Propidium Iodide   中文名称: 碘化丙啶

Nuclear staining agent
Nucleic acids (intercalates with DNA/RNA with a stoichiometry of one dye per 4-5 base pairs, little sequence preference) [1]

使用指南：
1.1 配制储备液：用双蒸水配制 1 mg/mL 的储备液。
1.2 配制工作液：使用预热的无血清细胞培养基或 PBS 将碘化丙啶储备液稀释至 20–50 μg/mL 的工作液。
注意：使用前，请确保碘化丙啶工作液的浓度适合您的具体需求，您可以调整工作液的浓度和孵育时间。

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2. 细胞染色（悬浮细胞）
2.1 离心细胞，加入 PBS，洗涤两次，共 5 分钟。细胞浓度为 1 × 10^6 个/mL。
2.2 加入 1 mL 工作液后，室温静置 5 至 10 分钟。
2.3 以 400 g 离心 3-4 分钟，然后去除上清液。
2.4 用 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。
2.5 将细胞重悬于 1 mL 无血清培养基或 PBS 中，使用荧光显微镜或流式细胞仪观察。

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3. 细胞染色（贴壁细胞）
3.1 在干净的盖玻片上培养贴壁细胞。
3.2 取下盖玻片，去除多余的培养基。
3.3 加入 100 μL 碘化丙啶工作液，轻轻摇晃使细胞充分包被，静置 5-30 分钟。3.4 吸出染料工作液后，用培养基冲洗。使用荧光显微镜观察 2-3 次，每次 5 分钟。
注：如需使用流式细胞术，细胞必须先用胰蛋白酶消化并重悬，然后再进行染色。

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储存条件： -20°C，避光防潮，可保存1年。

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安全注意事项：
1. 根据实验需要，可调整碘化丙啶工作液的浓度和孵育时间。
2. 本产品仅供科学研究使用。禁止用于食品、药品、临床诊断或治疗。
3. 碘化丙啶 (PI) 可能致癌。为了您的健康和安全，请穿戴实验服和一次性手套。

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在 NMDA 损伤的器官型海马切片培养物 (OHSC) 中，固定前 2 小时进行 PI 染色，结果显示退化神经元的浓缩（固缩）细胞核被明亮标记，而存活细胞则未被染色。[1]
- 在相同的损伤 OHSC 中，固定后进行 PI 染色（固定后进行）标记，结果显示固缩的细胞核和非退化存活细胞的细胞体均被标记，从而揭示了整个组织的细胞结构。[1]
- 在脑冰冻切片中，固定后进行 PI 染色（5 μg/mL，2 小时）导致神经元胞体弥散性标记，核仁明亮，但细胞核几乎未被染色；相比之下，神经胶质细胞显示出强烈的核PI染色，而细胞体几乎未被标记。[1]
- 固定后的PI染色模式与明场显微镜下的苏木素染色高度一致，可以观察到细胞分层、神经胶质细胞排列和血管结构。[1]
- 固定后的PI染色结合免疫荧光（NeuN、钙结合蛋白、钙网蛋白、GFAP）或凝集素（IB4）染色，可以同时观察出生后（p1、p9）和成年大鼠脑切片中的细胞结构和特定细胞标记物。[1]
- 在出生后早期组织（p1）中，常规标记物（NeuN、钙结合蛋白）染色不完全，而固定后的PI染色则能完整地显示细胞结构，且不受发育阶段的影响。[1]

流式细胞术分析：将碘化丙啶溶于 0.1% 柠檬酸钠 + 0.1% Triton X-100 溶液中（50 μg/mL）。然后将 200 × g 离心后的细胞沉淀轻轻重悬于 1.5 mL 低渗荧光染料溶液（碘化丙啶 50 μg/mL）中，置于 12×75 μm 聚丙烯管中。将试管置于 4°C 避光过夜，之后进行流式细胞术分析。使用 FACScan 流式细胞仪测量单个细胞核的碘化丙啶荧光强度。细胞核穿过 488 nm 氩离子激光器的光束。使用 560 nm 二向色镜 (DM 570) 和 600 nm 带通滤波器（带宽 35 nm）收集因碘化丙啶染色 DNA 而产生的红色荧光，并将数据记录在对数坐标轴上。 [2]

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碘化丙啶是一种用于细胞染色的红色荧光染料。碘化丙啶只能被细胞膜完整性受损的细胞吸收，可用于细胞周期和细胞活力检测以及坏死细胞检测。

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示例1，细胞核染色方法如下：
1. 用PBS洗涤细胞，然后用碘化丙啶孵育细胞（15分钟）。
2. 使用共聚焦激光扫描显微镜采集荧光图像。

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示例2，细胞染色方法如下：
1. 用4%多聚甲醛固定培养细胞（10分钟）。
2. 将细胞与50 mg/L碘化丙啶孵育（15分钟；避光）。
3. 使用共聚焦激光扫描显微镜采集荧光图像。

