Pseudouridine

别名: Pseudouridine NSC-162405 NSC162405NSC 162405 假尿苷;β-假尿苷; 5-Β-D-核呋喃基尿嘧啶
目录号: V8020 纯度: ≥98%
伪尿苷是尿苷的对映体,是非编码 RNA 中最丰富的修饰核苷。
Pseudouridine CAS号: 1445-07-4
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
假尿苷是尿苷的对映异构体,也是非编码RNA中最丰富的修饰核苷。假尿苷能够微调并稳定rRNA和tRNA的结构域,从而维持它们在mRNA解码、核糖体组装、加工和翻译中的功能。
生物活性&实验参考方法
靶点
Pseudouridine is an isomer of uridine. It is the most abundant modified nucleoside found in non-coding RNAs (tRNA, rRNA, snRNA) and is also present in mRNA. It functions by stabilizing RNA structure through enhanced base stacking and increased hydrogen bonding capabilities. Artificial pseudouridine incorporation into mRNA can change the genetic code by facilitating non-canonical base pairing in the ribosome decoding center [1].
体外研究 (In Vitro)
在变性条件下,RNA中的假尿苷可被N-环己基-N'-(2-吗啉乙基)碳二亚胺甲氧基-对甲苯磺酸盐(CMC)特异性修饰。这种修饰会阻断逆转录酶(RT)的活性,使其在假尿苷化位点3'端一个核苷酸处停止。这一特性是其生化检测的基础[1]。
酶活实验
box H/ACA RNP 催化的假尿苷化机制已通过结构研究得以阐明。古细菌 box H/ACA RNP 的晶体结构显示,Cbf5 蛋白(假尿苷化酶)与 box H/ACA RNA 和底物 RNA 相互作用。底物 RNA 与假尿苷化口袋中的引导序列碱基配对,将靶尿苷精确定位到 Cbf5 的催化位点进行修饰。Nop10 和 L7Ae 蛋白(真核生物中的 Nhp2)与 RNA 的上茎相互作用,而 Gar1 仅与 Cbf5 结合并参与产物释放 [3]。引导序列-底物复合物的 NMR 溶液结构表明了一种不寻常的碱基配对拓扑结构:底物 RNA 仅从一侧与引导序列碱基配对,从而形成 U 形或 Ω 形的底物结构。这种相互作用模式允许底物RNA的连续加载和释放[3]。
H盒/ACA RNP活性的重组系统已确定了三个重要的序列和结构要素:包含引导序列的发夹结构(假尿苷化口袋)的稳定性、引导序列与靶RNA之间碱基配对的稳定性,以及靶尿苷与H盒或ACA盒之间的距离(必需的14-16个核苷酸)[3]。
细胞实验
Pseudo-seq 方法用于鉴定转录组中的假尿苷位点。详细的实验步骤如下:
从酵母或 HeLa 细胞中分离总 RNA。使用 oligo dT 纤维素珠从总 RNA 中分离 PolyA+ RNA。对于某些文库,进行了两轮连续的 PolyA 选择。在特定的时间和温度条件下,用 ZnCl₂ 或 ZnAcetate 溶液对 RNA 进行片段化。然后沉淀片段化的 RNA。对于 CMC 处理,将 RNA 在 80°C 下用 EDTA 变性,然后置于冰上。向 BEU 缓冲液(7 M 尿素、EDTA、bicine,pH 8.5)中加入 CMC,使其最终浓度为 0.2 或 0.4 M。在 40°C 下进行 30 分钟的 CMC 修饰,然后进行乙醇沉淀。随后,在碳酸钠缓冲液(pH 10.4,EDTA)中于 50°C 下进行 2 小时的 U 和 G 修饰逆转反应,之后进行沉淀。对照样品在不含 CMC 的 BEU 缓冲液中孵育,并进行平行处理。RNA 片段经去磷酸化后,在尿素-TBE PAGE 凝胶上进行大小选择,得到 80-140 nt 的片段。使用 T4 RNA 连接酶将预腺苷酸化的 3' 接头连接到 RNA 片段上。使用 AMV-RT 进行逆转录。在假尿苷位点前一个核苷酸处终止的截短 cDNA,经尿素-TBE PAGE 凝胶进行大小选择和纯化。cDNA 使用 circLigase 环化,并通过 PCR 进行扩增。最终文库在 Illumina HiSeq 2000 测序仪上进行测序 [1]。
利用伪测序技术,在酵母和人类细胞的 mRNA 中鉴定出了假尿苷位点。在高密度培养的酵母中,在 238 个蛋白质编码转录本中鉴定出了 260 个假尿苷位点。在人类 HeLa 细胞中,在 89 个 mRNA 中鉴定出了 96 个假尿苷位点。这些修饰存在于 5' 转录本前导序列、编码序列和 3' 非翻译区。研究发现,该过程受环境信号的调控,例如酵母中的营养匮乏和人类细胞中的血清饥饿 [1]。
在酵母中,利用假尿苷合成酶 (PUS) 基因缺失株进行遗传分析,可以将许多修饰位点与特定的酶联系起来。例如,已鉴定出 Pus1、Pus2、Pus3、Pus4、Pus6、Pus7 和 Pus9 的 mRNA 靶标。Pus4 和 Pus7 的靶标包含清晰的序列共有位点(Pus4 为 GUUCNANNC;Pus7 为 UGUAR)[1]。
在酵母中,非编码 RNA 中也鉴定出了假尿苷化位点。在非编码 RNA 中发现了 74 个新的假尿苷化位点,包括 snoRNA(例如 snR37、snR43、snR49、snR81)、RNase MRP RNA (NME1) 和 U5 snRNA。其中许多也受生长条件调控[1]。
在人类HeLa细胞中,研究人员在非编码RNA中发现了新的假尿苷位点,包括rRNA中4个先前未知的位点,以及lncRNA(例如MALAT1)、snRNA和snoRNA(例如RN7SK)中的位点[1]。
动物实验
本研究未涉及对动物使用假尿苷作为药物。研究使用了酵母菌株和培养的人类HeLa细胞。酵母菌株(野生型以及各种pus和snoRNA缺失突变体)在30°C的YPAD培养基中培养,并在对数生长期(OD~1)或高密度(OD~12-15)时通过离心收集。HeLa细胞在含10% FBS的DMEM培养基中,于37°C、5% CO₂条件下培养。在血清饥饿实验中,细胞接种、洗涤后,分别在无血清培养基或完全培养基中培养24小时[1]。

