(rel)-AR234960   中文名称: （rel）-AR234960

(rel)-AR234960 is a selective and potent agonist of the MAS receptor (MAS1, Mas-related G protein-coupled receptor), which is a component of the renin-angiotensin system (RAS). MAS is known to bind angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] and mediates many of the vasodilatory, anti-proliferative, anti-fibrotic, and cardioprotective effects of Ang-(1-7) through various intracellular signaling pathways. However, (rel)-AR234960, as a non-peptide MAS agonist, displays a distinct signaling profile: it promotes fibrosis (collagen synthesis) rather than anti-fibrotic effects. Upon binding to MAS, (rel)-AR234960 activates the ERK1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2) signaling pathway, which is a classic mitogen-activated protein kinase (MAPK) cascade involved in cell proliferation, differentiation, and survival. The activation of ERK1/2 by (rel)-AR234960 leads to the upregulation of CTGF (connective tissue growth factor) at both the mRNA and protein levels in cardiac fibroblasts and in HEK293-MAS cells. CTGF is a matricellular protein that plays a key role in promoting extracellular matrix deposition, fibrosis, and tissue remodeling. Through this MAS-ERK1/2-CTGF signaling axis, (rel)-AR234960 promotes the synthesis of collagen types I and III (COL1A1, COL3A1), which are the major components of the extracellular matrix in fibrotic tissue. Thus, (rel)-AR234960 functions as a selective MAS receptor agonist with pro-fibrotic signaling outcomes. Its pro-fibrotic activity can be blocked by the MAS inverse agonist AR244555 or by a MEK1 inhibitor (e.g., PD98059 or U0126), confirming the role of the ERK1/2 pathway in mediating its effects. This compound has no reported activity at the angiotensin II type 1 receptor (AT1R) or angiotensin II type 2 receptor (AT2R), demonstrating selectivity for MAS. The (rel)-AR234960 designation indicates that it is a racemic mixture or the relative configuration of the active isomer(s); AR234960 itself is the non-peptide MAS agonist. This compound is used as a positive control in assays evaluating MAS receptor activation and as a tool to distinguish MAS-mediated pro-fibrotic signaling from Ang-(1-7)-mediated anti-fibrotic signaling. It serves as a chemical probe to study the molecular switch in MAS signaling that determines the balance between pro-fibrotic and anti-fibrotic outcomes, which is relevant to understanding the pathophysiology of heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF), myocardial infarction, and other cardiac diseases where fibrosis plays a central role.

体外实验表明，(rel)-AR234960（或称AR234960，一种非肽类MAS激动剂）能够以浓度依赖的方式增加稳定表达MAS受体的HEK293细胞（HEK293-MAS细胞）和成人人源心脏成纤维细胞（HCF）中CTGF的mRNA和蛋白水平。据报道，CTGF上调的EC₅0值在亚微摩尔至低微摩尔范围内，但具体数值可能因细胞类型和实验条件而异。该效应特异性地依赖于MAS激活，因为与MAS反向激动剂AR244555共同处理可阻断该效应。促纤维化作用是通过ERK1/2 MAPK通路介导的，因为预先用MEK1抑制剂（例如PD98059或U0126）孵育可完全抑制CTGF表达的增加和随后的胶原合成。除了上调CTGF表达外，(rel)-AR234960还能增加心脏成纤维细胞中I型胶原α1链(COL1A1)和III型胶原α1链(COL3A1)基因的表达，这已通过定量实时PCR (qRT-PCR)检测证实。胶原蛋白的合成和沉积可以通过测定培养基或细胞裂解液中的羟脯氨酸含量，或使用可溶性胶原蛋白检测方法（例如Sircol检测）来定量，该方法可检测培养上清液中分泌的胶原蛋白。在表达MAS受体的收缩性心肌细胞或其他细胞类型中，(rel)-AR234960可能具有不同的作用（例如，可能促进肥大或细胞凋亡），但文献报道的主要活性与其在成纤维细胞中的促纤维化作用有关。该化合物在用于激活MAS的浓度范围（最高达10 uM）内未诱导明显的细胞毒性，这已通过细胞活力检测（MTT、CellTiter-Glo）或LDH释放实验证实。(rel)-AR234960的体外活性已被用于建立MAS介导的纤维化细胞模型，该模型可用于筛选靶向MAS-ERK1/2-CTGF轴的潜在抗纤维化药物。MAS反向激动剂AR244555和ERK1/2抑制剂可阻断该化合物上调CTGF和胶原蛋白的能力，证实了其特异性和通路参与性。MAS下游的其他信号通路，例如PI3K/Akt或NO/cGMP通路，可能不会像Ang-(1-7)那样被(rel)-AR234960激活，这解释了其不同的生物学效应（促纤维化与抗纤维化）。 AR234960 的详细体外活性数据（例如 EC₅0、最大效应、时间进程、浓度-效应曲线）可能可在原始研究文献中找到，但这些具体的数值在标准供应商的数据表中并未统一提供。该化合物以消旋体或相对构型混合物的形式供应，产品目录信息中未明确活性对映体的绝对构型。

