| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MHC class I H-2Db (in mice) and potentially HLA in humans. Gp100 (25-33), human is a 9-amino acid peptide epitope derived from the human melanoma antigen gp100 (Pmel17). The human peptide sequence is KVPRNQDWL. This peptide is presented on the MHC class I molecule H-2Db in mice (and can also be presented by certain human HLA alleles, though its primary use is in mouse models due to its described H-2Db restriction). It is recognized by CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs). The peptide does not bind to a conventional receptor but is presented by MHC molecules to the T cell receptor (TCR) of specific T cells. Gp100 is highly expressed in melanoma cells, making this peptide a target for cancer immunotherapy. The human gp100 peptide is often used in mouse models (transgenic or adoptive transfer) to study melanoma immunity, as well as in human T cell studies using HLA-matched cells.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验中，人源TFA肽Gp100 (25-33) (KVPRNQDWL)用于刺激来自HLA-A2阳性供体的人CD8+ T细胞（也可用于刺激H-2Db转基因小鼠系统中的T细胞）。该肽（0.01-10 uM）由表达相应MHC分子（HLA-A2或H-2Db）的抗原呈递细胞（APC）呈递给gp100特异性T细胞。T细胞活化通过IFN-γ ELISpot法、IFN-γ和TNF-α的细胞内细胞因子染色（ICS）、增殖（3H-胸苷或CFSE稀释法）以及流式细胞术检测活化标志物（CD69、CD25）的上调来评估。该肽段还可用于扩增黑色素瘤患者外周血单核细胞 (PBMC) 中的 gp100 特异性 T 细胞，用于过继性细胞疗法 (ACT)。在一项研究中，研究人员使用编码人 gp100 的重组痘苗病毒 (rVVgp100) 在脾细胞中生成 CD4+CD8+ 裂解性 T 淋巴细胞，并以该肽段作为靶标来检测细胞毒活性。该肽段不具有直接的酶活性或受体调节活性；其活性由免疫介导。三氟乙酸盐不影响肽段的呈递。该肽段还可用作 MHC-肽四聚体制备的阳性对照，用于检测抗原特异性 T 细胞。在直接 T 细胞活化试验中，该肽段的使用浓度范围为 0.1 nM 至 10 uM。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，人源Gp100（25-33）肽段已被用于黑色素瘤小鼠模型中诱导抗肿瘤免疫反应。一项使用编码人源gp100的重组痘苗病毒（rVV）的研究表明，rVVgp100（腹腔注射，每日两次，连续5天）诱导的T细胞在B16荷瘤小鼠模型中表现出抗肿瘤作用。在B16小鼠黑色素瘤模型（该模型表达鼠源gp100，其与人源gp100具有一定的同源性）中，用人源gp100 25-33肽段进行免疫可以诱导交叉反应性T细胞应答。典型的实验方案：将50-100 ug人Gp100(25-33)肽段（乳化于弗氏完全佐剂(CFA)中）或与CpG(50 ug)混合，皮下注射至C57BL/6小鼠体内进行免疫。可在第7-14天用IFA佐剂进行加强免疫。收集脾细胞，并通过IFN-γ ELISpot、ICS或四聚体染色分析T细胞反应。在肿瘤攻击实验中，小鼠在第-14天和第-7天用肽段（含佐剂）进行免疫，然后在第0天皮下注射B16-F10黑色素瘤细胞（5 × 10⁵个细胞）进行攻击。肽段免疫可能抑制肿瘤生长并延长生存期，尤其是在与免疫检查点抑制剂（抗PD-1、抗CTLA-4）联合使用时。然而，由于人源肽与小鼠序列并非完全匹配（小鼠：EGSRNQDWL vs. 人：KVPRNQDWL），交叉反应性可能有限；因此，通常采用过继转移人源化小鼠的T细胞或使用HLA-A2转基因小鼠（AAD小鼠）的方法。在这些模型中，该肽可用于启动T细胞。TFA盐适用于体内注射，通常以1 mg/mL的浓度溶于PBS缓冲液中。该肽在每只小鼠200 ug的剂量下通常耐受性良好。TFA反离子不会对体内研究造成影响。
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| 酶活实验 |
