛋白拮抗肽（FITC-肽，10-50 nM）在结合缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% NP-40、0.1 mg/mL BSA）中于黑色 384 孔板中孵育。室温孵育 30-60 分钟后，测量荧光偏振（激发波长 485 nm，发射波长 520 nm）。Kd 值通过单一位点结合双曲线从直接结合曲线确定。对于竞争性荧光偏振 (FP) 检测，加入未标记的 G 蛋白拮抗肽与 FITC 标记的肽竞争结合 Gα 蛋白；测定 IC50 值，并计算 Ki 值。对于表面等离子共振 (SPR) 检测：将 Gα 蛋白固定在 CM5 传感器芯片上。将浓度递增的肽溶液（0.1-1000 uM）流过芯片表面，并记录传感器图。计算 KD 值。对于功能性检测（受体促进的 GTP 水解）：将 M2 mAChR 或 β2-肾上腺素能受体分别与 Gi/Go 或 Gs 蛋白重组到磷脂囊泡中。将囊泡与不同浓度的 G 蛋白拮抗肽（0-1000 uM）在 30℃ 下孵育 10 分钟。然后，加入激动剂（M2 受体激动剂为卡巴胆碱，100 uM；β2 受体激动剂为异丙肾上腺素，1 uM）和 [γ-32P]GTP（或未标记的 GTP）以启动反应。孵育（5-15 分钟）后，终止反应，并测定水解的 Pi (32P) 的量。抑制率以无肽对照组为基准计算。激动剂刺激的 GTPase 活性抑制的 IC50 值通常在 10-100 uM 范围内。对于 GTPγS 结合测定：在有肽和无肽的情况下，测定激动剂刺激的 [35S]GTPγS 与膜或重组囊泡的结合。例如，将表达 M2 mAChR 或 β2-AR 的大鼠脑膜与 0.1-0.5 nM [35S]GTPγS、10 uM GDP、激动剂（卡巴胆碱或异丙肾上腺素）以及不同浓度的肽在测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.4、100 mM NaCl、5 mM MgCl2、1 mM DTT）中孵育。在 30℃ 下孵育 60 分钟后，通过真空过滤（GF/B 滤膜）分离结合的 [35S]GTPγS，并用液体闪烁计数法进行定量。计算抑制率。该肽的有效浓度范围为 1-500 uM。所有测定均应重复三次，且至少进行 3 次独立实验。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的检测，该肽不具有细胞渗透性；因此，必须通过细胞透化、显微注射或使用细胞穿透肽偶联物进行递送。一种典型的方法是使用洋地黄皂苷透化的细胞。例如，将表达 M2 mAChR 或 β2-AR 的 HEK293 细胞培养于 6 孔板中。用冰冷的 PBS 洗涤细胞，然后在冰上用 20-50 ug/mL 洋地黄皂苷的细胞内缓冲液（20 mM HEPES pH 7.2、100 mM KCl、5 mM MgCl2、2 mM EGTA、0.5 mg/mL BSA、1 mM DTT、1 mM ATP、0.1 mM GTP）透化 10 分钟。去除细胞膜通透缓冲液后，将细胞与不同浓度的G蛋白拮抗肽（0-1000 uM）在细胞内缓冲液中于30℃孵育30分钟。然后加入激动剂（卡巴胆碱或异丙肾上腺素），10-15分钟后裂解细胞，并测定GTP酶活性或GTPγS结合情况。或者，也可以使用显微操作仪将肽（1-100 uM，溶于注射缓冲液）显微注射到细胞中。由于这些方法较为复杂且通量较低，大多数研究使用细胞膜制剂而非完整细胞。因此，目前尚无针对完整、未通透细胞的详细细胞实验方案。对于需要进行细胞内递送的研究人员，建议将肽与细胞穿透肽（例如TAT、穿透肽）偶联。然而，本产品不包含此类修饰肽。 TFA盐可用于配制溶于水或10% DMSO的储备液。电穿孔时：将细胞悬浮于含有10-100 uM肽的电穿孔缓冲液中，并使用Gene Pulser（Bio-Rad）进行电穿孔。回收后，将细胞铺板并用于信号通路检测。这些方法可行，但并非常规方法。在不进行细胞膜通透处理的情况下，该肽通常不用于标准的细胞检测。
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| 动物实验 |