(rel)-AR234960 的体内活性主要体现在其对心肌纤维化和细胞外基质重塑的影响上。体内研究表明，MAS 激动剂（AR234960，一种非肽类激动剂）可促进胶原蛋白合成并加重心脏纤维化。具体的体内实验细节，例如动物模型、给药方案、给药途径以及观察到的对心脏结构和功能的影响，在标准供应商数据表中并未详细说明，但可在相关研究文献中找到。已知 (rel)-AR234960 可用于心力衰竭和心脏损伤的动物模型，以研究 MAS-ERK1/2-CTGF 通路在心肌纤维化发病机制中的作用。由于该化合物是一种非肽类激动剂，预计其口服生物利用度和代谢稳定性优于内源性肽类激动剂 Ang-(1-7)，使其成为体内药理学研究中更实用的工具。在体内，可以通过以下方法评估 (rel)-AR234960 的促纤维化作用：通过 qRT-PCR、Western blotting 或免疫组织化学方法测量心脏组织中纤维化标志物（I 型胶原、III 型胶原、CTGF、α-SMA、纤连蛋白）的表达；通过羟脯氨酸测定或苦味酸-天狼星红染色（可在偏振光显微镜下观察以区分 I 型和 III 型胶原）定量心脏中的总胶原含量；以及通过超声心动图评估心脏功能的变化（射血分数、短轴缩短率、左心室舒张末期内径、左心室质量以及舒张功能障碍的标志物，如 E/A 比值、E/e' 比值、左心房容积）。 (rel)-AR234960 的促纤维化作用可被 MAS 反向激动剂 AR244555 或 ERK1/2 抑制剂（例如 PD98059、U0126 或 selumetinib）联合用药所阻断，证实了 MAS-ERK1/2-CTGF 轴的参与。除心脏外，(rel)-AR234960 可能对表达 MAS 受体的其他组织（包括肾脏、肺、肝脏和血管）产生影响，但其主要研究应用领域是心脏生物学。(rel)-AR234960 并非治疗药物，而是一种用于探索 MAS 受体生物学特性（尤其是其在纤维化中的作用）的药理学工具。该化合物也可用于研究MAS激活对血压调节的影响（因为Ang-(1-7)是一种血管扩张剂），但AR234960的促纤维化活性表明其对血管系统的影响可能与Ang-(1-7)不同。供应商的数据表中未描述详细的体内研究方案（例如，动物种类、剂量、给药途径、给药频率、治疗持续时间、终点指标），必须从已发表的研究文章中获取。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。

