| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
WRN (Werner syndrome RecQ helicase). VVD‑214 covalently binds to cysteine 727 of WRN and inhibits both its ATP hydrolysis and helicase activities.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在无细胞生化实验中，VVD-214 与 WRN 蛋白结合并抑制其解旋酶活性。在细胞实验中，VVD-214 处理可导致 MSI 高表达癌细胞（例如 HCT116、LoVo、DLD-1 MSI 细胞）中出现广泛的双链 DNA 断裂、核肿胀和细胞死亡，但在微卫星稳定 (MSS) 细胞或正常细胞中则无此现象。这表明其作用机制为合成致死。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，VVD-214 在多种 MSI-H 结直肠癌细胞系来源的异种移植瘤 (CDX) 和患者来源的异种移植瘤 (PDX) 模型中均表现出显著的肿瘤消退作用，包括来自接受免疫检查点抑制剂治疗后病情进展患者的模型。它是一种合成致死性变构抑制剂，可选择性靶向 MSI-H 肿瘤。已观察到剂量依赖性的肿瘤生长抑制和消退。
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| 酶活实验 |
一种评估WRN解旋酶抑制的通用无细胞方案：采用基于荧光的DNA解旋实验。将重组WRN解旋酶蛋白（10-50 nM）与含有荧光团和淬灭剂的叉状DNA底物（50 nM）（例如，5′端荧光素标记的链与带有3′端黑洞淬灭剂的互补链退火）在解旋酶缓冲液（25 mM Tris-HCl，pH 7.5，2 mM MgCl2，2 mM ATP，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mg/mL BSA）中孵育，并加入不同浓度的VVD-214（0.1 nM至10 uM）。通过加入ATP启动反应，并在37℃下孵育30-60分钟。用 20 mM EDTA 和 0.5% SDS 终止反应。测量荧光强度的增加（由于链分离），激发波长为 485 nm，发射波长为 528 nm。计算解旋酶抑制的 IC₅0 值。对于结合研究，可以使用细胞热位移分析 (CETSA) 来评估靶标结合情况。
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| 细胞实验 |
VVD-214 的通用细胞实验方案：将 MSI 高表达的结直肠癌细胞（例如 HCT116、LoVo 或 RKO）和 MSS 细胞（例如 HT-29 或 SW480）以 5,000-10,000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中。用 VVD-214 进行系列稀释（0.01 nM 至 10 uM）处理细胞 72-120 小时。使用 CellTiter-Glo 试剂盒检测细胞活力。合成致死效应计算为 MSS 细胞 IC₅0 与 MSI 细胞 IC₅0 的比值。为评估 DNA 损伤，将细胞处理 24-48 小时后固定，并用抗 γH2AX (Ser139) 抗体染色，然后通过免疫荧光显微镜定量每个细胞核中的 γH2AX 灶数。通过DAPI染色（核肿胀、微核形成）评估细胞核形态。通过Annexin V/PI染色和流式细胞术评估细胞凋亡。
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| 动物实验 |
VVD-214 的一般动物实验方案：将 5×10⁶ 个 HCT116 MSI-高表达结直肠癌细胞或其他 MSI-H PDX 模型皮下植入雌性 NOD/SCID 小鼠体内。当肿瘤体积达到约 150-200 mm³ 时，将小鼠随机分组（每组 n=8-10）。将 VVD-214 配制成合适的溶剂（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween-80、45% 生理盐水），并通过腹腔注射或灌胃给药，剂量分别为 10、30 和 100 mg/kg，每日一次，持续 21-28 天。每周测量两次肿瘤体积。研究结束时，对小鼠实施安乐死，并收集肿瘤组织进行免疫组化（IHC）（γH2AX、Ki-67、cleaved caspase-3）、蛋白质印迹（Western blot）（γH2AX、cleaved PARP）和TUNEL染色。为了评估VVD-214在耐药模型中的疗效，还使用源自接受免疫检查点抑制剂治疗后病情进展患者的MSI-H PDX模型进行了评估。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
VVD-214 的通用药代动力学方案：雄性 Sprague-Dawley 大鼠分别经口灌胃（PO，10 mg/kg）和静脉注射（IV，2 mg/kg）给予 VVD-214。分别于 0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、12 和 24 小时采集血样。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量分析血浆药物浓度。计算药代动力学参数（Cmax、Tmax、AUC、t½、清除率、分布容积和口服生物利用度）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
VVD-214 的一般毒性试验方案：在 ICR 小鼠中进行为期 14 天的重复给药毒性研究。VVD-214 通过灌胃给药，剂量分别为 10、30 和 100 mg/kg/天，连续给药 14 天。评估指标包括临床症状、体重、食物消耗量、血液学指标（全血细胞计数、血小板计数）、血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）以及主要器官（骨髓、胃肠道、肝脏、肾脏）的组织病理学检查。由于 MSI 肿瘤是主要靶点，MSS 组织可能相对不受影响。然而，由于 WRN 在维持基因组稳定性方面发挥着重要作用，因此需要进行长期毒性研究以评估其对正常增殖组织的潜在影响。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
VVD-214 (RO7589831) 的分子式为 C20H21F2N3O4S，分子量为 437.46 g/mol。该化合物通过化学蛋白质组学发现，是一种 WRN 解旋酶的共价变构抑制剂。它与 WRN 的 727 位半胱氨酸残基共价结合。由于 MSI-H 肿瘤（约占结直肠癌的 15%、子宫内膜癌的 20-30% 和胃癌的 15-20%）依赖 WRN 来维持复制叉的稳定性，因此抑制 WRN 对这些肿瘤具有合成致死性。VVD-214 是一种用于研究 WRN 靶向疗法以及开发对免疫检查点抑制剂耐药的 MSI-H 癌症治疗方法的研究化合物。
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| 分子式 |
C20H21F2N3O4S
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|---|---|
| 分子量 |
437.46
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| 精确质量 |
437.122
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| CAS号 |
3026500-20-6
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| PubChem CID |
170717998
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| 密度 |
1.355±0.06 g/cm3(Temp: 20 °C; Press: 760 Torr)(predicted)
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| 沸点 |
627.5±55.0 °C(predicted)
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| LogP |
2.5
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| tPSA |
107
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
731
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
O(C1C=CC=CC=1)C1=NC(=NC=C1C(=O)N[C@@H](C1CC1)/C=C/S(=O)(=O)C)C(F)(F)C
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| InChi Key |
UWPFUBNCDABUEE-SIFUEBAJSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H21F2N3O4S/c1-20(21,22)19-23-12-15(18(25-19)29-14-6-4-3-5-7-14)17(26)24-16(13-8-9-13)10-11-30(2,27)28/h3-7,10-13,16H,8-9H2,1-2H3,(H,24,26)/b11-10+/t16-/m1/s1
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| 化学名 |
N-[(E,1S)-1-cyclopropyl-3-methylsulfonylprop-2-enyl]-2-(1,1-difluoroethyl)-4-phenoxypyrimidine-5-carboxamide
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| 别名 |
RO7589831; VVD-133214
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 100 mg/mL (228.59 mM; with sonication)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.71 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO 40% PEG300 5% Tween-80 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.71 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2859 mL | 11.4296 mL | 22.8592 mL | |
| 5 mM | 0.4572 mL | 2.2859 mL | 4.5718 mL | |
| 10 mM | 0.2286 mL | 1.1430 mL | 2.2859 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Link: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT06004245
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