Rebaudioside M   中文名称: 瑞鲍迪甙 M

Rebaudioside M (Reb M) does not have a defined pharmacological target. It functions as a non-nutritive sweetener interacting with sweet taste receptors (T1R2/T1R3). No specific receptor binding data (IC50, Ki, EC50) are reported in the provided articles. [1,2,3]

莱鲍迪苷M（Reb M）在酶促级联合成中：使用融合酶UGT76G1-91C1（带有(GGGGS)₃连接子）将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷M。该融合酶在约42°C和pH 7.0条件下表现出最佳活性。由三个GGGGS重复组成的肽连接子增强了底物通道效应，使莱鲍迪苷M的合成速率比无连接子的酶提高了1.8倍。[2]
溶解性： 结晶型莱鲍迪苷M微溶于水（25°C下5分钟内0.1 g/100 mL）和乙醇。其无定形材料在25°C水中的溶解度为1.1%-1.3%。在25°C水中的热力学平衡溶解度为0.26%。[1]
溶液稳定性： 作为干粉，莱鲍迪苷M在环境温度和受控湿度条件下至少稳定一年。在水溶液中，它在pH 4-8时最稳定，在pH低于2时稳定性明显下降。稳定性随温度升高而降低。其稳定性与莱鲍迪苷A非常相似。在热处理饮料中，莱鲍迪苷M在高温短时热处理和后续产品储存期间表现出良好的稳定性。[1]
降解途径： 在水解条件下（pH 2-8），莱鲍迪苷M的主要反应途径包括：C-16烯烃异构化形成C-15异构体（化合物12），C-16烯烃水合生成化合物13，C-19位糖基酯水解生成莱鲍迪苷B（化合物2），以及化合物2中C-16烯烃异构化生成化合物16。所有这些降解产物都是甜的，其中化合物12比化合物2、13和16更甜，具有与莱鲍迪苷M相似的味觉特性。[1]
体外代谢： 在体外代谢中，莱鲍迪苷M与莱鲍迪苷A一样，主要转化为其苷元甜菊醇和甜菊醇葡萄糖醛酸苷。[1]

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Rebaudioside M作为一种高甜度甜菊糖苷，其体外活性主要体现在对肠道菌群的代谢稳定性上。在体外厌氧条件下使用人粪便匀浆孵育时，Rebaudioside M会被肠道微生物群快速水解为最终代谢产物甜菊醇，该过程通常在24小时内完成，大部分代谢发生在最初8小时内。Rebaudioside M本身对味觉受体T1R2/T1R3具有高亲和力，这是其甜味来源的结构基础，但在无细胞的酶/受体结合实验中，其直接功能性激活通常需要完整的细胞膜环境。

Rebaudioside M的体内活性主要体现为其作为前体药物在肠道中被代谢后间接产生的甜味效应和药理学活性。该化合物本身在体内不具备直接生物活性，口服后完整地到达结肠，在肠道微生物群编码的β-葡萄糖苷酶作用下逐步水解，最终完全转化为苷元——甜菊醇。甜菊醇是唯一能被吸收进入血液循环的活性代谢物，因此Rebaudioside M的所有体内活性本质上均归因于其代谢产物甜菊醇。体内研究发现，不同剂量的Rebaudioside M（如0.2 mg/mL和2.0 mg/mL）在大鼠或人粪便匀浆中的代谢速率基本一致，均在24小时内完全转化为甜菊醇，且代谢过程与Rebaudioside A等已充分研究的甜菊糖苷类物质完全相同。这一定性结果为利用已有的甜菊醇和Rebaudioside A毒理学数据库进行交叉参照以支持Rebaudioside M的安全性提供了科学依据。

莱鲍迪苷M（Reb M）融合酶UGT76G1-91C1活性测定：融合酶（带有(GGGGS)ₙ连接子，n=0,1,3,5）在毕赤酵母中表达，并通过Ni²⁺亲和层析纯化。对纯化酶的最佳温度和pH进行了表征。该酶在约42°C和pH 7.0条件下表现出最佳活性。带有(GGGGS)₃连接子的融合体增强了底物通道效应，使莱鲍迪苷M的合成速率比无连接子的酶提高了1.8倍。[2]