体外检测MAS受体介导的信号通路主要有两种方法。方法一：通过qRT-PCR检测CTGF mRNA表达：将人源心脏成纤维细胞（HCF，成人原代细胞）或稳定转染MAS受体的HEK293细胞（HEK293-MAS）培养于添加10% FBS和抗生素的适宜培养基中（例如，HCF使用DMEM/F12培养基，HEK293使用DMEM培养基）。将细胞接种于6孔板（3-5×10⁵个细胞/孔）或12孔板（1-2×10⁵个细胞/孔），待细胞汇合度达到70-80%后，在刺激前12-24小时更换培养基，以降低背景信号。将 (rel)-AR234960（或 AR234960）溶解于 DMSO 中配制成储备液（例如，10 mM）。使用无血清培养基进行系列稀释，最终 DMSO 浓度应 ≤0.1% (v/v) 以避免细胞毒性。用浓度范围为 1 nM 至 10 uM 的 (rel)-AR234960 处理细胞（浓度范围较广；确切的 EC₅0 可通过实验确定）。对照组细胞用溶剂（含 0.1% DMSO 的培养基）处理。在时间进程研究中，用固定浓度的 (rel)-AR234960（例如，1 uM）处理细胞 1、3、6、12、24 和 48 小时。为进行抑制剂研究（以确认通路参与），细胞预先与以下物质孵育30-60分钟：（i）MAS反向激动剂AR244555（1-10 uM），（ii）MEK1/2抑制剂，例如PD98059（10-50 uM）或U0126（5-10 uM），（iii）p38 MAPK抑制剂（SB203580，10 uM），或（iv）PI3K抑制剂（LY294002，10 uM），之后加入(rel)-AR234960。处理结束后，使用TRIzol试剂或RNA提取试剂盒从细胞中提取总RNA。使用逆转录酶和随机六聚体或oligo(dT)引物合成cDNA。采用SYBR Green或TaqMan探针，使用针对以下基因的特异性引物进行定量实时PCR (qRT-PCR)：CTGF（结缔组织生长因子）、COL1A1（I型胶原α1链）、COL3A1（III型胶原α1链）、FN1（纤连蛋白1）、ACTA2（α-平滑肌肌动蛋白，α-SMA）和TGFB1（转化生长因子β1）。管家基因（GAPDH、β-肌动蛋白或18S rRNA）用作内参。基因相对表达量采用2^-ΔΔCt法计算，结果以相对于载体对照组的倍数变化表示。方法2——CTGF、磷酸化ERK1/2和胶原蛋白的Western blotting：细胞接种和处理方法如上所述。处理结束后（例如，CTGF 处理 6、12 和 24 小时；磷酸化 ERK1/2 处理 15、30 和 60 分钟），用冰冷的 PBS 洗涤细胞，并在含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂（例如，1 mM Na3VO4、1 mM NaF）的 RIPA 裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.4，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5% 脱氧胆酸钠，0.1% SDS，1 mM EDTA）中裂解细胞。裂解液在 4℃ 下以 12,000 × g 离心 15 分钟以去除细胞碎片。采用 BCA 法测定蛋白质浓度。等量的蛋白质（每泳道 20-50 ug）经 SDS-PAGE 电泳分离（CTGF 使用 10-12% 的凝胶，磷酸化 ERK1/2 使用 10% 的凝胶，胶原蛋白使用 7.5% 的凝胶），然后转移至 PVDF 或硝酸纤维素膜。将膜在室温下用 5% 脱脂奶粉或 BSA 的 TBST（含 0.1% Tween-20 的 Tris 缓冲盐溶液）封闭 1 小时。一抗（用封闭缓冲液稀释）于4℃孵育过夜：抗CTGF（1:500-1:2000）、抗磷酸化ERK1/2（Thr202/Tyr204，1:1000）、抗总ERK1/2（1:1000）、抗I型胶原（1:500）、抗III型胶原（1:500），以及抗β-肌动蛋白或抗GAPDH（1:2000-1:5000）作为上样对照。用TBST洗涤后，将膜与HRP标记的二抗（1:2000-1:10000）于室温孵育1小时。使用增强化学发光（ECL）底物显色，并使用ImageJ或类似软件通过密度分析法定量分析条带强度。磷酸化ERK1/2水平以总ERK1/2或β-肌动蛋白进行标准化。CTGF、I型胶原和III型胶原水平以β-肌动蛋白进行标准化。胶原分泌测定：处理48-72小时后收集细胞培养上清液。使用Sircol可溶性胶原测定试剂盒（Biocolor），按照制造商的说明测定分泌的胶原浓度。简而言之，取一定量的上清液（200-500 uL）与Sircol染料试剂混合，该染料可与I-V型胶原结合。通过离心沉淀胶原-染料复合物，并用碱性试剂（0.5 M NaOH）释放结合的染料。在540 nm处测量吸光度，并使用胶原标准品（试剂盒中提供）绘制标准曲线，通过插值法确定胶原浓度。羟脯氨酸（一种在胶原蛋白中含量丰富的氨基酸）含量可通过酸水解细胞裂解液或培养基（6 M HCl，110℃，16-24 小时）测定，随后进行氯胺 T 氧化，并与 Ehrlich 试剂（对二甲氨基苯甲醛）反应生成在 558 nm 处有吸收的显色剂。结果以每毫克蛋白质中羟脯氨酸的微克数表示。