不适用（无细胞工具）。G蛋白拮抗肽TFA不用于体内动物研究，因为它无法穿过细胞膜，且会迅速从循环系统中清除。目前尚无已发表的动物体内疗效或毒性研究。对于希望在疾病动物模型中测试该肽的研究人员，需要使用细胞穿透性版本（例如，TAT偶联的G蛋白拮抗肽）。然而，此类修饰肽不在本产品范围内。目前尚无针对该特定肽的标准体内实验方案。该肽严格来说是一种用于体外和离体膜分析的生化研究工具，不适用于活体动物。如果研究人员希望克服上述限制在动物身上测试该肽，典型的方案是将其与细胞穿透肽（CPP）偶联，然后以1-20 mg/kg的剂量进行静脉（iv）或腹腔（ip）给药，但这超出了本产品的范围。文献中尚未报道此类研究。因此，建议用户仅将该肽作为体外试剂使用。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
不适用。该G蛋白拮抗肽不用于体内研究，且无药代动力学数据。该肽为7个氨基酸的肽（分子量约1.2 kDa），若静脉给药，会迅速经肾脏（肾小球滤过）清除，并被蛋白酶降解（半衰期<5分钟）。其口服生物利用度低。三氟乙酸盐不影响其药代动力学特性。该肽仅供体外研究使用。对于涉及无细胞系统或膜制剂的研究，药代动力学无关紧要。一些研究人员可能会将该肽与载体偶联（例如，聚乙二醇化或与细胞穿透肽融合）以提高稳定性，但本产品不包含此类衍生物。因此，未报告或提供详细的药代动力学参数（吸收、分布、代谢、排泄、半衰期、生物利用度）。本产品仅供研究使用，不得用于药物开发。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于G蛋白拮抗肽TFA的具体毒性数据。TFA是一种由天然存在的L-氨基酸（除N端焦谷氨酸外）组成的短肽，通常被认为毒性较低。体外实验表明，当胞外添加浓度高达500 μM时，该肽对细胞无细胞毒性；但由于其细胞渗透性低，无法进入细胞，因此不会影响细胞活力。在透化细胞制备物中，浓度高达500 μM的TFA可能会因透化过程本身（洋地黄皂苷）而导致细胞完整性受损，但这并非由该肽引起。尚未进行遗传毒性、器官毒性、致癌性或生殖毒性研究。TFA盐（三氟乙酸盐）含量低，被认为无毒。该肽仅供研究使用，未经批准用于人体或动物。标准的实验室安全防护措施（手套、实验服、护目镜）即可。由于该肽生物利用度低且缺乏细胞渗透性，因此不适用于体内实验。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
G蛋白偶联受体（GPCR）是最大的膜受体家族，它们通过异源三聚体G蛋白（Gα、Gβγ）传递信号。G蛋白拮抗肽，例如本文所述的肽，已被用于研究受体-G蛋白偶联的分子细节。这种特定的肽（pGlu-Gln-Trp-Phe-Trp-Trp-Met-NH2）由Mukai等人（1992）发现，也称为“G蛋白拮抗肽”或“M35”。它是通过删除P物质（一种神经肽）的N端残基并在C端进行酰胺化而衍生的。该肽常与重组的受体-G蛋白系统联合使用，以研究G蛋白激活的特异性和机制。本产品以三氟乙酸盐的形式提供，以提高溶解度和稳定性。该肽仅供研究使用，并非药物。它尚未获准用于临床或治疗用途。该肽可以冻干粉末的形式储存在-20℃，并可在水或DMSO中复溶。
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| 分子式 |
C59H65F3N12O11S
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| 分子量 |
1207.28
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| 相关CAS号 |
G-Protein antagonist peptide;143675-79-0
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~82.83 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8283 mL | 4.1415 mL | 8.2831 mL | |
| 5 mM | 0.1657 mL | 0.8283 mL | 1.6566 mL | |
| 10 mM | 0.0828 mL | 0.4142 mL | 0.8283 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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