| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Cyanine5 NHS ester is a fluorescent labeling agent; it does not have a specific biological receptor target. The NHS ester group is chemically reactive toward the ε-amino group of lysine residues and the N-terminal alpha-amine of proteins/peptides. Once covalently conjugated to a biomolecule, the cyanine 5 fluorophore (excitation approx. 649 nm, emission approx. 670 nm) can be excited by a red laser or LED source to emit far-red fluorescence. The dye is used for visualizing and tracking the distribution of labeled molecules in vitro and in vivo.
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| 体外研究 (In Vitro) |
通过半胱氨酸氨基酸上的游离氨基与花菁-5 NHS酯胺反应性红色荧光染料反应，可以实现聚（β-氨基酯）（pBAE）主链的末端封端[1]。
染料的体外活性通过其高效标记生物分子而不造成功能损害的能力来衡量。与蛋白质（例如IgG抗体、牛血清白蛋白、转铁蛋白）偶联后，通过测量280 nm（蛋白质）和649 nm（染料）处的吸光度来计算标记度（DOL，每摩尔蛋白质的染料摩尔数）。通常，DOL为2-10被认为是最佳的。标记的偶联物保留了原始蛋白质的生物活性，这可以通过功能性检测（例如，标记抗体的抗原结合ELISA）来验证。该染料不具有直接的药理活性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
花青素5 NHS酯标记探针广泛用于小型动物（小鼠、大鼠）的体内成像研究。静脉注射Cy5标记的抗体或肽后，可使用配备合适激发/发射滤光片（激发/发射波长约为640/680 nm）的体内成像系统（IVIS）对探针的生物分布和肿瘤靶向能力进行无创监测。远红外波长可最大限度地减少组织自发荧光，并允许5-10 mm的穿透深度，从而能够对浅表肿瘤和器官进行成像。该染料在典型成像剂量（每只小鼠0.1-1 nmol）下毒性较低。
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| 酶活实验 |
NHS酯的化学性质可通过简单的化学模型反应进行表征。在PBS缓冲液（pH 7.2-8.5）中，用高效液相色谱（HPLC）或液相色谱-质谱联用（LC-MS）监测花菁5 NHS酯碘化物与模型伯胺（例如，正丁胺，10 mM）的反应活性。该反应在室温下迅速进行（30-60分钟内完成）。将染料在PBS缓冲液（pH 7.4）中于37℃孵育，并通过HPLC测量0-8小时内NHS酯峰的消失（保留时间偏移），从而测定NHS酯在水溶液中的稳定性（水解速率）。在pH 7.4下，水解半衰期通常为30-90分钟。
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| 细胞实验 |
用 Cyanine5 NHS 酯标记蛋白质：1) 将蛋白质（例如 IgG，1-10 mg/mL）溶解于 0.1 M 碳酸氢钠缓冲液（pH 8.5）中。2) 将 Cyanine5 NHS 酯碘化物溶解于无水 DMSO（或 DMF）中，配制成 10 mM 的溶液。3) 向蛋白质溶液中加入 5-20 倍摩尔当量的染料溶液（最终 DMSO 浓度 ≤5%）。4) 将混合物在室温下避光轻柔搅拌或混合孵育 1-2 小时。5) 通过尺寸排阻色谱法（例如 Sephadex G-25 柱、Zeba 脱盐柱）或透析（24 小时内更换 3 次 PBS）去除未反应的染料。6) 收集标记的蛋白质洗脱液。 7) 通过测量 280 nm（蛋白质）和 649 nm（染料）处的吸光度，并使用适当的校正因子来确定标记物浓度 (DOL)。标记后的蛋白质在 4℃ 下避光保存，并以 0.02% 叠氮化钠作为防腐剂。
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| 动物实验 |
Cy5 NHS酯不用于动物给药。然而，由其衍生的Cy5标记探针可用于体内成像。典型实验方案：将100-200 μL Cy5标记的肿瘤靶向抗体（例如，抗EGFR、抗HER2）溶于PBS缓冲液中，经尾静脉注射至携带皮下异种移植瘤（例如，4T1乳腺癌，150 mm³）的雌性无胸腺裸鼠体内，剂量为1-5 mg蛋白/kg（每只小鼠约10-50 μg染料）。在预定的时间点（例如，注射后1、4、8、12、24、48小时），用异氟烷（1.5-2%异氟烷/氧气）麻醉小鼠。使用体内成像系统（激发波长640 nm，发射波长680 nm，曝光时间0.1-1 s）采集全身荧光图像。完成最终成像后（通常在 48-72 小时），对小鼠实施安乐死，并切除主要器官（肿瘤、肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺脏、脑），进行离体成像以确认生物分布。计算肿瘤与背景的比值。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于NHS酯在注射后立即与血清蛋白反应，因此无需评估染料本身的药代动力学特性。生成的共价蛋白-染料偶联物继承了载体蛋白的药代动力学特性。对于抗体-染料偶联物，其在小鼠体内的循环半衰期与抗体的典型值相符（例如，IgG为3-7天），但由于染料的疏水性，半衰期可能会略有缩短。对于小肽-染料偶联物，半衰期为几分钟到几小时，具体取决于肽的大小。染料代谢稳定，主要通过肝胆和肾脏途径排泄，具体取决于偶联物的大小。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
花菁5 NHS酯碘化物是一种荧光标记试剂。游离染料（未结合）的急性毒性较低。对哺乳动物细胞（例如HeLa、HEK-293）的细胞毒性试验表明，浓度高达10 μM时，细胞活力未见显著降低（IC50 > 50 μM）。在用于体内成像的标记剂量（每只小鼠纳摩尔级）下，未观察到体重减轻、弓背或运动活动改变等不良反应。该染料未见皮肤或眼睛刺激的报道。碘离子不会增加毒性。然而，NHS酯在体外是一种烷基化剂，但在体内会迅速水解或发生反应。与任何活性化学品一样，应避免吸入和皮肤接触；使用个人防护装备。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
花菁5 NHS酯碘化物是一种属于花菁染料家族的红色荧光标记试剂。NHS酯基团可与伯胺特异性反应，形成稳定的酰胺键。与荧光素（FITC）或罗丹明相比，花菁5具有更低的光漂白性、更高的亮度以及在远红外/近红外区域生物样品中最小的自发荧光。碘化物形式的水溶性通常优于氯化物形式。本产品仅供研究使用（不可用于人体诊断或治疗）。请将干燥粉末储存于-20℃，避光防潮。为避免反复冻融（可能加速水解），原液应新鲜配制或分装成小份保存。
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| 分子式 |
C36H42IN3O4
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| 分子量 |
707.64
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| 相关CAS号 |
Cyanine5 NHS ester chloride;1032678-42-4;Cyanine5 NHS ester bromide;1653991-59-3
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| 外观&性状 |
Yellow to brown solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~110 mg/mL (~155.45 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (3.89 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (3.89 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4131 mL | 7.0657 mL | 14.1315 mL | |
| 5 mM | 0.2826 mL | 1.4131 mL | 2.8263 mL | |
| 10 mM | 0.1413 mL | 0.7066 mL | 1.4131 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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