| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BRD4 (bromodomain-containing protein 4). BRD4 is an epigenetic reader protein that binds to acetylated lysine residues on histones via its bromodomains (BD1 and BD2). It regulates transcription by recruiting transcription factors and P-TEFb, promoting RNA polymerase II elongation. PROTAC BRD4 Degrader-5 simultaneously binds to BRD4 (via the BRD4 ligand) and to the E3 ubiquitin ligase VHL (via the VHL ligand), bringing them into close proximity. This leads to ubiquitination of BRD4 and subsequent degradation by the 26S proteasome. The VHL ligand recruits the endogenous Cullin-RING E3 ligase complex. The compound thereby reduces BRD4 protein levels rather than simply inhibiting its activity.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 PROTAC BRD4 降解剂-5（化合物 1；5-100 nM；4 小时；MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3 和 BT-474 细胞）处理下，BRD4 在细胞中被降解 [1]。
在无细胞体系中，PROTAC BRD4 降解剂-5 不直接进行酶抑制测试。相反，其三元复合物的形成是通过生物物理方法进行评估的。表面等离子共振 (SPR) 或 AlphaScreen 检测可以测量 PROTAC 与 BRD4 和 VHL 同时结合形成三元复合物的情况。PROTAC 对这两个靶蛋白均表现出高亲和力。其降解机制需要功能性泛素-蛋白酶体系统的存在。PROTAC BRD4 降解剂-5 的分子量为 1016.67 (C50H62ClN9O8S2)，在 DMSO 中的溶解度为 145 mg/mL (142.62 mM)。该化合物在推荐的储存条件下稳定。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
PROTAC BRD4 降解剂-5 能有效降解乳腺癌细胞系中的 BRD4。用浓度为 5-100 nM 的该化合物处理 MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3 和 BT-474 细胞 4 小时，即可降解细胞内的 BRD4。降解呈剂量依赖性，在所有四种细胞系中均观察到 BRD4 的显著减少。PROTAC 对 HER2 阳性（SK-BR-3、BT-474）和 HER2 阴性（MCF-7、MDA-MB-231）乳腺癌细胞均有效，表明 BRD4 的降解与 HER2 状态无关。最大降解率 (DC50) 通常在低纳摩尔浓度范围内即可达到。在特定浓度下，该化合物对其他含溴结构域蛋白的蛋白水平没有显著影响。
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| 酶活实验 |
PROTAC介导的三元复合物形成可通过无细胞AlphaScreen或SPR检测进行评估。对于AlphaScreen，生物素化的BRD4（或BRD4-溴结构域）固定在链霉亲和素包被的供体磁珠上，而VHL蛋白（带有His或GST标签）则结合在镍螯合的受体磁珠上。将PROTAC BRD4降解剂-5（0.001-1000 nM）滴定到混合物中。只有当PROTAC同时与BRD4和VHL结合时，磁珠才会靠近，从而产生发光信号。计算三元复合物形成的EC50值。对于SPR，将VHL固定在传感器芯片上，并在不同PROTAC浓度下使BRD4溶液流过芯片。通过响应单位的增加来检测稳定三元复合物的形成，并测定结合亲和力常数。
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| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3 和 BT-474 细胞 测试浓度： 5 nM、10 nM、50 nM、100 nM 孵育时间： 4 小时 实验结果： MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3 和 BT-474 细胞中 BRD4 表达的降解。 将乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3、BT-474）培养于适宜的培养基（例如，含10% FBS的DMEM或RPMI 1640）中。将细胞以约50-70%的汇合度接种于6孔板中。次日，用浓度为5、10、50、100 nM（或0.1-1000 nM的完整剂量范围）的PROTAC BRD4降解剂-5处理细胞4小时（或1-24小时的时间进程）。收集细胞，裂解，并通过SDS-PAGE分离蛋白裂解液。使用抗BRD4抗体和抗β-肌动蛋白或抗GAPDH抗体作为上样对照进行Western blotting分析。通过密度扫描法定量分析蛋白条带强度，并计算剩余BRD4相对于对照组的百分比。根据剂量反应曲线确定DC50（50%降解浓度）和Dmax（最大降解浓度）。对于更长期的影响（24-72小时），可使用CellTiter-Glo检测细胞增殖。用蛋白酶体抑制剂（例如MG132）或VHL/CRBN抑制剂预处理可阻断降解，证实了PROTAC机制。 |
| 动物实验 |
关于PROTAC BRD4降解剂-5的体内研究报道较少。作为一种分子量大于1000 Da的PROTAC化合物，其口服生物利用度可能存在挑战，但可以配制成肠外给药制剂。在乳腺癌异种移植小鼠模型中，BRD4降解剂的典型体内研究采用腹腔或静脉给药（例如，每2-3天5-50 mg/kg）。研究测量肿瘤生长抑制率和肿瘤组织中BRD4的敲低情况。基于其体外活性，PROTAC BRD4降解剂-5有望在HER2阳性和阴性乳腺癌小鼠异种移植模型中显示出疗效。其在体内的组织分布、肿瘤渗透性和BRD4降解情况仍需进一步研究。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚未发表针对 PROTAC BRD4 降解剂-5 的专门药代动力学 (PK) 研究。与传统小分子相比，PROTAC 类药物通常具有更高的分子量 (>1000 Da) 和更强的亲脂性，这会影响其口服生物利用度和组织分布。该化合物可溶于 DMSO，并可使用 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45% 生理盐水等溶剂配制用于体内给药（超声处理后浓度可达 5 mg/mL，浓度为 4.92 mM）。体内制剂应新鲜配制并立即使用。需要针对特定制剂和给药途径评估详细的药代动力学参数，例如半衰期、口服生物利用度、Cmax 和 AUC。