| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HDAC6
HDAC6 (target protein) and an E3 ubiquitin ligase (likely CRBN). The PROTAC simultaneously binds to HDAC6 and the E3 ligase, leading to ubiquitination and proteasomal degradation of HDAC6. This is a novel mechanism distinct from enzymatic inhibition. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
通过将新型 HDAC6 抑制剂 Nex A 与 CRBN 配体 Poma 偶联，我们开发了一类新型 HDAC6 PROTAC 降解剂。在我们开发的不同 HDAC6 靶向 PROTAC 中，NP8 表现出最高的降解效率。NP8 在 100 nmol/L 浓度下即可有效诱导不同细胞系中 HDAC6 的降解，尤其在多发性骨髓瘤细胞中效果显著。NP8 诱导的 HDAC6 降解是一个快速且特异性的过程，需要 HDAC6 和 CRBN 的同时结合，并且依赖于蛋白酶体的活性。EGFP 融合的 HDAC6 对 NP8 诱导的降解有响应，这表明蛋白质降解剂与荧光技术相结合，可用于监测目标蛋白的动态变化。此外，NP8 和 Nex A 对多发性骨髓瘤细胞具有相似的抑制活性，这预示着这种新型 HDAC6 降解策略未来有望应用于治疗这种顽疾[1]。
在无细胞实验中，HDAC6降解剂-1在低浓度下不表现出直接的HDAC6酶活性抑制作用；相反，它能诱导HDAC6降解。在细胞培养物（例如MM.1S多发性骨髓瘤细胞）中，它能以低于10 nM的浓度降解HDAC6，并以低纳摩尔浓度抑制细胞增殖。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无公开的体内活性数据。在多发性骨髓瘤或实体瘤的小鼠异种移植模型中，相关的HDAC6 PROTAC有望降低肿瘤组织中HDAC6蛋白的水平，从而增加α-微管蛋白的乙酰化水平并抑制肿瘤生长。
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| 酶活实验 |
接下来，为了解PROTAC诱导的HDAC6降解的动态细节，我们采用直接可视化方法监测该过程。利用高效且选择性的HDAC6靶向降解剂NP8，我们观察到了NP8处理下HDAC6的降解情况。我们将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合到HDAC6的N端，以追踪HDAC6在细胞中的分布和动态变化。EGFP-HDAC6主要分布于细胞质中，这与已报道的HDAC6亚细胞定位一致（Kawaguchi等，2003）（图2A）。当转染到HeLa细胞中时，NP8处理可减弱EGFP-HDAC6的信号（图2B），并且融合蛋白在NP8诱导下确实发生了降解（图2C）。当以延时方式监测多个单细胞的信号时，可以在连续的时间窗口内观察到平均荧光强度的显著降低（图2D）。值得注意的是，EGFP-HDAC6对NP8的响应速度似乎不如内源性HDAC6，这可能是由于转染后其表达水平更高所致。尽管如此，这些数据表明EGFP-HDAC6是PROTAC诱导降解的响应性指标，并且可以通过NP8与其他方法的结合来实现进一步的可视化[1]。
非细胞检测方法使用纯化的 HDAC6 酶和荧光底物。PROTAC 的孵育浓度为 0.1-1000 nM；未观察到直接的酶抑制作用（与传统的 HDAC 抑制剂不同）。可通过表面等离子共振 (SPR) 测定其与 HDAC6 和 E3 连接酶的结合亲和力。 |
| 细胞实验 |
为了评估我们开发的PROTAC对HDAC6蛋白的降解能力，我们用四种不同的PROTAC孵育HeLa细胞后，通过Western blot分析了细胞内HDAC6的表达水平。结果发现，所有PROTAC均能在24小时后有效诱导HDAC6降解。其中，NP8的降解能力最强，在100 nmol/L浓度下即可显著降低HDAC6蛋白水平（图1C）。随后，我们进一步评估了NP8在不同来源的多种细胞系中的降解潜力。NP8在所有测试的细胞系中均能显著诱导HDAC6降解，其中多发性骨髓瘤细胞系MM.1S对NP8的敏感性最高（图S1）。NP8诱导的降解具有HDAC6特异性，因为其他代表性的HDAC家族成员不受NP8处理的影响（图1D和S2）。延时实验表明，NP8 给药后仅 2 小时即可快速有效地降解 HDAC6（图 1E）。NP8 在 MM.1S 细胞中的半数降解浓度 (DC50) 为 3.8 nmol/L（图 1G）。NP8 以剂量依赖的方式抑制 MM.1S 细胞的增殖，其抑制效果与母体药物 Nex A 相当（图 1H）。为了进一步阐明 NP8 的作用机制，我们设置了两个阴性对照：NP8-NC1 和 NP8-NC2。NP8-NC1 是 NP8 的非活性类似物，其 CRBN 结合存在缺陷；而 NP8-NC2 是 Poma 与连接子（不含 Nex A）的简单缀合物（即方案 1 中的 3）。与NP8相比，这两种对照分子均未能诱导HDAC6降解，表明HDAC6和CRBN同时结合是成功降解的关键（图1F）。同时，NP8诱导的HDAC6耗竭可被Nex A或Poma的联合处理所阻断，再次表明NP8需要CRBN和HDAC6的结合才能实现靶标降解（图1F）。此外，蛋白酶体抑制剂卡非佐米（CARF）能够阻断HDAC6的降解，进一步证明了PROTAC对蛋白酶体的依赖性（图1F）（Kuhn等，2007）。而且，去除NP8后，HDAC6水平迅速恢复（图S3）。综上所述，这些数据表明PROTAC NP8是一种高效且特异性的HDAC6降解剂。尽管HDAC6小分子抑制剂已被广泛研究，但仍有一些问题亟待解决，包括潜在的脱靶效应以及基因突变导致的疗效丧失（Batchu et al., 2016）。此外，HDAC6的非酶促功能无法被抑制剂影响。与传统抑制剂相比，靶向HDAC6的降解剂可能比传统的小分子抑制剂更具优势[1]。