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退化神经元的预固定PI染色：将器官型海马切片培养物（OHSC）用50 μM NMDA损伤4小时，然后冲洗并继续培养3天。在固定前2小时加入PI（5 μg/mL）。洗涤后，将培养物用4%多聚甲醛固定过夜。PI特异性标记齿状回颗粒细胞层中退化神经元的固缩核，而活细胞则未被标记。 [1]
- 细胞结构固定后PI染色：将OHSC或脑组织冰冻切片（厚度分别为20、200、500或1000 μm）先用4%多聚甲醛固定过夜，然后用PI（5 μg/mL）孵育2小时。此步骤可对退化细胞和活细胞进行染色，从而显示细胞体、细胞核（神经元中核仁染色鲜艳，其余部分几乎呈阴性）和胶质细胞（细胞核染色强烈）。染色在整个样本中均匀一致，厚度达1 mm，无梯度变化。 [1]
- 脑切片的PI和免疫荧光/凝集素联合染色：取出生后第1天（p1）、p9和成年大鼠的冰冻切片（20 μm），进行后固定，然后与一抗（抗NeuN、抗钙结合蛋白、抗钙网蛋白、抗GFAP）或FITC标记的IB4孵育，随后与二抗孵育。PI染色（5 μg/mL，2 h）可在抗体孵育之前或之后进行。PI染色可用于评估整体细胞结构，而特定标记物则显示出发育表达模式（例如，p1时NeuN表达较弱，到p9和成年期逐渐增强；钙结合蛋白的表达遵循由外向内的迁移梯度；GFAP表达随成熟而增加）。[1]
- Sytox Green复染：对经PI后固定染色的OHSC进行Sytox Green复染（1:10000稀释，5 min）。 Sytox Green 对所有细胞核进行标记，而 PI 则提供了额外的细胞形态学细节（细胞大小、细胞分布）。PI 和 Sytox Green 的重叠区域显示黄色匹配。[1]

脑组织制备：将不同出生后发育阶段（p1、p9 和成年）的 Wistar 大鼠用异氟烷深度麻醉后断头处死。取出脑组织，立即浸入 4% 多聚甲醛（溶于 0.2 M 磷酸盐缓冲液）中固定过夜。随后，脑组织依次用浓度递增的 10%、20% 和 30% 蔗糖溶液进行低温保护，在低温恒温器上进行横切（厚度分别为 20 μm、200 μm、500 μm 和 1000 μm），并将切片贴于明胶包被的载玻片上。实验过程中未进行药物给药或碘化丙啶体内染色。[1]

[1]. Propidium iodide staining: a new application in fluorescence microscopy for analysis of cytoarchitecture in adult and developing rodent brain. Micron. 2012 Oct;43(10):1031-8.

[2]. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry. J Immunol Methods. 1991 Jun 3;139(2):271-9.

碘化丙啶是一种含有碘化丙啶的有机碘化物盐。碘化丙啶是一种荧光核酸染料，仅与双链核酸结合。其分子量为668.4，最大吸收波长为535 nm，最大发射波长为617 nm。它常用于测定细胞的DNA含量或区分活细胞和死细胞。碘化丙啶是乙锭的季铵盐类似物；它是一种嵌入染料，对某些类型的DNA具有特异性亲和力，通常以二碘化物的形式用于密度梯度分离；它还可以与胆碱酯酶形成荧光复合物，抑制该酶的活性。免疫组织化学已成为生物医学研究中不可或缺的技术，用于在明场和荧光显微镜下研究细胞形态和病理。尽管一些染色方法，例如尼氏染色或苏木精-伊红染色，可以在明场显微镜下显示完整的细胞结构，但在荧光显微镜下观察细胞结构仍然存在局限性。本研究报道了一种使用荧光染料碘化丙啶（PI，5 μg/mL）的简便染色方法，可在荧光显微镜下清晰地观察成年和发育期啮齿动物中枢神经系统的细胞分布和组成。PI是公认的退化细胞标记物，通常在固定前使用（固定前PI染色）。在本研究中，PI是在固定后添加到切片中（固定后PI染色）。这种改进的标记方法在荧光显微镜下获得的细胞结构染色模式与苏木精染色在明场显微镜下观察到的相似。该结果已在器官型海马培养物（OHSC）和不同出生后发育阶段的脑组织切片中得到验证。在兴奋性毒性损伤的OHSC中，预固定PI染色仅显示出退化神经元的明亮标记的浓缩细胞核。相比之下，后固定PI染色进一步显示了OHSC内神经元胞体和胶质细胞的广泛标记，从而可以观察神经元层的层状结构和细胞形态。此外，在出生后（p1和p9）和成年大鼠中，将固定PI染色与NeuN、钙结合蛋白、钙网蛋白、胶质纤维酸性蛋白或Griffonia simplicifolia异凝集素B4 (IB(4))联合使用。在出生后早期脑切片中，几乎所有上述细胞标记物都导致天然细胞结构染色不完全，与成年脑相比，导致细胞形态评估不准确。相比之下，固定PI染色可以独立于发育阶段研究整个细胞结构。总之，固定碘化丙啶（PI）染色可在荧光显微镜下提供发育中和成年脑组织形态的详细信息。[1]