为了评估 (rel)-AR234960 对细胞增殖、迁移和分化的影响，可在体外细胞实验中使用原代人心脏成纤维细胞 (HCF) 或 NIH/3T3 成纤维细胞（一种标准成纤维细胞系）。将 (rel)-AR234960 添加到培养基中（通常浓度为 0.1-10 μM），培养 24-72 小时。细胞增殖可通过 BrdU（5-溴-2'-脱氧尿苷）掺入、Ki67 免疫染色或 MTT 法（作为细胞数量的替代指标）进行检测。由于 (rel)-AR234960 促进的是纤维化（胶原沉积）而非细胞增殖本身，因此主要结果指标是胶原合成和 CTGF 上调，而非细胞增殖；其对细胞增殖的影响可能较小。细胞迁移通过划痕愈合实验进行评估：在6孔板中，用无菌移液器吸头划伤融合的成纤维细胞单层，形成无细胞间隙。洗涤细胞以去除碎片，然后在无血清或低血清（0.5% FBS）培养基中用(rel)-AR234960（0.1-10 μM）或载体处理。分别在0、12、24、36和48小时拍摄图像监测细胞迁移，并使用图像分析软件（例如ImageJ）量化伤口愈合面积。通过α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA，肌成纤维细胞分化标志物）的免疫染色评估(rel)-AR234960对成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响。将细胞培养于盖玻片上，用 (rel)-AR234960 处理 48-72 小时，固定、透化后，用抗 α-SMA 抗体染色，随后用荧光二抗染色。用 DAPI 复染细胞（以显示细胞核）。通过荧光显微镜定量 α-SMA 阳性细胞的百分比。由于 TGF-β1（转化生长因子 β1，一种强效促纤维化细胞因子）也能诱导 α-SMA 表达，因此 (rel)-AR234960 对 α-SMA 的影响可能不如其对胶原合成的影响显著；然而，胶原沉积增加通常伴随着肌成纤维细胞分化。使用 TGF-β1 (1-10 ng/mL) 作为促纤维化激活的阳性对照。为进行特异性控制，将MAS反向激动剂AR244555（1-10 μM）与(rel)-AR234960共孵育，以确认观察到的效应是由MAS介导的。为评估细胞活力和毒性，对用(rel)-AR234960（0.1-100 μM）处理24-72小时的细胞进行MTT检测。该化合物在浓度低于10 μM时通常无毒，但较高浓度（≥50 μM）可能导致一定程度的细胞毒性或细胞生长抑制。如有必要，应测定每种细胞系的细胞毒性IC₅₀（LC₅₀）；其通常>50 μM。该化合物以固体形式（或以10 mM的DMSO溶液形式）储存于-20℃。它可溶于DMSO，应避光防潮保存。