对于直接结合试验（非细胞试验），可以测定人Gp100 (25-33)肽段（KVPRNQDWL）与MHC I类分子H-2Db的结合亲和力。虽然已知该肽段在小鼠中受H-2Db限制，但它也可能与某些人类HLA I类分子（例如HLA-A*0201）结合。标准的MHC-肽段结合试验使用重组H-2Db或HLA-A2蛋白以及β2-微球蛋白。常用的方法是基于荧光偏振（FP）的竞争性试验。将重组H-2Db/β2m复合物（0.1-1 uM）与荧光标记的参考肽（例如FITC标记的H-2Db结合肽）在结合缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、0.05% NP-40、1 mM DTT、蛋白酶抑制剂）中孵育。加入不同浓度的未标记人Gp100（25-33）肽（0.001-1000 uM），并将混合物在室温下孵育24-48小时，以促进肽的结合和交换。测量荧光强度（激发波长485 nm，发射波长520 nm）。确定IC50值（置换50%参考肽的浓度）。或者，可采用基于 ELISA 的竞争性检测方法：在 96 孔板上包被 H-2Db/β2m 蛋白，加入已知生物素标记的肽段（含或不含未标记的测试肽段），用链霉亲和素-HRP 进行检测，并在 450 nm 处测量吸光度。IC50 值使用四参数逻辑曲线计算。人源肽段与 H-2Db 结合的 Kd 值（或 IC50 值）通常在低微摩尔范围内（例如，0.1-10 uM）。对于与 HLA-A2 的结合：使用重组 HLA-A2/β2m 和参考肽段（例如，Flu M1 58-66、GILGFVFTL）。据报道，人源 gp100 25-33 与 HLA-A2 的结合亲和力（IC50）约为 1-10 uM。对于肽稳定性：将肽在人血清或小鼠血清中孵育（37℃，0-24 小时），并通过 HPLC 或 LC-MS 分析降解情况。
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| 细胞实验 |
对于使用人源细胞的基于细胞的T细胞检测，首先通过Ficoll-Paque密度梯度离心法从HLA-A2阳性的健康供体或黑色素瘤患者中分离外周血单核细胞（PBMC）。然后使用磁珠进行阳性或阴性选择，纯化CD8+ T细胞。对于ELISpot检测：将96孔ELISpot板用抗IFN-γ抗体包被过夜。将CD8+ T细胞（1-2 × 10^5个细胞/孔）与T2-A2细胞（表达HLA-A2的抗原呈递细胞，1 × 10^4个细胞/孔）或树突状细胞（由单核细胞在GM-CSF/IL-4处理5-7天后生成）共培养。加入人Gp100 (25-33)肽（KVPRNQDWL），浓度范围为0.001-1000 nM。在37℃下孵育20-24小时后，按照制造商的说明进行显色，并计数斑点。T细胞扩增：在10-20 U/mL IL-2存在下，用1-10 uM肽刺激CD8+ T细胞，7-14天后，通过ELISpot或铬释放试验检测T细胞的特异性。细胞内细胞因子染色（ICS）：在布雷菲德菌素A（前2小时后加入）存在下，用肽（1-10 uM）刺激CD8+ T细胞6-18小时。然后对细胞进行CD8表面染色、固定、透化处理，并进行IFN-γ和TNF-α染色。使用流式细胞术定量产生细胞因子的CD8+ T细胞。细胞毒性试验（51Cr释放或DELFIA）：将靶细胞（例如，负载0.1-10 uM肽的T2-A2细胞）用51Cr（或BATDA）标记，然后与效应CD8+ T细胞以不同的效应细胞：靶细胞比例共培养。4-6小时后，收集上清液，并测量铬（或铕）的释放量。特异性裂解百分比 =（实验释放量 - 自发释放量）/（最大释放量 - 自发释放量）× 100%。四聚体染色：使用PE标记的HLA-A2/Gp100 25-33四聚体对PBMC或CD8+ T细胞进行染色。将细胞与四聚体（1-2 ug/mL）在室温下孵育30分钟，然后与抗CD8抗体孵育，并通过流式细胞术进行分析。将TFA盐溶于DMSO（10 mM储备液）中，并储存于-20℃。进行检测时，用PBS或培养基稀释。避免反复冻融。所有实验均应包含无关对照肽（例如，HIV gag、流感M1）。对于使用人源肽的小鼠研究，可使用C57BL/6小鼠或HLA-A2转基因小鼠（AAD小鼠）。四聚体染色：市售产品中也含有负载人gp100 25-33肽的MHC-H-2Db四聚体。进行与小鼠肽（V76964）类似的检测。请注意，人源肽通常用于人T细胞检测而非小鼠T细胞检测，但由于其具有交叉限制性，因此也可用于表达H-2Db的小鼠细胞。
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| 动物实验 |
在小鼠体内研究中，使用雌性C57BL/6小鼠（6-8周龄）或HLA-A2转基因小鼠（HHD小鼠或AAD小鼠）。人Gp100（25-33）肽（KVPRNQDWL）以1 mg/mL的浓度溶解于无菌PBS中。进行主动免疫时，将该肽与佐剂乳化。对于CFA/IFA：将等体积的肽溶液（每只小鼠50-100 μg肽）与完全弗氏佐剂（CFA）混合用于初次免疫，或与不完全弗氏佐剂（IFA）混合用于加强免疫。用注射器混合直至形成稳定的乳剂。将100 μL乳剂皮下注射（sc）于尾根部或侧腹部。对于基于 CpG 的免疫：将肽（50-100 μg）与 CpG ODN（50 μg）混合于 PBS 缓冲液中（总体积 100 μL），然后皮下或腹腔注射。典型方案：第 0 天：初次免疫（肽 + CFA）。第 7 或 14 天：加强免疫（肽 + IFA）。在第 14-21 天，收集脾脏用于 T 细胞检测（ELISpot、ICS、四聚体）。对于肿瘤攻击实验：在第 0 天，将 B16-F10 黑色素瘤细胞（5 × 10⁵ 个，溶于 100 μL PBS）皮下注射到右侧腹部。免疫可在肿瘤注射前 14 天和 7 天（预防性）或第 3 天和 10 天（治疗性）进行。监测肿瘤生长情况。对于编码人gp100的重组痘苗病毒（rVVgp100）：用rVVgp100（1 × 10^7 PFU，溶于100 μL PBS，腹腔注射，每日两次，连续5天）免疫小鼠以诱导T细胞应答。