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Topoisomerase I. Glycyl-Exatecan-d5 hydrochloride is a deuterated analog of Glycyl-Exatecan, which is a derivative of exatecan (DX-8951). Exatecan is a camptothecin analog that inhibits DNA topoisomerase I. Topoisomerase I is an essential nuclear enzyme that relieves torsional stress in DNA during replication, transcription, and recombination by creating single-strand breaks. Exatecan stabilizes the topoisomerase I-DNA cleavage complex, preventing religation of DNA strands, leading to accumulation of DNA breaks, replication fork arrest, and ultimately cell death (apoptosis). The deuterium labeling (d5) does not alter the pharmacological activity of the parent compound but provides a stable isotope tag for quantification. Glycyl-Exatecan-d5 is not intended to be used as a therapeutic agent but as an analytical standard to quantify exatecan or its derivatives in biological samples.
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| 体外研究 (In Vitro) |
不适用（内标）。盐酸甘氨酰依沙替康-d5 不用于生物活性测定，例如测定酶抑制或细胞增殖，因为其用途是作为质谱分析的内标。母体化合物依沙替康 (DX-8951) 是一种强效的拓扑异构酶 I 抑制剂，IC50 值在纳摩尔范围内。体外实验表明，依沙替康可抑制拓扑异构酶 I 介导的 DNA 松弛，并诱导癌细胞系 DNA 损伤，导致细胞周期阻滞（G2/M 期）和细胞凋亡。依沙替康的效力高于伊立替康 (CPT-11)，并已证实对多种癌细胞系有效。非氘代形式的甘氨酰依沙替康是一种水溶性衍生物，可保持对拓扑异构酶 I 的抑制作用。然而，由于同位素取代不会显著改变生物活性，因此氘代形式通常不用于功能测定。出于研究目的，应使用未标记的类似物进行活性测定，而标记的类似物则用于分析定量。目前尚无d5标记化合物的具体EC50或IC50数据。
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| 体内研究 (In Vivo) |
不适用。氘代化合物拟用作生物分析检测中的内标。由于其用途为分析，因此尚未研究Glycyl-Exatecan-d5的体内活性（抗肿瘤功效）。然而，母体化合物Exatecan已在多种癌症（乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌）的小鼠异种移植模型中显示出体内抗肿瘤活性，剂量为5-20 mg/kg，静脉或腹腔注射给药。甲磺酸Exatecan（也称为DX-8951f）已在治疗实体瘤的临床试验中进行研究。如果给药，氘代版本预计具有类似的体内活性，但这并非其预期用途。盐酸盐形式可提高制剂的水溶性。目前尚无该特定同位素变体的体内数据。
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| 酶活实验 |
对于使用 Glycyl-Exatecan-d5 的非细胞酶活性测定，该化合物并非用于测定酶活性，而是用作生物样品 LC-MS/MS 分析中的内标。因此，不适用任何受体/酶结合实验方案。然而，对于非氘代母体化合物（exatecan），可以使用 DNA 松弛实验来测定其对拓扑异构酶 I 的抑制作用。简而言之，将超螺旋质粒 DNA (pBR322) 与重组人拓扑异构酶 I 在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、100 mM KCl、10 mM MgCl2、0.5 mM DTT、30 ug/mL BSA）中，加入不同浓度的 exatecan（0.01-10 uM），于 37℃ 孵育 30 分钟。反应通过加入 SDS 和蛋白酶 K 终止，随后进行苯酚-氯仿抽提。 DNA产物经琼脂糖凝胶电泳分离，松弛（和切口）形式的DNA用溴化乙锭染色显影。IC50是指抑制50% DNA松弛所需的浓度。对于基于荧光的拓扑异构酶I抑制试验，可以使用荧光DNA底物。该试验在96孔板中进行；通过加入拓扑异构酶I启动反应，并随时间测量荧光（例如，来自嵌入染料的荧光）。由此确定IC50值。对于氘代化合物，如果用于竞争实验以置换标记配体，则可以进行标准的拓扑异构酶I结合试验（例如，使用放射性标记寡核苷酸的DNA切割试验），但这并非典型做法。
