Belzutifan (PT2977; MK-6482)   中文名称: 贝组替凡

HIF-2α (IC50 = 9 nM)[1]
Belzutifan (PT2977) causes a rapid and quantitatively-dependent decrease in EPO expression and potently and quantitatively-dependently lowers the mRNA levels of human cyclin D1, a target gene regulated by HIF-2α [1].

Belzutifan (PT2977) 导致 EPO 表达快速、定量依赖性下降，并有效、定量依赖性降低人细胞周期蛋白 D1（一种受 HIF-2α 调节的靶基因）的 mRNA 水平 [1]。

---

在细胞实验中，PT2977 的效力比其前代药物 PT2385 强 2 至 3 倍，在使用 VHL 突变型 786-O 透明细胞肾细胞癌细胞的 VEGFA 分泌实验中，其 EC₅₀ 为 17 nM。
PT2977 的亲脂性显著低于 PT2385（log D_7.4 分别为 1.2 和 2.2），这导致其血浆蛋白结合率降低（人血浆中结合率分别为 52% 和 82%）。
在 VEGFA 分泌实验中，PT2977 经游离分数校正后的 EC₈₅ 计算为 75 ng/mL。
在人肠微粒体和 UGT2B17 超微粒体中的酶动力学研究表明，与 PT2385 相比，PT2977 的葡萄糖醛酸化速率显著降低。其在人肠微粒体和 UGT2B17 中超微粒体中形成葡萄糖醛酸苷的 V_max 分别为 0.5 pmol/min/mg 蛋白和 4.7 pmol/min/mg 蛋白，比 PT2385 慢 20 倍以上。
PT2977 在多个物种（小鼠、大鼠、狗、猴）的微粒体和肝细胞稳定性实验中显示出低至中度的清除率。
PT2977 在高达 50 μM（测试的最高浓度）的浓度下对主要 CYP P450 酶无抑制作用。
在一个包含 126 个受体、离子通道、激酶和磷酸酶的安全性筛选面板中，PT2977 在 10 μM 浓度下未显示出明显的活性。[1]

在小鼠、大鼠、狗和猴子中口服PT2977导致良好的血浆暴露。PT2977和PT2385的平均血浆浓度-时间曲线的比较如图11所示，表5提供了母体和葡萄糖醛酸代谢产物药物暴露量（AUC）的汇总。有趣的是，在啮齿类动物中，PT2977的口服暴露量仅略高于PT2385，而这两种化合物在高等物种中的表现非常不同。在狗和猴子中，PT2977的剂量归一化AUC分别比PT2385的AUC高9倍和20倍。这一现象与这些物种中每种类似物的葡萄糖醛酸代谢产物形成的相对速率有关。如表5所示，狗的PT2977葡糖醛酸代谢产物（PT3317）的AUC约为亲本的30%，而PT2639（PT2385葡糖醛酸代谢物）的AUC几乎是亲本的2倍。类似地，在猴子中观察到PT2977的循环代谢产物含量较低，代谢产物/母体比率为0.19。这两种化合物在大鼠体内形成的葡萄糖醛酸代谢产物量明显较少，这表明该物种存在另一种代谢途径。对于PT2385，狗的药代动力学是葡萄糖醛酸代谢产物PT2639在人类中形成的更好预测指标。基于这些数据，我们预测PT2977在人类中的葡萄糖醛酸化倾向会降低，因此在患者中表现出比PT2385显著改善的药代动力学特征[1]<小时> 在携带皮下786-O ccRCC肿瘤的小鼠中进行了药代动力学/药效学（PK/PD）研究，以使PT2977的血浆药物水平与肿瘤中的PD效应相关。口服给予0.3、1和3 mg/kg的6剂PT2977或10 mg/kg b.i.d.的PT2385。在最后一次给药后12小时采集血浆和肿瘤组织样本。通过qPCR对切除肿瘤的基因表达分析显示，PT2977有效且剂量依赖性地降低了人细胞周期蛋白D1的mRNA水平，该基因是由HIF-2α调节的靶基因（图12A）。PT2977在1 mg/kg时达到最大PD反应，而PT2385需要10 mg/kg的更高剂量。为了实现相同的PD效果，PT2977的稳态谷血浆药物浓度约为PT2385浓度的1/10（图12B）。与效力和物理性质的改善一致，化合物PT2977在体内的效力是PT2385的约10倍。随后评估PT2977和PT2385在786-O小鼠异种移植物模型中的抗肿瘤活性。0.3、1和3 mg/kg的PT2977给药均导致已建立肿瘤的快速消退（图12C），证实化合物PT2977的体内活性优于PT2385[1]
aPT2385和PT2977以10%EtOH、30%PEG400、60%（0.5%甲基纤维素、0.5%吐温80（aq））的悬浮液的形式递送
bPT2385和PT2977以0.5%甲基纤维素和0.5%吐温80在水中的悬浮液的形式递送
基于其改进的效力、游离组分、药代动力学和代谢物谱，预测化合物PT2977具有较低的临床活性剂量和较少的患者间暴露变异性。因此，PT2977被选为我们的第二代HIF-2α临床候选药物，作为ccRCC和VHL疾病的潜在新治疗方法进行进一步研究[1]。