为了在体内药理学研究中评估 (rel)-AR234960 在心脏中的促纤维化作用，可以使用多种动物模型。模型 1 - 自发性或诱导性心脏纤维化模型（大鼠或小鼠）：使用 8-12 周龄的雄性 C57BL/6 小鼠或 Sprague-Dawley 大鼠（250-300 g）。(rel)-AR234960 配制于合适的溶剂中（例如，5% DMSO + 5% Tween-80 + 90% 生理盐水，或 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) + 0.1% Tween-80，或 PEG400/水混合物）。该化合物每日通过腹腔注射 (ip) 或灌胃给药，剂量范围为 1 至 30 mg/kg（最佳剂量需通过初步剂量反应实验确定）。治疗持续时间为7天至4周，具体取决于所需的纤维化程度。对照组动物仅接受载体注射。治疗结束后，对动物实施安乐死，取出心脏，用PBS缓冲液冲洗后，将其对半切开。一半用10%福尔马林或4%多聚甲醛固定，用于组织学分析；另一半用液氮速冻，用于生化分析（蛋白质提取用于Western blotting，RNA提取用于qRT-PCR，或羟脯氨酸测定）。为了评估胶原沉积，将石蜡包埋的心脏切片（5微米厚）用苦味酸-天狼星红（PSR）染色，以显示纤维状胶原（I型和III型）。在明场显微镜下，胶原呈红色；在偏振光显微镜下，I型胶原呈亮红色/橙色，III型胶原呈绿色。左心室（不包括右心室和心房）中胶原面积（胶原体积分数）占总组织面积的百分比可通过图像分析（例如 ImageJ、Aperio ImageScope）进行量化。Masson 三色染色法是另一种用于在肌肉（红色）背景下显示胶原（蓝色）的替代方法。对于半定量评分，病理学家可根据纤维化程度进行评分（0 = 无纤维化，1 = 轻度，2 = 中度，3 = 重度）。羟脯氨酸测定：取 20-50 mg 冷冻心脏组织，在 0.5 mL 6 M HCl 中匀浆，并在 110℃ 下水解 16-18 小时。水解后，离心样品，并将上清液真空干燥。将残渣用水复溶，并使用比色法（例如，使用氯胺 T 和 Ehrlich 试剂）测定羟脯氨酸含量。羟脯氨酸含量以每毫克湿组织重量或每毫克蛋白质的微克数表示。蛋白质印迹法：将冷冻心脏组织在液氮中研磨成粉末，并在含有蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液中匀浆。将匀浆液离心，取上清液进行CTGF、I型胶原、III型胶原、α-SMA、磷酸化ERK1/2和总ERK1/2的蛋白质印迹分析，具体方法见体外实验部分。定量RT-PCR：从冷冻心脏组织中提取总RNA（使用TRIzol或商业试剂盒），并按照体外实验部分所述进行定量RT-PCR，检测CTGF、COL1A1、COL3A1和其他促纤维化基因的表达。超声心动图：在安乐死前，用异氟烷（1-2%异氟烷/氧气）麻醉小鼠或大鼠，并将其置于加热垫上。经胸超声心动图检查使用配备 30-40 MHz 探头的高频超声系统（例如 VisualSonics Vevo 2100 或类似产品）。采集标准胸骨旁长轴和短轴切面图像。在 M 型或二维模式下测量以下参数：左心室舒张末期内径 (LVIDd) 和收缩末期内径 (LVIDs)；左心室射血分数 (LVEF%)；短轴缩短率 (FS%)；左心室质量 (LV mass)；以及后壁厚度 (PWT)。通过脉冲波多普勒测量二尖瓣血流（E 波：早期舒张期充盈；A 波：心房收缩诱导的充盈）和组织多普勒成像（e′ 波：早期舒张期二尖瓣环速度）来评估舒张功能。计算 E/A 比值（正常值 >1.0-1.5）和 E/e′ 比值（左心室充盈压的标志）。胶原沉积增加预计与舒张功能改变（E/A 比值降低，E/e' 比值升高）相关，而收缩功能保持正常或略有降低，这与射血分数保留型心力衰竭 (HFpEF) 表型一致。心肌横截面的组织学评估也可用于测量心肌细胞肥大（H&E 染色切片中心肌细胞的横截面积）。模型 2 - 心肌梗死 (MI) 诱导的心脏纤维化模型：成年大鼠或小鼠接受左前降支 (LAD) 冠状动脉结扎术以诱导大面积心肌梗死。MI 后 1-3 天开始，每日给予 (rel)-AR234960，持续 4 周。研究结束时，通过超声心动图评估心脏功能，并通过苦味酸-天狼星红染色定量纤维化（瘢痕大小、边界区纤维化和远端区纤维化）。 (rel)-AR234960 的促纤维化作用在心肌梗死（MI）背景下可能更为显著（导致重塑和纤维化增加），也可用于研究 MAS 激活对梗死愈合和瘢痕形成的影响。在抑制剂研究中（以确认通路参与），将 MAS 反向激动剂 AR244555（1-10 mg/kg，腹腔注射）、MEK1/2 抑制剂 PD98059（10-30 mg/kg，腹腔注射）或 selumetinib（1-5 mg/kg，口服）与 (rel)-AR234960 联合给药。比较各治疗组对胶原沉积、CTGF 表达和心脏功能的影响。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗，应采取适当的预防措施。上述具体的体内实验方案基于心血管研究的标准实践，并未在化合物数据表中提供。这里提供这些内容，旨在为 (rel)-AR234960 作为研究工具的潜在用户提供一般性指导。