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Rebaudioside M的体外代谢研究通常在厌氧条件下进行。实验流程如下：收集健康志愿者的新鲜粪便样本，制备10%（w/v）的人粪便匀浆作为酶源。将Rebaudioside M以0.2 mg/mL或2.0 mg/mL的浓度加入孵育体系中，在37°C厌氧条件下孵育。在不同时间点（如0、2、4、8、24小时）取样，通过加热终止反应。样品经离心和固相萃取净化后，使用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）分析母体化合物的剩余量及代谢物（如甜菊醇、甜菊双糖苷）的生成量。对于甜味受体的结合研究，通常使用表面等离子体共振（SPR）技术或放射性配体结合实验，将重组表达的人源T1R2/T1R3受体蛋白固定在芯片上，测定Rebaudioside M与受体的结合亲和力（KD值）。

Rebaudioside M的体外细胞实验主要用于评估其遗传毒性。标准流程包括细菌回复突变试验（Ames试验）和体外微核试验。在Ames试验中，将不同浓度的Rebaudioside M（通常设置5-6个剂量组）与鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型菌株（如TA98、TA100等）在有无代谢活化系统（S9）的条件下共同孵育，48小时后计数回复突变菌落数，判断是否为阳性。体外微核试验则使用人外周血淋巴细胞或CHO细胞，将细胞暴露于Rebaudioside M 24-48小时后，用细胞松弛素B阻断胞质分裂，收获细胞后染色，在显微镜下计数双核细胞中的微核率。现有数据显示Rebaudioside M在这些测试中结果为阴性，表明无遗传毒性。

Rebaudioside M的体内动物实验主要遵循毒理学评价的常规设计。由于所有甜菊糖苷在体内均代谢为共同的代谢物甜菊醇，且现有证据表明Rebaudioside M与该类别其他物质代谢途径相同，因此其安全性数据可进行“交叉参照”。典型的90天亚慢性毒性实验使用大鼠（每组10-20只，雌雄各半），通过灌胃或混饲方式给予不同剂量（如0、500、1000、2000 mg/kg体重/天）的Rebaudioside M，每日观察临床症状，每周记录体重和摄食量。实验结束时进行血液学、血清生化、尿液分析，并对主要器官（肝、肾、心脏等）进行组织病理学检查。此外，标准动物实验还包括对药代动力学特性的评估，即单次或多次口服给药后，在不同时间点采集血样测定甜菊醇的血药浓度。

体外代谢研究表明，与莱鲍迪苷A类似，莱鲍迪苷M在代谢过程中主要转化为其苷元甜菊醇和甜菊醇葡糖醛酸苷。[1] 研究了莱鲍迪苷M在水溶液（pH 2-8）中的稳定性。主要降解途径包括C-16烯烃异构化形成C-15异构体、C-16烯烃水合以及C-19位糖苷酯水解。这些降解产物已被鉴定，其中一些仍保留甜味。[1]

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莱鲍迪苷M（Reb M）在体外代谢中，与莱鲍迪苷A一样，主要转化为其苷元甜菊醇和甜菊醇葡萄糖醛酸苷。[1]
所提供文章中未报告详细的药代动力学参数（吸收、分布、排泄、半衰期、口服生物利用度）。[1,2,3]

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Rebaudioside M的药代动力学特征与甜菊糖苷类物质一致。口服后，Rebaudioside M本身几乎不被胃肠道吸收，而是完整地到达结肠。在结肠中，它被肠道微生物群编码的β-葡萄糖苷酶逐步水解，首先去除葡萄糖基生成Rebaudioside D和A等中间体，最终完全水解为苷元——甜菊醇。甜菊醇是该类别物质被吸收进入血液循环的唯一形式。吸收后的甜菊醇在肝脏主要与葡萄糖醛酸结合，形成甜菊醇葡萄糖苷酸，通过胆汁排泄进入肠道，形成肠肝循环，最终主要经尿液排出体外。由于所有甜菊糖苷均转化为同一活性代谢物甜菊醇，因此整个类别具有相同的PK特性和4 mg/kg体重/天（以甜菊醇当量计）的每日允许摄入量（ADI）。

文献提到，瑞鲍迪苷M获得了美国FDA颁发的关于其“公认安全”（GRAS）地位的“无异议函”。[1]
莱鲍迪苷M（Reb M）已获得美国FDA关于其公认安全状态（GRAS）的无疑问函。[1]
所提供文章中未报告详细的毒性数据（LD50、肝肾毒性或其他不良效应）。[1,2,3]

