Reactive Blue 4

别名: 活性蓝4;普施安蓝MX-R;4-叔丁基苯丙酸乙酯;活性艳蓝 X-ARL;活性艳蓝X-BR;普施安蓝;活性蓝4,染料含;C.I.活性蓝4;活性蓝 4-琼脂糖; 1-氨基-4-[3-(4,6-二氯三唑-2-基氨基)-4-磺酰苯氨基]蒽醌二磺酸;活性蓝 4;活性艳蓝 X-BR;活性艳蓝X-ARL;普施安蓝 MX-R;活性艳蓝X-ARL/普施安蓝 MX-R
目录号: V33203 纯度: ≥98%
Reactive Blue 4 是一种蒽醌染料,可用作单一比色化学传感器,用于连续测定水介质中具有不同光学响应的多种分析物。
Reactive Blue 4 CAS号: 13324-20-4
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
100mg
250mg
500mg
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  • C.I.活性蓝4
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产品描述
Reactive Blue 4 是一种蒽醌染料,可用作单一比色化学传感器,用于连续测定水介质中具有不同光学响应的多种分析物。活性蓝 4 具有植物毒性、细胞毒性和基因毒性。
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
在体外条件下,好氧细菌颗粒(ABGs)能有效脱色并生物转化Reactive Blue 4
ABGs在较宽的pH(4.0至11.0)和温度(20至55°C)范围内对Reactive Blue 4进行脱色。
该颗粒能耐受并降解高达1000 mg L⁻¹的染料浓度,最大脱色速率(Vmax)为6.16 ± 0.82 mg L⁻¹ h⁻¹,米氏常数(Km)为227 ± 41 mg L⁻¹。
静态条件下的脱色速率(5.01 mg L⁻¹ h⁻¹)高于振荡条件(3.71 mg L⁻¹ h⁻¹)。
在连续暴露循环中,脱色速率从第1个循环的1.27 mg L⁻¹ h⁻¹(脱色率61%)增加到第9个循环的1.79 mg L⁻¹ h⁻¹(脱色率86%),然后在第16个循环下降到1.15 mg L⁻¹ h⁻¹(脱色率55%),表明颗粒保持了耐受性。
通过HPLC、FT-IR和GC-HRMS分析确认了生物转化,鉴定出代谢产物如4-氨基-9,10-二氢-9,10-二氧代蒽-2-磺酸、2-(4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基氨基)-4-氨基苯酚和1-氨基蒽-9,10-二酮。
观察到有机负荷显著降低:在静态条件下处理72小时后,化学需氧量(COD)、生物需氧量(BOD)和总溶解固体(TDS)分别降低了90%、91%和77%。[2]
细胞实验
细胞毒性实验: 使用MTT法在HaCat(人角质形成细胞)和FHM(鱼上皮细胞)细胞系上评估了Reactive Blue 4及其生物转化代谢物的细胞毒性。
将细胞接种在96孔板中(HaCat: 10⁵ 细胞 mL⁻¹;FHM: 2×10⁵ 细胞 mL⁻¹),使用各自培养基(HaCat用DMEM/F12,FHM用MEM)。
将在不同生物转化时间点获得的染料或其代谢物(终浓度0.01 mg mL⁻¹)加入孔中。
将板在CO₂培养箱(5% CO₂, 37°C)中培养48小时。
孵育后,移除培养基,用PBS清洗孔,然后加入MTT溶液(每孔40 µg)再孵育4小时。
生成的甲臜晶体用二甲基亚砜溶解,在570 nm处测量吸光度(并在690 nm处扣除背景)。
相对于未处理的对照细胞计算细胞存活率百分比。[2]
遗传毒性实验(彗星实验): 使用碱性彗星实验评估了Reactive Blue 4及其代谢物对人外周血淋巴细胞、HaCat和FHM细胞系的遗传毒性。
对于淋巴细胞,将细胞(10⁴ 细胞 mL⁻¹)与染料(0.25 mg mL⁻¹)或其代谢物在RPMI培养基中于37°C孵育1小时。H₂O₂(100 µM, 5分钟, 4°C)作为阳性对照。
对于HaCat和FHM细胞,将细胞(4×10⁵ 细胞 mL⁻¹)与染料或代谢物(0.01 mg L⁻¹)在96孔板中处理48小时,然后用胰蛋白酶-EDTA消化收集。
处理后的细胞经洗涤,悬浮于少量培养基中,与低熔点琼脂糖混合,并铺在预先涂有正常熔点琼脂糖的显微镜载玻片上。
细胞在裂解液(含NaCl、EDTA、Tris、DMSO和Triton X-100,pH 10)中裂解,随后在碱性电泳缓冲液(NaOH, EDTA, pH >13)中解旋并进行电泳。
载玻片经中和后,用溴化乙锭(20 µg mL⁻¹)染色,并在荧光显微镜下观察。
使用图像分析软件对每个样品约300个细胞的DNA损伤进行定量,以尾DNA百分比为参数。[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
植物毒性:活性蓝4对普通小麦(Triticum aestivum)表现出植物毒性。浓度为100 mg L⁻¹时,其使种子发芽率降低27%,根长降低48%,芽长降低29%,叶绿素a含量降低76%,叶绿素b含量降低53%。
生物转化代谢物(尤其是在静置处理48小时后)未表现出明显的植物毒性,发芽率、生长和叶绿素含量均接近正常水平。[2]
细胞毒性:活性蓝4(0.01 mg mL⁻¹)显著降低了HaCat细胞和FHM细胞的细胞活力,细胞活力分别降至53.33%和44.97%。
其代谢物的细胞毒性随时间推移而降低。 48 小时静态处理后的代谢物显示,HaCat 细胞存活率为 95.83%,FHM 细胞存活率为 100.80%,表明解毒效果显著。[2]
遗传毒性:活性蓝 4 可诱导显著的 DNA 损伤。与对照组相比,活性蓝 4 使人淋巴细胞、HaCat 细胞和 FHM 细胞的尾部 DNA 百分比分别增加了 3.26 倍、2.02 倍和 11.5 倍。
生物转化后的代谢物(来自 24 小时静态处理、48 小时静态处理和 24 小时静态处理 + 24 小时摇动处理)显示 DNA 损伤显著减少,表明遗传毒性消失。[2]
参考文献