作为一种小分子非肽类激动剂（分子量 555.63），(rel)-AR234960 预计具有良好的药代动力学特性，包括口服生物利用度，而内源性肽类激动剂 Ang-(1-7) 的口服吸收率极低。非肽类特性表明该化合物在胃肠道中稳定，且能被有效吸收。AR234960 和 (rel)-AR234960 的药代动力学参数在标准供应商数据表中并未详细说明，但该化合物作为体内研究工具的用途表明其具有合理的代谢稳定性，并且在腹腔注射或口服给药后能达到足够的全身暴露量。动物研究中使用的典型剂量范围（可能为 1-30 mg/kg，基于体外有效浓度（低微摩尔级）和中等生物利用度的假设）与其他小分子 GPCR 激动剂一致。该化合物具有亲脂性（未提供logP值），可能具有较高的血浆蛋白结合率，这可能会影响与MAS受体相互作用的游离浓度。(rel)-AR234960 可代谢，最可能在肝脏（通过CYP450酶）代谢，但尚未报道具体的代谢产物和主要消除途径。供应商提供的数据表中未包含血浆半衰期和分布容积的信息。腹腔注射后，预计起效时间为30-60分钟。该化合物的组织分布包括心脏，MAS受体在心肌细胞、成纤维细胞和内皮细胞中表达。该化合物以固体形式储存于-20℃，可溶于DMSO（储备液）、PEG400和其他有机溶剂。体内给药时，该化合物应每日新鲜配制并避光保存。鉴于缺乏全面的药代动力学（PK）数据，建议在新的动物模型中使用该化合物时进行剂量探索研究（药效学剂量反应研究）。该化合物为研究用化学品，而非已获批准的药物，其吸收、分布、代谢和排泄（ADME）特性尚未完全表征以满足监管要求。用户应参考已发表的文献以获取与AR234960相关的PK数据。然而，对于大多数研究应用（细胞机制研究或啮齿动物短期体内疗效研究），无需详细的PK参数；重点在于选择能够达到靶点结合和可观察到的生物学效应且无明显毒性的剂量。一般而言，可在初步剂量反应实验中测试1-10 mg/kg腹腔注射或3-30 mg/kg口服的剂量范围，以CTGF上调或胶原沉积为终点，并选择产生显著效应的最低剂量进行后续研究。该化合物应在无菌条件下进行体内注射，以避免污染。由于缺乏正式的药代动力学数据，本概述基于以下假设：(rel)-AR234960 是一种典型的具有中等至良好口服生物利用度的小分子 GPCR 激动剂。建议使用该化合物的研究人员开展自己的药代动力学或药效学初步研究，以确定其特定模型的最佳给药方案。