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Rebaudioside M的毒理学特征已得到充分研究，总体认为其作为食品添加剂在规定的使用条件下是安全的。遗传毒性评估显示，Rebaudioside M在细菌回复突变试验和体外微核试验中结果均为阴性，表明其不具有遗传毒性。对潜在杂质的关注主要集中在香紫苏烯酸（kaurenoic acid），该物质具有潜在的遗传毒性，但采用检测限为0.3 mg/kg的分析方法证实其在终产品中未检出，可消除相关担忧。基于肠道微生物将其完全代谢为甜菊醇的特性，以及甜菊糖苷类别物质代谢途径相同的科学共识，Rebaudioside M的安全性可借鉴已有的Rebaudioside A和甜菊苷的毒理学数据库。欧洲食品安全局（EFSA）已确认现有4 mg/kg体重/天（以甜菊醇当量计）的每日允许摄入量（ADI）同样适用于发酵法生产的Rebaudioside M。

[1]. Development of Next Generation Stevia Sweetener: Rebaudioside M. Foods. 2014 Feb 27;3(1):162-175.

[2]. Fusion glycosyltransferase design for enhanced conversion of rebaudioside A into rebaudioside M in cascade. Molecular Catalysis. 2023 Aug, 547: 113317.

[3]. Stevioside acts directly on pancreatic beta cells to secrete insulin: actions independent of cyclic adenosine monophosphate and adenosine triphosphate-sensitive K+-channel activity. Metabolism. 2000 Feb;49(2):208-14.

莱鲍迪苷M是莱鲍迪苷A的一种衍生物，其β-D-葡萄糖酯部分2位和3位的羟基均转化为相应的β-D-葡萄糖苷。它在甜叶菊（Stevia rebaudiana）叶片中的含量极低，甜度是蔗糖的200多倍。它是一种甜味剂。它既是β-D-葡萄糖苷，也是莱鲍迪苷。它在功能上与莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷D和β-D-Glcp-(1->2)-[β-D-Glcp-(1->3)]-β-D-Glcp相关。
另见：甜叶菊叶（部分）。

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莱鲍迪苷M是一种天然的非热量甜菊糖苷甜味剂，从甜叶菊（Stevia rebaudiana Bertoni）中分离得到。[1]
经训练的感官评价小组进行的感官评价表明，莱鲍迪苷M具有清爽的甜味，略带苦味或甘草味的回味，但不如莱鲍迪苷A明显。使用贝德勒模型估计其甜度是蔗糖的200-350倍。 [1]
将莱鲍迪苷M与其他甜味剂（例如，莱鲍迪苷A、D、B、赤藓糖醇）混合，可以改善总甜度、甜味特征等感官特性，并降低苦味和余味，从而展现出协同效应并提升口感。[1]
莱鲍迪苷M可广泛应用于各种食品和饮料中。其典型使用浓度范围为：碳酸饮料中100-600 mg/kg，非碳酸饮料中50-600 mg/L，粉状软饮料中200-2000 mg/kg，以及口香糖中高达6000 mg/kg等。在软饮料、餐桌甜味剂、口香糖和酸奶等产品中，莱鲍迪苷M在储存期间表现出良好的稳定性。 [1]
该纯化合物在水中的溶解度很低（25℃时热力学平衡溶解度为0.26%）。干燥粉末在室温下至少可稳定保存一年。在溶液中，其在pH 4-8时最为稳定。[1]