[1]. Reactive Blue 4 as a Single Colorimetric Chemosensor for Sequential Determination of Multiple Analytes with Different Optical Responses in Aqueous Media: Cu2+-Cysteine Using a Metal Ion Displacement and Cu2+-Arginine Through the Host-Guest Interaction.

[2]. Effective biotransformation and detoxification of anthraquinone dye reactive blue 4 by using aerobic bacterial granules. Water Res. 2017 Oct 1;122:603-613.

其他信息
活性蓝4 (RB4) 是一种水溶性蒽醌染料,用作比色化学传感器。
该传感器按顺序工作:游离的RB4通过结合位点-信号亚基的方式检测Cu²⁺离子,形成1:1的RB4-Cu²⁺复合物,其缔合常数为(4.46 ± 0.12) × 10⁵ L mol⁻¹。
该复合物随后可区分检测L-精氨酸(Arg)和L-半胱氨酸(Cys)。Arg的检测是通过其氨基和羧基与复合物结合的宿主-客体相互作用实现的(结合常数为1.09 × 10⁴ L mol⁻¹)。由于半胱氨酸(Cys)对Cu²⁺具有更高的亲和力,因此可通过金属置换机制进行检测,Cu²⁺可释放游离的RB4。
在pH 7.0的HEPES水溶液缓冲液中,Cu²⁺、精氨酸(Arg)和Cys的检测限(LOD)分别为1.96 μmol L⁻¹、1.06 μmol L⁻¹和1.33 μmol L⁻¹。
该传感器在pH 6.0至9.0范围内有效工作,在pH 7.0时响应最佳。
实际应用包括检测添加了Cu²⁺的水样(自来水、河水)和血清样品中的Cu²⁺、商业膳食补充剂中的Arg以及人血清样品中的Cys,且回收率良好。
该系统还被制成纸质试纸,用于肉眼检测Arg和Cys。
此外,利用607 nm处的吸光度变化模拟分子逻辑门:一个与非门(NAND门)。输入 Cu²⁺ 和 Arg,以及一个输入 Cu²⁺ 和 Cys 的 IMPLICATION 门。[1]
活性蓝 4 是一种用于纺织工业的蒽醌染料,也是一种难降解的水污染物。
本研究表明,好氧细菌颗粒 (ABG) 是其生物修复和解毒的有效系统。
微生物群落分析(16S rRNA 宏基因组学)揭示了染料暴露期间颗粒组成的变化,厚壁菌门和拟杆菌门等门以及卟啉单胞菌科和纤细杆菌科等科的丰度增加,表明它们在降解过程中发挥作用。
PICRUSt 推断的宏基因组分析预测,在染料脱色过程中,外源物质降解途径(例如,萘、苯甲酸降解)和环境信息处理系统会上调。
提出的生物转化途径涉及还原裂解及其后续分解为更简单、毒性更低的芳香族化合物。
该研究强调了ABGs在处理各种环境条件下含有高浓度蒽醌染料的纺织废水方面的潜力。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C23H14CL2N6O8S2
分子量
637.4287
精确质量
635.969
CAS号
13324-20-4
相关CAS号
4499-01-8 (di-hydrochloride salt)
PubChem CID
25863
外观&性状
Blue to dark blue solid powder
密度
1.86g/cm3
折射率
1.774
LogP
6.405
tPSA
248.39
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
14
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
41
分子复杂度/Complexity
1220
定义原子立体中心数目
0
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~83.33 mg/mL (~130.73 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 4.17 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 41.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 4.17 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 41.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 4.17 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 41.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 5 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100μL 20.8mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20%SBE-β-CD生理盐水中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.5688 mL 7.8440 mL 15.6880 mL
5 mM 0.3138 mL 1.5688 mL 3.1376 mL
10 mM 0.1569 mL 0.7844 mL 1.5688 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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