作为一种研究用化学品，(rel)-AR234960 尚未进行专门的毒理学研究，其安全性尚未确定。该化合物不适用于人体，仅作为实验室研究的药理学工具。基于其作为促纤维化 MAS 激动剂的作用机制，(rel)-AR234960 在长期全身给药时预计会促进组织纤维化（尤其是在心脏、肾脏、肺和肝脏）。因此，长期给药可能诱发病理性组织重塑，从而造成损害。然而，对于急性或短期研究，在足以激活 MAS 并上调 CTGF/胶原蛋白表达的剂量下（可能为 1-10 mg/kg），该化合物可能具有良好的耐受性。目前尚无急性毒性 (LD₅₀) 数据。操作该化合物时应遵循标准的实验室安全防护措施：佩戴手套、实验服和护目镜；避免皮肤接触、眼睛接触和吸入。任何意外接触均应按照材料安全数据表 (MSDS) 进行处理。该化合物目前已知不具有遗传毒性，但尚未有关于特定 Ames 试验或染色体畸变研究的报道。潜在的长期危害尚不明确，因此该化合物应被视为潜在的健康危害，并应采取相应的措施。在细胞培养研究中，(rel)-AR234960 在浓度高达 10 μM 时未见细胞毒性报道；在更高浓度 (≥50 μM) 下，可能会出现一定程度的细胞生长抑制或细胞活力降低，但相关文献记载较少。建议用户针对拟使用的细胞系和浓度进行细胞毒性检测（例如，MTT 法、LDH 释放试验）。对于体内研究，应监测体重作为健康状况和耐受性的总体指标；显著的体重减轻或出现不适症状（活动减少、毛发蓬乱、弓背）表明可能存在不良反应。该化合物应妥善储存，并作为研究用化学品进行登记。与所有实验室化学品一样，其使用应符合机构安全指南。目前尚无关于L-扁桃酸根离子（不适用；该化合物并非盐形式，而是游离碱）或其他杂质毒性的具体数据。由于(rel)-AR234960是MAS受体的激动剂，而MAS受体在多种组织中均有表达，因此可能由于MAS在非心脏部位的激活而产生意想不到的脱靶效应；然而，此类效应与药理学而非毒性相关。该化合物的药物相互作用潜力尚未评估。鉴于缺乏正式的毒理学研究，使用者应尽量减少接触，并按照未知毒性研究用化学品的标准操作规程小心处理该化合物。该化合物不可用于诊断或治疗用途，除在合格人员监督下执行已批准的研究方案外，不得用于任何其他目的，包括用于人类或动物。

[1]. Connective tissue growth factor dependent collagen gene expression induced by MAS agonist AR234960 in human cardiac fibroblasts. PLoS One. 2017 Dec 29;12(12):e0190217.