一项已发表的研究表明，rVVgp100（腹腔注射，每日两次，连续5天）诱导的T细胞在B16肿瘤小鼠模型中显示出抗肿瘤作用。对于过继转移：将来自免疫小鼠或pmel-1 TCR转基因小鼠（对人gp100具有交叉反应性）的CD8+ T细胞在体外用肽（1 μM）和IL-2扩增，然后静脉注射（5 × 10^6个细胞）至荷瘤小鼠体内。可联合使用免疫检查点抑制剂（抗PD-1、抗CTLA-4）以增强疗效。TFA盐可用于体内注射。必要时调整pH值。所有动物实验均需获得IACUC批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚无关于人源Gp100 (25-33) TFA的详细药代动力学数据。该肽段由9个氨基酸组成（分子量约为1.3 kDa），由于肾脏清除和蛋白水解，静脉或皮下注射后会迅速从血液循环中清除（半衰期<10分钟）。用于免疫接种时，该肽段通常与佐剂（CFA/IFA）结合使用，佐剂可在注射部位形成药物储存库，并在数天至数周内缓慢释放肽段。TFA盐不影响其药代动力学。游离肽段并非用于全身给药；其目的是被抗原呈递细胞（APC）加工以进行抗原呈递。因此，其药代动力学参数未予公布，且与作为免疫原的用途无关。如果将该肽段以纳米颗粒或脂质体制剂的形式递送，其药代动力学持续时间可能会延长，但此类制剂并非该产品的标准制剂。本产品仅供研究使用，并非药品。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于人源Gp100 (25-33) TFA的具体毒性数据。作为一种源自人自身/肿瘤抗原的9个氨基酸肽，它在动物研究中通常具有良好的耐受性。在用该肽（50-100 μg，溶于CFA/IFA）免疫的C57BL/6小鼠中，未观察到明显的急性毒性症状（例如体重减轻、嗜睡、呼吸困难）。注射部位反应（红斑、肿胀）是由佐剂（CFA/IFA）引起的，而非肽本身。一些小鼠可能会出现色素脱失（白癜风），这是由于与小鼠黑素细胞发生交叉反应所致（因为小鼠gp100具有同源性），这是一种靶向自身免疫效应，而非毒性。该模型用于研究癌症免疫疗法的自身免疫副作用。目前尚未报道其具有遗传毒性、致癌性或器官毒性。三氟乙酸盐含量极低，被认为无毒。该肽仅供研究使用，未获准用于人类或兽医用途。应采取标准的实验室安全防护措施（佩戴手套、穿实验服）。该肽不得注射入人体。
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| 参考文献 |
[1]. Overwijk WW, et al. gp100/pmel 17 is a murine tumor rejection antigen: induction of "self"-reactive, tumoricidal T cellsusing high-affinity, altered peptide ligand. J Exp Med. 1998 Jul 20;188(2):277-86.
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| 其他信息 |
人gp100（Pmel17）蛋白是一种黑素细胞特异性糖蛋白，在黑色素瘤细胞中高表达。它是癌症免疫疗法的主要靶点，包括肽疫苗、过继性T细胞疗法（ACT）和免疫检查点抑制剂。gp100 25-33表位（KVPRNQDWL）是一种人源肽，由MHC I类分子（人类为HLA-A2）呈递，并被黑色素瘤患者体内的CD8+ T细胞识别。它已被用于多项黑色素瘤疫苗的临床试验。然而，以三氟乙酸（TFA）盐形式提供的人gp100（25-33）肽仅供研究使用，未经相关监管机构批准（例如IND申请），不得用于人体注射。TFA盐可提高肽的溶解度和稳定性。该肽段还用于在HLA-A2转基因小鼠模型中诱导T细胞反应，它能与H-2Db（小鼠主要组织相容性复合体）结合，并可作为研究交叉限制性T细胞免疫的工具。该肽段并非获批药物，也未获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准的任何适应症。它仅作为生化试剂用于研究目的。
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| 分子式 |
C54H83F3N16O16
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|---|---|
| 分子量 |
1269.33
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| 相关CAS号 |
Gp100 (25-33), human;212370-40-6
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O :~100 mg/mL (~78.78 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 66.67 mg/mL (52.52 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.7878 mL | 3.9391 mL | 7.8782 mL | |
| 5 mM | 0.1576 mL | 0.7878 mL | 1.5756 mL | |
| 10 mM | 0.0788 mL | 0.3939 mL | 0.7878 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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