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皮质类固醇、钙离子载体和抗CD3单克隆抗体可在体外杀死培养的小鼠胸腺细胞。细胞死亡前会发生广泛的DNA片段化，形成寡核苷酸亚基。这种细胞死亡（凋亡）在胸腺免疫细胞选择过程中生理性发生，通常通过电泳或比色法进行评估，这两种方法均测量核提取物中DNA片段化的程度。然而，这些技术无法确定凋亡细胞核的百分比，也无法在异质细胞群中识别凋亡细胞。我们开发了一种流式细胞术方法，用于测量低渗缓冲液中碘化丙啶染色后凋亡细胞核的百分比，并将其与使用地塞米松（DEX）处理的小鼠胸腺细胞的经典比色法和电泳法进行了比较。凋亡细胞核在红色荧光通道中呈现为宽阔的低二倍体DNA峰，易于与正常（二倍体）DNA含量的胸腺细胞的窄峰区分开来。当通过低温（4°C）孵育或环己酰亚胺处理抑制地塞米松诱导的细胞凋亡时，未观察到低二倍体DNA峰。同样，叠氮化钠（一种通过非凋亡机制杀死细胞的物质）诱导的胸腺细胞死亡也未导致正常DNA峰发生任何变化。流式细胞术数据与电泳和比色法结果显示出极佳的相关性。这种新型、快速、简便且可重复的方法有助于评估骨髓、胸腺和淋巴结等异质组织中特定细胞群的凋亡情况。 [2]碘化丙啶（PI）是一种细胞膜不透性的荧光染料，其最大激发波长为535 nm，最大发射波长为617 nm。它能以每4-5个碱基对嵌入一个染料分子的化学计量比与核酸结合，且序列偏好性很小。[1] - 预固定PI染色（固定前进行）广泛用于急性神经退行性疾病模型中神经元细胞衰退的定量评估，其表现为退化神经元中PI阳性且高度固缩的细胞核。[1] - 后固定PI染色（固定后进行）由于多聚甲醛组织固定会破坏细胞膜的完整性，因此染料可以扩散到原本完整的细胞中，从而获得一致的细胞结构染色。该方法在荧光显微镜中相当于明场显微镜中的苏木精染色（例如，苏木精染色）。 [1]
- 固定后PI染色可与多种免疫标记技术（NeuN、钙结合蛋白、钙网蛋白、GFAP）和凝集素染色（IB4）联合使用。[1]
- 该方法尤其适用于研究早期出生后脑组织，因为常用的免疫标记物在未成熟组织中通常表达不完全，而PI染色则能揭示完整的细胞结构，不受发育阶段的影响。[1]
- 组织穿透能力：在厚度达1000 μm的切片中观察到均匀且无梯度的染色。[1]

C27H34I2N4

668.41

668.087

C, 48.52 H, 5.13 I, 37.97 N, 8.38

25535-16-4

104981

Pink to red solid powder

220-225 °C (dec.)(lit.)

0.158

55.92

2

4

7

33

555

0

[I-].[I-].[N+](C([H])([H])[H])(C([H])([H])C([H])([H])[H])(C([H])([H])C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[N+]1=C2C([H])=C(C([H])=C([H])C2=C2C([H])=C([H])C(=C([H])C2=C1C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])N([H])[H])N([H])[H]

XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C27H33N4.2HI/c1-4-31(3,5-2)17-9-16-30-26-19-22(29)13-15-24(26)23-14-12-21(28)18-25(23)27(30)20-10-7-6-8-11-20;;/h6-8,10-15,18-19,29H,4-5,9,16-17,28H2,1-3H3;2*1H/q+1;;/p-1

3-(3,8-Diamino-6-phenylphenanthridin-5-ium-5-yl)propyl-diethyl-methylazanium diiodide

Propidium Diodide Propidium Iodide; Propidium diiodide; 3,8-Diamino-5-(3-(diethyl(methyl)ammonio)propyl)-6-phenylphenanthridin-5-ium iodide; Propidium Iodine; Propidium (Iodide); CHEBI:51240; 3,8-Diamino-5-(3-(diethylmethylammonio)propyl)-6-phenylphenanthridinium diiodide; ...

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~149.61 mM)
H2O : ~3.57 mg/mL (~5.34 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.74 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.7 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，取100 μL 25 mg/mL DMSO储备液加入400 μL PEG300，混匀（澄清溶液）；然后向上述溶液中加入50 μL Tween 80，混匀（澄清溶液）；最后，在上述溶液中加入450 μL生理盐水，混匀（澄清溶液）。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解于 100 mL ddH 2 O 中，得到溶液。

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配方 2 中的溶解度： ≥ 2.5 mg/mL (3.7 mM) (渗透度未知) in 10% DMSO + 90%（20% SBE-β-CD 生理盐水）(这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加)，配制溶液。
例如，如果要制备1 mL工作液，则可以取100 μL 25 mg/mL DMSO储备液并添加到900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液，充分混合（澄清溶液）。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。