---

在携带皮下 786-O ccRCC 异种移植瘤的小鼠体内药代动力学/药效学研究中，口服给予 PT2977（0.3、1 和 3 mg/kg，每日两次）可剂量依赖性地降低肿瘤中 HIF-2α 靶基因 cyclin D1 的 mRNA 水平。在 1 mg/kg 剂量下达到最大药效反应。
为了达到相同的药效水平，PT2977 所需的稳态谷血浆浓度约为 PT2385 所需浓度的十分之一。
在同一 786-O 小鼠异种移植模型的体内疗效研究中，给予 PT2977（0.3、1 和 3 mg/kg，每日两次）可导致已建立肿瘤的快速消退，证实了其优于 PT2385 的体内活性。[1]

UGT表型[1]
将测试化合物与在杆状病毒感染的昆虫细胞膜中表达的一组单独表达的重组人UGT酶（UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1 A9、UGT 1A10、UGT2B7、UGT2B15和UGT2B17）孵育。孵育混合物含有最终浓度为50μM的受试化合物，表达的UGT（0.2 mg蛋白质/ml）、Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）、氯化镁（10 mM）、阿来霉素（25μg/ml）和UDPGA（2 mM）。将混合物（不含UDPGA辅因子）在37°C下预培养5分钟，之后通过添加UDPGA开始反应。
培养在37°C下进行。在60分钟时收集等分试样（100μL），并用两体积的含有内标物的冰冷乙腈骤冷。将样品在室温下以1000克离心15分钟，以沉淀蛋白质。然后将上清液转移到含有200μL水的干净小瓶中，并使用液相色谱-串联质谱法（LC–MS/MS）进行分析。测量葡萄糖醛酸代谢产物与内标峰面积的比值，以量化葡萄糖醛酸代谢物的形成速率。

---

人肠道微粒体（HIM）和UGT2B17超体的酶动力学研究[1]
与UGT表型相似的实验程序用于人类肠道微粒体和UGT2B17超体中化合物的酶动力学研究，不同之处在于孵育中使用的化合物浓度范围为2-1000μM。通过LC–MS/MS测量绝对葡萄糖醛酸代谢产物形成速率。化合物浓度及其相应的葡萄糖醛酸代谢物形成速率符合标准Michaelis–Menten模型，通过使用Prism（版本6）获得Vmax和Km。

---

闪烁亲近测定法： 一种用于测定化合物对 HIF-2α 抑制浓度 (IC₅₀) 的结合实验。该实验通过测量放射性标记配体从 HIF-2α 蛋白上的置换来进行。[1]
UGT 表型分析和酶动力学实验： 为了鉴定负责代谢化合物的 UGT 酶，使用了在昆虫细胞膜中表达的一组重组人 UGT 酶（UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A7、1A8、1A9、1A10、2B7、2B15、2B17）。孵育混合物包含测试化合物（例如，表型分析用 50 μM，动力学实验用 2-1000 μM 浓度范围）、表达的 UGT 酶、Tris-HCl 缓冲液（pH 7.5）、氯化镁、丙甲菌素和辅因子 UDPGA。预孵育后，通过添加 UDPGA 启动反应。在 37°C 下进行孵育。在特定时间点（例如 60 分钟）取等分试样，用含内标物的乙腈淬灭，并离心。通过 LC-MS/MS 分析上清液以量化葡萄糖醛酸苷代谢物的形成速率。对于动力学实验，将数据拟合到 Michaelis-Menten 模型以获得 V_max 和 K_m 值。[1]

hERG实验:[1]
在接近生理温度下评估化合物2对哺乳动物细胞中表达的hERG（人醚相关基因）钾通道电流（IKr的替代物，即快速激活、延迟整流的心脏钾电流）的体外影响。2在10μM（n=3）时抑制hERG电流（平均值±SEM）为6.7±2.0%，在50μM（n=3）时为16.3±0.4%，而对照组为0.0±0.6%。未计算2对hERG钾电流的抑制作用的IC50，但估计其大于50μM。阳性对照（60nM特非那定）抑制hERG钾电流（平均值±标准差；n=2）85.2±3.6%。该结果证实了测试系统对hERG抑制的敏感性。