本研究未涉及对动物使用假尿苷作为药物。研究使用了酵母菌株和培养的人类HeLa细胞。酵母菌株(野生型及各种pus和snoRNA缺失突变体)在30°C的YPAD培养基中培养,并在对数生长期(OD600~1)或高密度(OD600~12-15)时通过离心收集。HeLa细胞在含10% FBS的DMEM培养基中,于37°C、5% CO2条件下培养。在血清饥饿实验中,细胞接种、洗涤后,分别在无血清培养基或完全培养基中培养24小时[1]。
参考文献

[1]. Pseudouridine profiling reveals regulated mRNA pseudouridylation in yeast and human cells. Nature. 2014 Nov 6;515(7525):143-6.

[2]. Pseudouridine in RNA: what, where, how, and why. IUBMB Life. 2000 May;49(5):341-51.

[3]. RNA pseudouridylation: new insights into an old modification. Trends Biochem Sci. 2013 Apr;38(4):210-8.

[4]. Eukaryotic stand-alone pseudouridine synthases - RNA modifying enzymes and emerging regulators of gene expression? RNA Biol. 2017 Sep 2;14(9):1185-1196.

其他信息
假尿苷是一种C-糖基嘧啶化合物,由尿嘧啶与β-D-呋喃糖核糖残基在5位连接而成。它是核苷尿苷的C-糖基异构体,是一种重要的代谢产物。假尿苷是大肠杆菌(K12和MG1655菌株)中发现或产生的代谢产物。在果蝇、鸡毒支原体和其他具有相关数据的生物体中也有报道。β-假尿苷是酿酒酵母中发现或产生的代谢产物。它是RNA中天然存在的尿苷异构体,其中核糖体连接的是碳原子而不是氮原子。
假尿苷是非编码RNA中最丰富的修饰核苷。它的存在通过稳定RNA结构来增强tRNA和rRNA的功能。虽然此前人们并不了解mRNA中含有假尿苷,但这项研究(Pseudo-seq)表明,在酵母和人类细胞中,内源性mRNA均以高度调控的方式发生特异性的假尿苷化修饰[1]。mRNA的人工假尿苷化修饰已被证实会通过改变遗传密码显著影响其功能,因为它促进了核糖体解码中心的非经典碱基配对[1]。mRNA假尿苷化的调控特性提示了一种响应环境信号而快速且受调控地重编程遗传密码的机制[1]。假尿苷合成酶(PUS基因)的突变与多种人类疾病相关,包括线粒体肌病和铁粒幼细胞性贫血(MLASA,与PUS1基因突变相关)、先天性角化不良(与PUS1基因突变相关)等。与酵母Cbf5的人类同源物Dyskerin相关的疾病,以及与snoRNA 42相关的肺癌。这项研究表明,这些疾病可能是由于mRNA靶标的失调所致[1]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C9H12N2O6
分子量
244.203
精确质量
244.069
CAS号
1445-07-4
PubChem CID
15047
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.7±0.1 g/cm3
沸点
598.4±60.0 °C at 760 mmHg
熔点
231 °C(dec.)
闪点
315.7±32.9 °C
蒸汽压
0.0±1.8 mmHg at 25°C
折射率
1.697
LogP
-3.77
tPSA
135.64
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
17
分子复杂度/Complexity
382
定义原子立体中心数目
4
SMILES
O1[C@]([H])(C([H])([H])O[H])[C@]([H])([C@]([H])([C@]1([H])C1=C([H])N([H])C(N([H])C1=O)=O)O[H])O[H]
InChi Key
PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N
InChi Code
InChI=1S/C9H12N2O6/c12-2-4-5(13)6(14)7(17-4)3-1-10-9(16)11-8(3)15/h1,4-7,12-14H,2H2,(H2,10,11,15,16)/t4-,5-,6-,7+/m1/s1
化学名
5-[(2S,3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1H-pyrimidine-2,4-dione
别名
Pseudouridine NSC-162405 NSC162405NSC 162405
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~125 mg/mL (~511.88 mM)
H2O : ~25 mg/mL (~102.38 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (102.38 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 4.0950 mL 20.4750 mL 40.9500 mL
5 mM 0.8190 mL 4.0950 mL 8.1900 mL
10 mM 0.4095 mL 2.0475 mL 4.0950 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT04641559 COMPLETED Other: Personalized nutrition group
Other: Personalized Plan group
Other: Control group
Dietary Habits
Health Status
Personalized Nutrition
Technological Centre of Nutrition and Health, Spain 2020-12-09 Not Applicable
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