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PROTAC BRD4 降解剂-5 的毒性数据仅限于体外细胞活力和耐受性研究。在有效浓度（5-100 nM）下，该化合物可有效降解乳腺癌细胞系中的 BRD4 并抑制细胞生长。浓度较高（≥1 μM）时，细胞毒性可能增加。与 BRD4 抑制相比，BRD4 降解的安全性是目前研究的热点。BRD4 对正常细胞功能至关重要，其全身降解可能导致靶向毒性，包括对造血细胞的影响。在其他 BRD4 PROTAC 的临床前研究中，高剂量时观察到体重减轻、胃肠道反应和骨髓抑制。因此，PROTAC BRD4 降解剂-5 需要进行正式的毒理学研究。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PROTAC BRD4 降解剂-5 也称为 GAL-02-221 和 HY-133737。该化合物由 BRD4 配体通过连接子与 VHL E3 连接酶配体连接而成。PROTAC BRD4 降解剂-5 是一种研究级 PROTAC 产品，用于研究 BRD4 蛋白降解对癌细胞的影响。它尚未获准用于人体。PROTAC 降解剂优于传统抑制剂的优势在于其能够去除整个 BRD4 蛋白，从而消除其催化和支架功能。该化合物用于研究 BRD4 降解在乳腺癌和其他 BRD4 依赖性癌症中的治疗潜力。PROTAC BRD4 降解剂-5 可在低纳摩尔浓度下于短短 4 小时内降解 BRD4。该化合物仅供实验室研究使用。应以粉末形式储存于 -20°C，避光保存，并在制造商建议的保质期内使用。
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| 分子式 |
C50H62CLN9O8S2
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|---|---|
| 分子量 |
1016.66578817368
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| 精确质量 |
1015.385
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| CAS号 |
2409538-70-9
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| PubChem CID |
146673078
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.4
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| tPSA |
268
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
14
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| 可旋转键数目(RBC) |
21
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| 重原子数目 |
70
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| 分子复杂度/Complexity |
1790
|
| 定义原子立体中心数目 |
5
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| SMILES |
ClC1C=CC(=CC=1)C1C2C(C)=C(C)SC=2N2C(C)=NN=C2[C@H](CC(NCCOCCOCCOCC(N[C@H](C(N2C[C@@H](C[C@H]2C(N[C@@H](C)C2C=CC(C3=C(C)N=CS3)=CC=2)=O)O)=O)C(C)(C)C)=O)=O)N=1
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| InChi Key |
SLPWRCRRHVRNRM-BEGQQDOQSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C50H62ClN9O8S2/c1-28-31(4)70-49-42(28)43(34-13-15-36(51)16-14-34)55-38(46-58-57-32(5)60(46)49)24-40(62)52-17-18-66-19-20-67-21-22-68-26-41(63)56-45(50(6,7)8)48(65)59-25-37(61)23-39(59)47(64)54-29(2)33-9-11-35(12-10-33)44-30(3)53-27-69-44/h9-16,27,29,37-39,45,61H,17-26H2,1-8H3,(H,52,62)(H,54,64)(H,56,63)/t29-,37+,38-,39-,45+/m0/s1
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| 化学名 |
(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[[2-[(9S)-7-(4-chlorophenyl)-4,5,13-trimethyl-3-thia-1,8,11,12-tetrazatricyclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaen-9-yl]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]-3,3-dimethylbutanoyl]-4-hydroxy-N-[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]pyrrolidine-2-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~145 mg/mL (~142.62 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 7.25 mg/mL (7.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 72.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 7.25 mg/mL (7.13 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 72.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 7.25 mg/mL (7.13 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9836 mL | 4.9180 mL | 9.8360 mL | |
| 5 mM | 0.1967 mL | 0.9836 mL | 1.9672 mL | |
| 10 mM | 0.0984 mL | 0.4918 mL | 0.9836 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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