---

1和3作为人P-gp和BCRP转运蛋白底物的评价：[1]
为了确定1（1和10μM）和3（1和10um）是否是人外排转运体（即P-gp[MDR1/ABCB1]和BCRP[ABCG2]）的底物，S5测量了PT2385和PT2639在MDCKI-MDR1和MDCKIIBCRP细胞上的双向渗透性。在所有实验中，已知的底物和抑制剂均作为阳性对照。在所有测试条件下，MDCKI-MDR1和MDCKI-BCRP细胞的1和3的流出比均小于2，这表明两种化合物都不是P-gp或BCRP的底物。

---

HIF-2α 荧光素酶报告基因实验： 用受缺氧反应元件控制的荧光素酶报告基因构建体转染 786-O 细胞。然后用不同浓度的测试化合物处理细胞。孵育一段时间后，测量荧光素酶活性，该活性反映了 HIF-2α 的转录活性。根据剂量反应曲线计算 EC₅₀ 值。[1]
VEGFA 分泌实验： 接种 786-O 细胞并使其贴壁。然后用一系列浓度的测试化合物处理细胞。在指定的孵育期（例如 24 小时）后，收集细胞培养上清液。使用 ELISA 试剂盒定量上清液中血管内皮生长因子 A 的浓度，VEGFA 是一种由 HIF-2α 驱动表达的蛋白。根据抑制曲线确定 EC₅₀ 值。[1]

在786-O异种移植模型中进行小鼠药代动力学/药效学（PK/PD）和疗效研究：将786-O人肾细胞癌（ccRCC）细胞皮下接种到雌性SCID/beige小鼠体内以建立肿瘤模型。待肿瘤达到预定大小后，将小鼠随机分为治疗组。PT2977或赋形剂每日两次（bid）灌胃给药。PK/PD研究中，使用的剂量为0.3、1和3 mg/kg。疗效研究中，使用的剂量为0.3、1和3 mg/kg，每日两次。定期监测肿瘤体积和体重。PK/PD分析中，在末次给药后特定时间点（例如12小时）采集血浆和肿瘤样本。对肿瘤进行RNA提取和靶基因（例如细胞周期蛋白D1）的qPCR分析。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆药物浓度。 [1]
多种动物（小鼠、大鼠、犬、猴）的临床前药代动力学研究：对于静脉注射（iv）药代动力学研究，PT2977配制成溶液（例如，小鼠、犬、猴的溶液为20%乙醇、40% PEG400、40%水；大鼠的溶液为10%二甲基乙酰胺、10%乙醇、40% PEG400、40%水），并以单次静脉推注给药。对于口服（po）药代动力学研究，PT2977配制成混悬液（例如，0.5%甲基纤维素和0.5%吐温80的水溶液，或10%乙醇、30% PEG400、60%含0.5%甲基纤维素和0.5%吐温80的水溶液）。在给药后多个时间点采集血样。分离血浆，并使用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 分析原药及其代谢物的浓度。进行标准非房室模型分析以获得药代动力学参数。[1]

吸收、分布和排泄
在患有VHL病相关肾细胞癌的患者中，稳态（大约在治疗三天后达到）时的平均Cmax和AUC0-24h分别为1.3 µg/mL和16.7 μg•hr/mL。口服给药后，中位Tmax为1至2小时。贝祖替凡与食物同服对药物分布的影响可忽略不计——当与高热量、高脂肪食物同服时，达峰时间 (Tmax) 仅延迟约 2 小时，未观察到其他具有临床意义的影响。
口服贝祖替凡后的稳态分布容积约为 130 L。
口服贝祖替凡后的平均清除率为 7.3 L/h。