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| 细胞实验 |
对于基于细胞的检测，使用非氘代母体化合物依沙替康（DX-8951）或甘氨酰依沙替康来评估其抗增殖活性。将癌细胞（例如HCT116、MCF-7、A549、PC-3、BxPC-3）以5 × 10^3个细胞/孔的密度接种于96孔板中，培养基为含10%胎牛血清（FBS）的适宜培养基（RPMI-1640或DMEM）。24小时后，用不同浓度（0.1-1000 nM）的依沙替康或甘氨酰依沙替康处理细胞48-72小时。采用MTT、CCK-8或CellTiter-Glo法检测细胞活力，并计算IC50值。采用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术评估细胞凋亡。采用碘化丙啶染色和流式细胞术进行细胞周期分析。对于DNA损伤，γ-H2AX（Ser139）染色可通过免疫荧光或Western blot进行可视化。对于氘代版本（Glycyl-Exatecan-d5），由于其用作分析标准，通常不进行基于细胞的检测。氘代化合物的盐酸盐（HCl）用于制备生物基质中的校准标准品。对于希望使用d5化合物进行代谢稳定性检测的研究人员，将肝细胞或微粒体与该化合物孵育，然后使用LC-MS/MS监测母体化合物的消失或代谢物的出现，以氘代化合物本身作为底物，非氘代化合物作为内标，反之亦然。典型的代谢测定：将人肝微粒体（0.5 mg/mL）与甘氨酰-依沙坦-d5（1-10 uM）在含有 NADPH（1 mM）的 100 mM 磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中于 37℃ 孵育 0-60 分钟。加入含有内标的乙腈终止反应，并用 LC-MS/MS 分析样品。计算剩余百分比。此为药代动力学/代谢测定，而非活性测定。
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| 动物实验 |
不适用。盐酸甘氨酰依沙替康-d5用作生物分析的内标，不用于动物疗效研究。因此，目前尚无针对该化合物的体内动物实验方案。然而，对于非氘代依沙替康或甘氨酰依沙替康，可采用标准的异种移植模型。例如，将5×10⁶个HCT116结肠癌细胞（或其他癌细胞）皮下注射到5-6周龄的雌性BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分组（每组n=8-10只）。依沙替康甲磺酸盐（DX-8951f）溶于生理盐水或5%葡萄糖溶液中，于第1、5、9天以5-20 mg/kg的剂量静脉注射（每4天一次，共3次）。对照组注射溶剂。每2-3天测量一次肿瘤体积。疗效通过肿瘤生长抑制率（TGI%）进行评估。由于成本和标记问题，d5标记化合物不用于此类研究。对于使用标记化合物作为示踪剂的药代动力学研究，可将d5化合物与非氘代化合物共同给药，以研究大鼠或小鼠的吸收、分布、代谢和排泄（ADME）。典型的药代动力学研究：雄性Sprague-Dawley大鼠（每个时间点n=3-4）接受静脉推注（1-2 mg/kg）或灌胃（5-10 mg/kg）甘氨酰-Exatecan（非标记）和甘氨酰-Exatecan-d5（作为LC-MS/MS校准的内标）的混合物。分别于给药前、5、15、30、60、120、240、360、480、720 和 1440 分钟采集血样。分离血浆后，采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 定量药物浓度，以氘代化合物作为非标记化合物的内标（反之亦然）。采用非房室模型分析计算药代动力学参数（AUC、Cmax、Tmax、t1/2、CL、Vd、生物利用度）。这是氘代化合物在体内的主要应用。然而，在这些研究中，甘氨酰-依沙坦-d5 本身并非药理活性成分。所有动物实验程序均须经机构动物护理与使用委员会 (IACUC) 批准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
