| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
ROCK (Rho-associated coiled-coil forming protein kinase) (IC50 ~5 µM)
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在人肺癌细胞中，PT-262（5–40 μM；24 小时）可引起细胞毒性和生长抑制[1]。肺癌细胞暴露于 PT-262（2–20 μM；4–24 小时）可导致 caspase-3 激活、线粒体功能障碍和细胞凋亡[1]。PT-262（10–20 μM；24 小时）可抑制 CDC2 蛋白的磷酸化，并导致 p53 在肺癌细胞（无论是否存在 p53）中于 G2/M 期积累[1]。在肺癌细胞中，PT-262（0–10 μM；24 小时）可抑制 ERK 磷酸化[1]。在肺癌 A549 细胞中，PT-262（2 μM；24 小时）可引起细胞骨架改变和细胞伸长[2]。 PT-262（2-10 μM；6 小时）以浓度依赖性方式强烈抑制细胞迁移[2]。
用 1–20 µM PT-262 处理 24 小时可诱导人肺癌 A549 细胞产生浓度依赖性细胞毒性（IC50 ~5 µM）。[1] PT-262（5–40 µM，24 小时）以浓度依赖性方式降低 A549 细胞的细胞活力； IC50 ~5 µM。[1] PT-262（10 µM，24 小时）几乎完全抑制了 A549 细胞的增殖。[1] PT-262（2–20 µM，24 小时）诱导了 caspase-3（12 和 17 kDa）的活性形式，并导致 A549 细胞线粒体膜电位的丧失。[1] PT-262（2–10 µM，24 小时）增加了 A549 细胞的凋亡细胞数量，并破坏了 F-肌动蛋白和 β-微管蛋白细胞骨架。[1] PT-262（2–10 µM，24 小时）以浓度依赖的方式抑制了 A549 细胞中 ERK1/2 的磷酸化； ERK磷酸化抑制的IC50约为5 µM。[1] PT-262（8 µM，24 h）与MEK1/2抑制剂PD98059（50 µM，预处理2 h）联用可叠加增强A549细胞的细胞毒性（p<0.05）。[1] PT-262（2–20 µM，24 h）不改变p53野生型A549细胞中p53或p21蛋白的表达。[1] PT-262（2–20 µM，24 h）以浓度依赖的方式降低p53缺失的H1299肺癌细胞的活力（IC50约为5 µM）。[1] PT-262（10 µM，24 h）显著降低在 A549 和 H1299 细胞中，G1 细胞比例增加，G2/M 细胞比例增加。[1] PT-262 (10–20 µM, 24 h) 降低了 A549 细胞（以及 H1299 细胞）中细胞周期蛋白 B1 和磷酸化 CDC2 在 Thr14、Tyr15 和 Thr161 位点的蛋白水平，而对总 CDC2 或细胞周期蛋白 D1 水平没有显著影响。[1] |
| 酶活实验 |
细胞毒性试验（MTT）：将细胞以 1×10⁴ 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中，培养 16-20 小时，用或不用 PT-262 处理 24 小时，用 PBS 洗涤，在完全培养基中重新培养 2 天，然后用 0.5 mg/ml MTT 试剂孵育 4 小时。将甲臜溶解于DMSO中，并在565 nm处测量吸光度。[1]
细胞数量分析：将细胞以5×10⁵个/100 mm培养皿的密度接种，培养16-20小时，用0-10 µM PT-262处理24小时，用PBS洗涤，重新培养1-5天，然后用血细胞计数器计数。[1] 细胞凋亡检测（形态学和染色）：将细胞生长在盖玻片上，用PT-262处理，用4%多聚甲醛固定，用BODIPY FL鬼笔环肽（F-肌动蛋白）和抗β-微管蛋白Cy3染色，细胞核用Hoechst 33258（2.5 µg/ml）染色。在荧光显微镜下计数凋亡细胞核（每次实验计数 500 个细胞）。[1] 线粒体膜电位：细胞经处理、胰蛋白酶消化、70% 乙醇固定，在 37°C 下与 500 nM DiOC6 孵育 30 分钟，然后通过流式细胞术进行分析。[1] 蛋白质印迹：细胞在含有蛋白酶抑制剂的冰冷全细胞提取缓冲液中裂解。等量的蛋白质经10–12% SDS-PAGE电泳分离后，转移至PVDF膜，与一抗（抗磷酸化ERK、抗ERK-2、抗caspase-3、抗cyclin B1、抗cyclin D1、抗CDC2、抗Thr14/Tyr15/Thr161位点磷酸化CDC2、抗p53、抗p21）杂交，随后与HRP标记的二抗杂交，并通过增强化学发光法显色。[1] 细胞周期分析：将细胞以1×10⁶个/60 mm培养皿的密度接种，用0–10 µM PT-262处理24小时，用70%乙醇固定，用含1% Triton X-100和100 µg/ml RNase的4 µg/ml碘化丙啶染色30分钟，过滤，并通过流式细胞术进行分析。流式细胞术（每个样本 10,000 个细胞）。[1] |
| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： A549 细胞 测试浓度： 5-40 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： A549 细胞的活力呈浓度依赖性下降。人正常肺成纤维细胞的 IC50 值 >20 μM。 细胞凋亡分析[1] 细胞类型： A549 细胞 测试浓度： 2-20 μM 孵育时间： 4-24 小时 实验结果： 经 10 μM 处理 8-24 小时后，凋亡细胞数量增加。用 2-20 μM 的 caspase-3 处理 24 小时后，可诱导产生活性形式（12 和 17 kDa）。 细胞周期分析 [1] 细胞类型： A549 和 H1299 细胞 测试浓度： 10-20 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： 用 10 μM 的 caspase-3 处理 24 小时后，A549 和 H1299 细胞的 G1 期细胞比例显著降低，而 G2/M 期细胞比例增加。