(rel)-AR234960（CAS号：1408311-94-3）是一种研究级非肽类MAS受体（MAS1）激动剂，MAS1是一种G蛋白偶联受体（GPCR），是肾素-血管紧张素系统（RAS）的组成部分。它是AR234960的活性相对构型，可用作药理学工具，用于研究MAS介导的信号传导，尤其是在心脏纤维化和细胞外基质重塑的背景下。(rel)-AR234960的分子量为555.63（或555.62），分子式为C2₇H3₀FN₅O₅S。其同义词包括AR234960（母体化合物）和相对构型（外消旋混合物）。 IUPAC名称为1-[[(3R,4R)-4-(3-氟苯基)-1-(2-甲氧基-4-硝基苯基)磺酰基吡咯烷-3-基]甲基]-4-吡啶-2-基哌嗪。(rel)-AR234960是一种非肽类激动剂，与内源性MAS激动剂血管紧张素-(1-7) (Ang-(1-7))（一种肽类）相比，它更稳定，且生物利用度可能更高。Ang-(1-7)通常通过MAS介导血管舒张、抗高血压、抗纤维化和心脏保护作用，而(rel)-AR234960则激活MAS-ERK1/2-CTGF信号通路，促进胶原合成和纤维化。该化合物已被用于证明MAS可通过不同的信号通路传递信号，具体取决于激动剂，并可作为解析MAS信号分子决定因素的工具。(rel)-AR234960的促纤维化作用可被MAS反向激动剂AR244555或MEK1/2抑制剂（如PD98059或U0126）阻断。该化合物主要用于心血管研究，以构建心脏纤维化模型，研究MAS在病理性重塑中的作用，并筛选靶向MAS-ERK1/2-CTGF通路的抗纤维化药物。(rel)-AR234960尚未进入临床试验，也未获准用于治疗用途。它仅供实验室研究使用，应储存于-20℃，避光防潮。该化合物可溶于DMSO（10 mM储备液），可用水性缓冲液稀释，或配制成用于体内给药的载体，例如5% DMSO + 5% Tween-80 + 90%生理盐水、0.5%羧甲基纤维素（CMC）+ 0.1% Tween-80或PEG400/水混合物。根据供应商的不同，该化合物的纯度通常≥95%或≥98%。对于研究肾素-血管紧张素系统、MAS受体生物学或纤维化疾病的研究人员而言，(rel)-AR234960是一种有价值的化学探针，可用于研究导致病理性纤维化的MAS信号通路的特定分支。该化合物并非已获批准的药物，必须遵守所有适用的研究化学品法律法规。用户应查阅原始文献以获取 (rel)-AR234960 的详细功能表征和验证信息，因为该化合物是一种相对较新的工具（首次报道于 2010 年代），并非所有参数都已包含在标准供应商目录中。该化合物也称为 AR234960（非肽类 MAS 激动剂）。对于计划进行体内研究的研究人员，建议先进行初步的剂量范围探索实验，以心脏中 CTGF mRNA 的表达（单次给药后 24-48 小时）等终点指标来确定有效剂量，然后使用 MAS 反向激动剂 AR244555 验证其选择性。该化合物不适用于人体，应采取适当的安全措施进行操作。

C27H30FN5O5S

555.621008396149

555.195

1408311-94-3

89560738

White to off-white solid powder

3.6

120

0

10

7

39

925

0

S(C1C=CC(=CC=1OC)[N+](=O)[O-])(N1C[C@@H](C2C=CC=C(C=2)F)[C@H](CN2CCN(C3C=CC=CN=3)CC2)C1)(=O)=O

TUSCHIFEASZBBF-QPPBQGQZSA-N

InChI=1S/C27H30FN5O5S/c1-38-25-16-23(33(34)35)8-9-26(25)39(36,37)32-18-21(24(19-32)20-5-4-6-22(28)15-20)17-30-11-13-31(14-12-30)27-7-2-3-10-29-27/h2-10,15-16,21,24H,11-14,17-19H2,1H3/t21-,24+/m1/s1

1-[[(3R,4R)-4-(3-fluorophenyl)-1-(2-methoxy-4-nitrophenyl)sulfonylpyrrolidin-3-yl]methyl]-4-pyridin-2-ylpiperazine

(rel)AR234960; (rel) AR234960

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~44.99 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.50 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。