---

代谢/代谢物
贝祖替凡主要通过 UGT2B17 和 CYP2C19 代谢，CYP3A4 的代谢作用较小。

---

生物半衰期
贝祖替凡的平均消除半衰期为 14 小时。

---

PT2977 在小鼠（21 mL/min/kg）和犬中均显示出较低的血浆清除率 (Cl_p)。静脉注射后，小鼠的清除率为 1.3 mL/min/kg，猴子为 3.5 mL/min/kg，大鼠为中等清除率（19 mL/min/kg）。小鼠、大鼠、犬和猴子的终末半衰期 (T_1/2) 分别为 4.0 小时、1.4 小时、14 小时和 9.2 小时。
在临床前动物模型中，口服 PT2977 后显示出良好的血浆暴露量。其葡萄糖醛酸代谢物（PT3317）相对于母体的暴露量（AUC）较低：大鼠为 0.07，犬为 0.32，猴为 0.19，表明与 PT2385 相比，葡萄糖醛酸化作用显著降低。
在针对晚期实体瘤患者的 1 期临床试验中，每日一次口服 PT2977，导致暴露量随剂量增加而增加，最高可达 120 mg。在推荐的 II 期剂量 (RP2D) 120 mg qd 下，平均末端半衰期为 20.9 小时，平均 Cmax 为 1.8 μg/mL，平均 AUClast 为 25.9 hμg/mL，平均谷浓度 (C24h) 为 0.71 μg/mL (710 ng/mL)。
PT2977 在 120 mg qd 剂量下达到稳态（第 15 天）时，葡萄糖醛酸苷代谢物/母体 AUC 比值为 0.32，远低于 PT2385 在 800 mg bid 剂量下的比值 6.0 [1]。

肝毒性
在贝祖替凡的预注册试验中，高达 20% 的患者出现血清转氨酶升高，但均为短暂且轻微（低于正常值上限的 3 倍），且未伴有症状或黄疸。没有患者因肝功能检查异常而需要调整剂量或停药。此外，自获批后广泛应用以来，尚未有已发表的关于贝祖替凡引起临床明显肝损伤的报告。
可能性评分：E（不太可能引起临床明显肝损伤）。

---

蛋白结合
血浆蛋白结合率约为45%，但目前尚无关于贝祖替凡具体结合蛋白的数据。

---

在膜片钳hERG通道检测中，PT2977显示出较低的QT间期延长潜力，估计IC₅₀ > 50 μM。
在包含126种受体、离子通道、激酶和磷酸酶的广泛安全性筛选中，PT2977在10 μM浓度下未显示出明显的活性。[1]

[1]. 3-[(1S,2S,3R)-2,3-Difluoro-1-hydroxy-7-methylsulfonylindan-4-yl]oxy-5-fluorobenzonitrile (PT2977), a Hypoxia-Inducible Factor 2α (HIF-2α) Inhibitor for the Treatment of Clear Cell Renal Cell Carcinoma. J Med Chem. 2019 Aug 8;62(15):6876-6893.

贝祖替凡（Belzutifan）是一种缺氧诱导因子2α (HIF-2α) 抑制剂，用于治疗冯·希佩尔-林道综合征 (VHL) 相关癌症。HIF-2α 蛋白最初由德克萨斯大学西南医学中心的研究人员在 20 世纪 90 年代发现，它在某些癌症的生长过程中起着关键作用。最初人们认为 HIF-2α 蛋白无法成药，但最终在 HIF-2α 分子中发现了一个结合口袋，使得化合物能够结合并抑制该蛋白。这一发现促成了贝祖替凡（当时名为 PT2977）的初步研发，随后由一家名为 Peloton Pharmaceuticals 的衍生公司进一步开发（该公司最终于 2019 年被默克公司收购）。贝祖替凡抑制 HIF-2α 与另一种转录因子 HIF-1β 的复合物形成，这是 HIF-2α 激活的必要步骤——通过阻止这种复合物的形成，贝祖替凡可以减缓或阻止 VHL 相关肿瘤的生长。 2021年8月13日，Belzutifan获得FDA批准，用于治疗部分VHL相关癌症。
Belzutifan是一种缺氧诱导因子抑制剂。其作用机制是作为缺氧诱导因子2α抑制剂和细胞色素P450 3A4诱导剂。
Belzutifan是一种小分子缺氧诱导因子2α抑制剂，用于治疗von Hippel-Lindau病患者的实体瘤。Belzutifan治疗期间血清酶轻微升高的发生率较低，但尚未发现与临床上明显的肝损伤病例相关。
Belzutifan是一种口服有效的小分子缺氧诱导因子（HIF）-2α抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，贝祖替凡可与HIF-2α结合并阻断其功能，从而阻止HIF-2α异二聚化及其与DNA的结合。这导致HIF-2α下游靶基因的转录和表达降低，其中许多靶基因调控缺氧信号通路。这抑制了表达HIF-2α的肿瘤细胞的生长和存活。 HIF-2α 是异二聚体转录因子 HIF-2 的 α 亚基，在多种癌症中过度表达并促进肿瘤发生。

---

药物适应症
Belzutifan 适用于治疗患有 von Hippel-Lindau (VHL) 病且需要治疗相关肾细胞癌 (RCC)、中枢神经系统 (CNS) 血管母细胞瘤或胰腺神经内分泌肿瘤 (pNET) 的成年患者，这些患者无需立即手术。