在 A549 细胞中，细胞周期蛋白 B1 和磷酸化 CDC2 在 Thr14、Tyr15 和 Thr161 位点的蛋白水平呈浓度依赖性降低。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： A549 细胞 测试浓度： 0-10 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： S 细胞骨架染色和共聚焦显微镜：将培养在盖玻片上的 A549 细胞用 PT-262 处理 16-20 小时，然后用 4% 多聚甲醛固定，在含有 10% FBS 和 0.3% Triton X-100 的 PBS 中封闭。肌动蛋白丝（F-肌动蛋白）用BODIPY FL鬼笔环肽（20 U/ml）染色，β-微管蛋白用Cy3标记的小鼠抗β-微管蛋白抗体（1:50）染色，细胞核用Hoechst 33258（2.5 µg/ml）染色，每种染色方法均持续30分钟。样品在共聚焦激光扫描显微镜下观察。细胞长度使用Leica共聚焦软件测量。[2] 生物原子力显微镜（Bio-AFM）：细胞分析采用倒置显微镜，并结合共聚焦显微镜和Bio-AFM。使用氮化硅非锐化悬臂梁（标称力常数0.06 N/m）。图像采用接触模式扫描，线扫描速率为0.5-2 Hz。 [2] Boyden小室迁移实验：将聚碳酸酯滤膜（孔径8 µm）浸泡于0.5 M乙酸溶液中过夜，洗涤后，在100 µg/ml明胶溶液中孵育16小时，风干后，再在10 µg/ml纤连蛋白溶液中孵育2小时。将待测药物加入下室。用棉签去除上室表面的细胞。对下室表面的细胞进行苏木精染色，并在光学显微镜下计数。[2] 伤口愈合实验：用移液器吸头刮擦A549细胞单层（>90%汇合度），形成6-7 mm的伤口。用或不用PT-262处理细胞，用PBS洗涤后，在新鲜培养基中重新培养。分别在8小时和24小时于同一伤口位置拍照。 [2] 蛋白质印迹分析：将细胞在含有蛋白酶抑制剂的冰冷全细胞提取缓冲液中裂解。取等量蛋白进行10-12% SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后转移至PVDF膜，与一抗（抗RhoA、抗ROCK1、抗磷酸化MLC Ser19、抗MLC、抗ERK-2）杂交，再与HRP标记的二抗杂交。采用增强化学发光检测系统显色。[2] RhoA GTP酶活性测定（下拉法）：用或不用PT-262处理细胞。将细胞裂解液与GST-Rhotekin-RBD和谷胱甘肽-琼脂糖珠孵育。沉淀结合在珠上的活化GTP-RhoA，并用抗RhoA抗体进行蛋白质印迹分析。活性 RhoA 水平以总 RhoA 水平进行标准化。GDPβS 和 GTPγS 分别用作阴性和阳性对照。[2] siRNA 转染：对照 siRNA (5'-UUCUCCGAUCGUCUCCGU-3') 和 RhoA siRNA (5'-CGGAAUGAUGAGCACACACA-3') 使用 Lipofectamine 2000 按照制造商的建议转染到 A549 细胞中。通过 RT-PCR 分析 RhoA 基因表达。[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PT-262对人类正常肺成纤维细胞的毒性较低（IC50 >20 µM）。[1]
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
PT-262 是一种由 6,7-二氯喹啉-5,8-二酮和哌啶合成的 5,8-喹啉二酮衍生物。它通过抑制 ERK 和 CDC2 的磷酸化，经由 p53 非依赖性途径诱导肺癌细胞死亡，导致 G2/M 期阻滞和细胞凋亡。与其他喹啉二酮类化合物（例如 LY83583、NSC 663284）不同，PT-262 不直接抑制 MEK1/2（未发表数据），而是通过一种未知的机制抑制 ERK 磷酸化。其独特的氯取代基和哌啶基团可能有助于形成特定的电子构型，从而实现对蛋白质的强效抑制。[1]
|
| 分子式 |
C14H13CLN2O2
|
|---|---|
| 分子量 |
276.72
|
| 精确质量 |
276.066
|
| CAS号 |
86811-36-1
|
| PubChem CID |
12424014
|
| 外观&性状 |
Brown to reddish brown solid powder
|
| LogP |
2.7
|
| tPSA |
50.3
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
19
|
| 分子复杂度/Complexity |
441
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C1C2C=CC=NC=2C(=O)C(Cl)=C1N1CCCCC1
|
| InChi Key |
XBHXHCMFAUSIKK-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C14H13ClN2O2/c15-10-12(17-7-2-1-3-8-17)13(18)9-5-4-6-16-11(9)14(10)19/h4-6H,1-3,7-8H2
|
| 化学名 |
7-chloro-6-piperidin-1-ylquinoline-5,8-dione
|
| 别名 |
PT-262 PT262 PT 262
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~361.38 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.6138 mL | 18.0688 mL | 36.1376 mL | |
| 5 mM | 0.7228 mL | 3.6138 mL | 7.2275 mL | |
| 10 mM | 0.3614 mL | 1.8069 mL | 3.6138 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