氘代形式（Glycyl-Exatecan-d5）预计与非氘代Glycyl-Exatecan具有相同的药代动力学特性，因为在大多数情况下，氘代取代对药代动力学参数的同位素效应极小。Glycyl-Exatecan是Exatecan的水溶性衍生物。Exatecan（DX-8951）在人体内的血浆半衰期约为8-15小时。在啮齿动物中，静脉注射Exatecan后，其半衰期为1-3小时，清除率高（CL ~20-40 mL/min/kg），分布容积大（Vd > 5 L/kg），表明其组织分布广泛。它与血浆蛋白的结合率不高（40-60%）。Exatecan主要以原形经尿液和胆汁排泄。盐酸盐（HCl）使其具有水溶性。对于氘代化合物，采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）进行定量分析。 PK 样品处理：将血浆样品 (50 μL) 与内标（例如，另一种稳定同位素标记化合物）混合，并用乙腈 (3:1) 沉淀蛋白质。离心后，将上清液注入 LC-MS/MS 系统。分离在 C18 反相柱上进行，流动相为 0.1% 甲酸水溶液和乙腈。检测采用正离子电喷雾电离 (ESI) 模式，并使用针对 d5 化合物的多反应监测 (MRM) 转换（例如，d5 的 m/z [M+H]+ 与未标记化合物的比较）。线性范围通常为 0.1-1000 ng/mL。目前尚未发表针对该特定标记化合物的正式 PK 研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于甘氨酰依沙替康-d5盐酸盐的具体毒性数据。母体化合物依沙替康（DX-8951）的毒性特征已得到充分阐明。依沙替康作为一种拓扑异构酶I抑制剂，与其他喜树碱类药物类似，可引起骨髓抑制（中性粒细胞减少症、血小板减少症）、胃肠道毒性（腹泻、恶心、呕吐）和脱发，但与伊立替康相比，其迟发性腹泻的发生率较低。在临床前研究中，啮齿动物的最大耐受剂量（MTD）约为10-20 mg/kg（静脉注射）。更高剂量下，观察到严重的骨髓抑制和肠道损伤。由于同位素取代不改变药理活性，因此预计氘代化合物具有相同的毒性特征。然而，d5化合物目前用作分析标准品，而非治疗药物。因此，该化合物仅在研究实验室中以毫克级少量使用，以最大程度地降低暴露风险。预计盐酸盐不会增加毒性。尚未对d5化合物进行遗传毒性、致癌性或生殖毒性研究。甘氨酰-依沙坦-d5仅供研究使用，未获准用于人类或兽医用途。由于拓扑异构酶抑制剂具有潜在的致癌性和致畸性，因此应遵循处理细胞毒性化合物的标准预防措施（戴手套、穿实验服、使用通风橱）。
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| 其他信息 |
依沙替康 (DX-8951) 是一种合成喜树碱类似物，其研发目的是为了提高水溶性并降低毒性，使其优于其他喜树碱类药物。甲磺酸依沙替康 (DX-8951f) 已在包括胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌和卵巢癌在内的实体瘤临床试验中进行评估，但尚未获得美国食品药品监督管理局 (FDA) 的批准。甘氨酰依沙替康是一种氨基酸前药衍生物，旨在提高其溶解度。氘标记 (d5) 是药物分析中常用的技术，用于生成定量质谱分析的内标。稳定的同位素标记（氘）不会显著改变化学结构，但会产生 5 Da 的质量偏移，从而可以与未标记的分析物区分开来。甘氨酰-依沙替康-d5 用于液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 方法中，用于定量分析生物基质（血浆、组织匀浆、细胞裂解液）中的依沙替康及其类似物，以进行药代动力学和生物等效性研究。本品并非药品，而是研究级分析标准品，不可用于治疗用途。盐酸盐 (HCl) 用于提高溶解度和稳定性。本化合物仅供研究使用。
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| 分子式 |
C26H21D5CLFN4O5
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|---|---|
| 分子量 |
533.99
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~110 mg/mL (~206.00 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (5.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.75 mg/mL (5.15 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 2.75 mg/mL (5.15 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8727 mL | 9.3635 mL | 18.7269 mL | |
| 5 mM | 0.3745 mL | 1.8727 mL | 3.7454 mL | |
| 10 mM | 0.1873 mL | 0.9363 mL | 1.8727 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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