---

作用机制
缺氧诱导因子 2α (HIF-2α) 是一种转录因子，它通过调节促进适应缺氧的基因来帮助氧气感知。在健康个体中，当氧气水平正常时，HIF-2α 会被 von Hippel-Lindau (VHL) 蛋白通过泛素-蛋白酶体途径降解。在缺氧条件下，HIF-2α 会转位至细胞核内，并与缺氧诱导因子 1β (HIF-1β) 形成转录复合物。该复合物随后诱导下游基因的表达，这些基因与细胞增殖和血管生成相关。von Hippel-Lindau (VHL) 病患者缺乏功能性 VHL 蛋白，导致 HIF-2α 积累，而这种积累正是 VHL 相关肿瘤生长的驱动因素。Belzutifan 是一种 HIF-2α 抑制剂，它能阻止 HIF-2α 在缺氧或 VHL 蛋白功能受损的情况下与 HIF-1β 形成复合物，从而降低 HIF-2α 靶基因的表达，并减缓/阻止 VHL 相关肿瘤的生长。

---

药效学
Belzutifan 通过抑制 VHL 相关实体瘤生长所必需的转录因子发挥其治疗作用。本品每日服用一次，每日大致在同一时间服用，餐前或餐后均可。服用贝祖替凡后曾观察到严重贫血和缺氧，因此在治疗前后应密切监测患者，以确保能够根据临床需要进行治疗。目前尚无使用促红细胞生成素治疗贝祖替凡引起的贫血的数据，因此应避免使用此类疗法。贝祖替凡用于孕妇时可能引起胚胎-胎儿毒性。女性患者和伴侣为有生育能力的女性的男性患者应确保在整个治疗期间以及最后一次给药后一周内采取有效的避孕措施——因为贝祖替凡似乎会降低全身性激素避孕药的疗效，因此应建议患者使用额外的避孕方法（例如避孕套）以消除治疗期间怀孕的可能性。

---

贝祖替凡 (PT2977) 是一种第二代口服生物利用度高的缺氧诱导因子 2α (HIF-2α) 小分子抑制剂。该药物是通过对第一代抑制剂 PT2385 的结构进行改造而开发的，旨在解决其药代动力学局限性，特别是肠道中 UGT2B17 过度且不稳定的葡萄糖醛酸化作用。
关键的结构变化是将 PT2385 茚满醇环上的偕二氟基团中的一个氟原子移动到苄位，并相对于羟基呈顺式构型。这种修饰（形成邻位二氟基序）导致效力增强、亲脂性显著降低，以及葡萄糖醛酸化速率大幅下降。
PT2977可破坏HIF-2α与其结合伴侣ARNT（HIF-1β）的异二聚化，从而抑制参与血管生成、增殖和代谢的HIF-2α靶基因（例如VEGFA、EPO、细胞周期蛋白D1）的转录。
它正在开发用于治疗透明细胞肾细胞癌（ccRCC）和冯·希佩尔-林道综合征（VHL）相关肿瘤。
在一项纳入55例ccRCC患者的I期临床试验的扩展队列中，每日一次120 mg的PT2977显示出令人鼓舞的临床活性：截至2019年1月1日，12例患者（22%）获得确认的部分缓解。中位随访时间为 9 个月，尚未达到中位无进展生存期 (PFS)。[1]

C17H12F3NO4S

383.341693878174

383.04

C, 53.27; H, 3.16; F, 14.87; N, 3.65; O, 16.69; S, 8.36

1672668-24-4

117947097

White to light yellow solid powder

2

95.8Ų

1

8

3

26

675

3

CS(=O)(=O)C1=C2[C@@H]([C@@H]([C@@H](C2=C(C=C1)OC3=CC(=CC(=C3)C#N)F)F)F)O

LOMMPXLFBTZENJ-ZACQAIPSSA-N

InChI=1S/C17H12F3NO4S/c1-26(23,24)12-3-2-11(13-14(12)17(22)16(20)15(13)19)25-10-5-8(7-21)4-9(18)6-10/h2-6,15-17,22H,1H3/t15-,16-,17+/m1/s1

3-[(1S,2S,3R)-2,3-Difluoro-1-hydroxy-7-methylsulfonylindan-4-yl]oxy-5-fluorobenzonitrile

PT2977; MK 6482; PT-2977; MK-6482; PT 2977; MK6482; Belzutifan; 1672668-24-4; PT2977; Welireg; MK-6482; MK6482; PT-2977; Belzutifan [INN]; Welireg

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Acetone : 50 mg/mL (~130.43 mM)
DMSO : ~50 mg/mL (~130.43 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (1.30 mM) (饱和度未知) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。