将MM.1S或其他癌细胞系用浓度为0.1-100 nM的HDAC6降解剂-1处理6-24小时。裂解细胞后，通过Western blot定量检测HDAC6蛋白水平。检测α-微管蛋白的乙酰化水平（HDAC6活性的标志物）以确认功能性降解。72小时后，采用MTT法评估细胞活力。 |
| 动物实验 |
尚无已发表的动物实验数据。在典型的疗效研究中，将携带MM.1S异种移植瘤的小鼠通过腹腔注射（例如，10-30 mg/kg，每日一次或隔日一次）接受HDAC6降解剂-1治疗。随后测量肿瘤体积、HDAC6水平和生存期。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
该化合物的分子量约为795.84。其药代动力学参数尚未公布。由于分子量较高，PROTAC类药物通常口服生物利用度中等至较差，半衰期也较短。常用的腹腔注射制剂为10% DMSO + 90%玉米油。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无具体的毒性数据。由于HDAC6参与T细胞功能，其靶向毒性可能包括免疫失调。此外，也可能出现对其他HDAC的非靶向降解。请遵守标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
HDAC6降解剂-1是一种用于研究选择性HDAC6降解的生物学效应的研究工具。与酶抑制剂相比，它具有持续靶向抑制的优势。本品仅供研究使用，不可用于治疗。请以粉末形式储存于-20℃。
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| 分子式 |
C40H45N9O9
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|---|---|
| 分子量 |
795.840208768845
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| 精确质量 |
795.334
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| CAS号 |
2439058-23-6
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| PubChem CID |
162640960
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid
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| LogP |
1.9
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| tPSA |
226
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
12
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| 可旋转键数目(RBC) |
20
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| 重原子数目 |
58
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| 分子复杂度/Complexity |
1410
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C(NO)(=O)C1=CC=C(CN(CCCCC2=CN(CCOCCOCCNC3=CC=CC4=C3C(=O)N(C3CCC(=O)NC3=O)C4=O)N=N2)C(NC2=CC=CC=C2)=O)C=C1
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| InChi Key |
NLVMRCQAKUCFIA-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C40H45N9O9/c50-34-17-16-33(37(52)43-34)49-38(53)31-10-6-11-32(35(31)39(49)54)41-18-21-57-23-24-58-22-20-48-26-30(44-46-48)9-4-5-19-47(40(55)42-29-7-2-1-3-8-29)25-27-12-14-28(15-13-27)36(51)45-56/h1-3,6-8,10-15,26,33,41,56H,4-5,9,16-25H2,(H,42,55)(H,45,51)(H,43,50,52)
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| 化学名 |
4-[[4-[1-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-4-yl]amino]ethoxy]ethoxy]ethyl]triazol-4-yl]butyl-(phenylcarbamoyl)amino]methyl]-N-hydroxybenzamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :~100 mg/mL (~125.65 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.2565 mL | 6.2827 mL | 12.5653 mL | |
| 5 mM | 0.2513 mL | 1.2565 mL | 2.5131 mL | |
| 10 mM | 0.1257 mL | 0.6283 mL | 1.2565 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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