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莱鲍迪苷M（Reb M）是甜叶菊叶片中的微量甜味成分之一。它是ent-kaurene二萜苷元甜菊醇的糖苷。[1]
感官属性： 使用Beidler模型估计，莱鲍迪苷M的甜度是蔗糖的200-350倍。感官评价表明，莱鲍迪苷M具有纯净的甜味，带有轻微的苦味或甘草余味。与莱鲍迪苷A相比，莱鲍迪苷M的苦味、涩味和苦味余味感知降低，甜味强度相似。在酸化水中，莱鲍迪苷M表现出更快的甜味 onset，减少的非甜味（苦味、酸味、涩味）和减少的苦味余味。经过培训的描述性感官小组在约10%蔗糖等价水平的水中评估莱鲍迪苷M时，未检测到任何显著的苦味或甘草异味。莱鲍迪苷M和阿斯巴甜具有相似的高效甜味剂特征。甜味时间曲线显示，莱鲍迪苷M的消逝时间最长，其次是阿斯巴甜，然后是蔗糖，其出现时间也最长。[1]
复配： 莱鲍迪苷M可与其他甜味剂复配，包括莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷B和赤藓糖醇。复配物在总甜度、整体甜味曲线和减少异味方面表现出改善。莱鲍迪苷M和蔗糖的复配物（莱鲍迪苷M贡献20%-80%的甜度）表现出非常接近糖的风味和时间曲线。甜味氨基酸和盐也能改善莱鲍迪苷M的味觉。[1]
食品应用： 莱鲍迪苷M适用于多种食品和饮料产品，包括碳酸软饮料（100-600 mg/L）、非碳酸饮料（50-600 mg/L）、粉末软饮料（200-2000 mg/kg）、餐桌甜味剂（800-4000 mg/kg）、烘焙产品（200-1000 mg/kg）、乳制品（150-1000 mg/kg）、口香糖（300-6000 mg/kg）、糖果（100-1000 mg/kg）、谷物（200-1000 mg/kg）、可食用凝胶（200-1000 mg/kg）、营养保健品（200-1000 mg/kg）和药品（50-1000 mg/kg）。在软饮料中，用莱鲍迪苷M甜味的产品在26周的储存期内保持可接受的甜度。餐桌甜味剂配方至少稳定52周。莱鲍迪苷M在口香糖中稳定且有功能，持续26周。在原味酸奶中，在巴氏杀菌和发酵过程中没有显著的甜度损失，并且在6周的储存期内保持稳定。[1]
生物合成： 甜菊糖苷的生物合成途径涉及由UDP依赖性糖基转移酶催化的一系列糖基化反应。来自甜叶菊的UGT76G1和来自水稻的UGT91C1是分别添加C3'-葡萄糖基和C2'-葡萄糖基的关键酶。莱鲍迪苷M可以通过使用这两种UGT的级联反应从天然丰富的莱鲍迪苷A合成。[2]
融合酶设计： 开发了一种融合酶UGT76G1-91C1，带有柔性肽连接子(GGGGS)ₙ（n=0,1,3,5），以创建人工分子内底物通道。该融合酶在毕赤酵母中表达，产量约为每升培养物25 mg纯化蛋白。细胞内过表达融合酶的全细胞催化剂比分别表达UGT76G1或UGT91C1的混合细胞或混合纯化酶表现出更高的催化效率、热稳定性和可回收性。[2]

C56H90O33

1291.2940

1290.536

1220616-44-3

92023628

White to off-white solid

1.67±0.1g/ml(Predicted)

-6

532

20

33

19

89

2400

36

C[C@@]12CCC[C@@](C)(C(=O)O[C@@H]3O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O[C@@]4([H])[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]3O[C@@]3([H])[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@]1([H])CC[C@]13CC(=C)[C@](O[C@]4([H])O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O[C@@]5([H])[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]4O[C@@]4([H])[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)(CC[C@@]21[H])C3

GSGVXNMGMKBGQU-PHESRWQRSA-N

InChI=1S/C56H90O33/c1-19-11-55-9-5-26-53(2,7-4-8-54(26,3)52(77)88-50-44(86-48-40(75)36(71)30(65)22(14-59)80-48)42(32(67)24(16-61)82-50)84-46-38(73)34(69)28(63)20(12-57)78-46)27(55)6-10-56(19,18-55)89-51-45(87-49-41(76)37(72)31(66)23(15-60)81-49)43(33(68)25(17-62)83-51)85-47-39(74)35(70)29(64)21(13-58)79-47/h20-51,57-76H,1,4-18H2,2-3H3/t20-,21-,22-,23-,24-,25-,26+,27+,28-,29-,30-,31-,32-,33-,34+,35+,36+,37+,38-,39-,40-,41-,42+,43+,44-,45-,46+,47+,48+,49+,50+,51+,53-,54-,55-,56+/m1/s1

[(2S,3R,4S,5R,6R)-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-3,4-bis[[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy]oxan-2-yl] (1R,4S,5R,9S,10R,13S)-13-[(2S,3R,4S,5R,6R)-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-3,4-bis[[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy]oxan-2-yl]oxy-5,9-dimethyl-14-methylidenetetracyclo[11.2.1.01,10.04,9]hexadecane-5-carboxylate

REBAUDIOSIDE M; rebaudioside X; Fema No. 4895; Fema No. 4922;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~77.44 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (1.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (1.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (1.94 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。