| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
GGGYK-Biotin targets the bacterial transpeptidase Sortase A (SrtA), specifically recognizing the enzyme's active site and serving as a nucleophile acceptor. Sortase A is a cysteine protease that cleaves donor proteins at an LPXTG recognition motif and covalently attaches them to the N-terminal glycine residues of acceptor peptides. The tri-glycine sequence (GGG) of this peptide acts as the essential nucleophile for the transpeptidation reaction. The compound does not target host mammalian enzymes; its applications are confined to in vitro enzymatic assays and bacterial or engineered systems. The biotin tag enables downstream detection via streptavidin-based affinity purification, pull-down assays, and surface immobilization, while the tyrosine residue provides a convenient spectroscopic handle for concentration normalization.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外，GGGYK-生物素可作为Sortase A (SrtA) 的模型底物用于酶动力学研究。该肽段能被SrtA高效识别，SrtA催化其三甘氨酸亲核基团与含有LPXTG识别基序的供体肽段之间形成酰胺键。该实验通常将SrtA与荧光标记的LPETG供体肽段以及不同浓度的GGGYK-生物素孵育。反应进程可通过凝胶迁移分析、荧光偏振或液相色谱-质谱联用(LC-MS)进行监测。该肽段已在GFP-LPETG报告系统中得到验证，可用于活细胞标记和酵母展示应用。其生物素标签可用于将反应产物捕获在链霉亲和素包被的微孔板或磁珠上，从而实现Sortase A变体的高通量筛选。该肽段无细胞毒性，在浓度高达100 uM时不会干扰哺乳动物细胞培养的细胞活力。
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| 体内研究 (In Vivo) |
由于 GGGYK-Biotin 肽段设计用于体外生化分析，而非用于动物治疗，因此不适用于体内研究。该化合物可用于离体标记实验，其中使用 Sortase A 对活细胞或组织切片进行位点特异性蛋白偶联。在此类应用中，通常将该肽段与 Sortase A 和 LPXTG 修饰的目标蛋白孵育，从而使生物素标签转移到细胞表面的目标蛋白上。然后通过链霉亲和素-荧光染料偶联物，利用流式细胞术或荧光显微镜检测标记的细胞。这些实验在细胞培养系统中进行，而非在活体动物中进行。该肽段不进行全身给药，也未在动物模型中进行生物利用度、组织分布或疗效研究。
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| 酶活实验 |
对于 Sortase A 酶动力学测定，典型的反应混合物（总体积 50 uL）包含 50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、10 mM CaCl2、1-5 uM Sortase A（重组，来自金黄色葡萄球菌）、0-500 uM GGGYK-生物素和 10-50 uM 荧光供体肽（例如 Dabcyl-LPETG-Edans 或 FAM-LPETG）。加入 Sortase A 启动反应，并在 37°C 下孵育 0-120 分钟。在不同时间点，取样并用 0.5% TFA 终止反应，然后使用 C18 色谱柱进行高效液相色谱 (HPLC) 分析（FAM 标记底物的激发/发射波长为 485/535 nm），或使用液相色谱-质谱联用 (LC-MS) 分析。或者，反应产物可以捕获在链霉亲和素包被的96孔板上：孵育后，将反应混合物转移至链霉亲和素包被的孔中，孵育30分钟，洗涤后测量结合的荧光。对于米氏动力学分析，初始反应速率（v0）由产物生成的线性阶段计算得出，Km和Vmax值则通过非线性回归，利用米氏方程确定。为了进行质量控制，使用酪氨酸残基的消光系数（ε2₈0 ≈ 1490 M-¹cm-¹）计算280 nm处的吸光度对肽进行定量。纯度（>99%）通过高效液相色谱（HPLC）和质谱分析确认。
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| 细胞实验 |
在细胞标记实验中，将哺乳动物细胞（例如 HEK293、HeLa 或 CHO 细胞，每种条件下使用 1 × 10⁵-5 × 10⁵ 个细胞）瞬时或稳定转染，使其表达与 LPXTG Sortase A 识别基序融合的细胞表面蛋白（例如 LPETG）。24-48 小时后，收集细胞，用 Sortase 缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、10 mM CaCl2、1% BSA）洗涤，并重悬于相同的缓冲液中。将细胞与 1-5 uM 重组 Sortase A 和 10-100 uM GGGYK-生物素在 4°C 或室温下孵育 15-60 分钟，并轻柔摇动。标记后，用含1% BSA和10 mM EDTA的PBS缓冲液洗涤细胞两次以终止反应。检测时，将细胞与荧光染料标记的链霉亲和素（例如，链霉亲和素-Alexa Fluor 488，1:200稀释）在冰上孵育20-30分钟，洗涤后，通过流式细胞仪（每个样本10,000个事件）进行分析，或通过共聚焦荧光显微镜进行观察。对于活细胞标记，可在4℃下进行反应以防止标记蛋白的内吞作用。对于免疫沉淀或下拉实验，将含有生物素化蛋白的细胞裂解液与链霉亲和素-琼脂糖珠在4℃下孵育过夜，洗涤后，用SDS-PAGE上样缓冲液煮沸洗脱。洗脱的蛋白通过SDS-PAGE分离，并用Western blot或考马斯亮蓝染色进行检测。对照组应包括不添加A型分选酶、不添加供体肽以及添加失活的A型分选酶突变体（例如C184A），以验证实验特异性。每项实验条件均应设置三个重复，且实验至少重复三次。
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| 动物实验 |
GGGYK-生物素的体内给药不适用于研究用途，且尚未进行动物药效研究。该肽专为体外生化分析而设计，可用于离体组织的标记。如果需要进行药代动力学评估，由于其分子量较低（706 Da），预计该肽会迅速发生蛋白水解降解并通过肾脏清除。然而，此类研究并非标准流程。该化合物并非注射剂，目前尚无注射剂量建议。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
GGGYK-生物素的毒性极低，因为它是一种用于体外研究的肽，用量极少（微克至毫克级）。目前尚无急性或慢性毒性数据。该化合物应按照标准实验室安全预防措施进行操作。避免吸入、摄入以及皮肤/眼睛接触。GGGYK-生物素并非药物，也无任何治疗适应症。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
GGGYK-生物素是一种专门用于Sortase A介导的蛋白质标记的工具。与通用GGG-生物素相比，该肽段引入了一个酪氨酸残基用于紫外定量，并引入了一个赖氨酸间隔基以优化生物素标签的空间可及性。三甘氨酸基序对于Sortase A的识别至关重要，因为该酶至少需要两个甘氨酸残基才能有效进行转肽反应。其应用包括酶动力学研究、底物特异性分析、Sortase A变体的高通量筛选、位点特异性蛋白质固定以及活细胞标记。该化合物尚未获得FDA批准，不适用于临床用途。
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| 分子式 |
C31H46N8O9S
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|---|---|
| 分子量 |
706.81
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 请将本产品存放在密封保护的环境中，避免受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~70.74 mM; with ultrasonication)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO +40% PEG300 +5% Tween-80 +45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO +90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO +90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4148 mL | 7.0740 mL | 14.1481 mL | |
| 5 mM | 0.2830 mL | 1.4148 mL | 2.8296 mL | |
| 10 mM | 0.1415 mL | 0.7074 mL | 1.4148 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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