human GnRH ( IC50 = 0.33 nM ); monkey GnRH ( IC50 = 0.32 nM )
Human gonadotropin-releasing hormone receptor (GnRHR) antagonist (binding IC50 = 0.33 nM in the presence of serum).
Monkey GnRHR antagonist (binding IC50 = 0.32 nM).
Rat GnRHR (low affinity, binding IC50 = 9800 nM).
TAK-385 (relugolix) targets the human gonadotropin-releasing hormone receptor (hGNRHR) . The paper cites prior work (Miwa et al., 2011) reporting that TAK-385 has a binding IC50 of 0.33 nM for the human GnRH receptor in the presence of serum, and an IC50 of 0.32 nM for the monkey GnRH receptor. It has low affinity for the rat GnRH receptor (IC50 = 9800 nM). [2]

Relugolix 对猴受体表现出与人类受体 (IC50=0.33 nM) 相当的强结合亲和力 (IC50=0.32 nM)，而对大鼠受体 (IC50=9800 nM) 则降低了 30000 倍。在 40% 血清存在下，TAK-385 对人受体的体外拮抗活性 (IC90=18 nM) 比对猴受体 (IC90=1700 nM) 的拮抗活性高出 95 倍[1]。

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与先导化合物TAK-013相比，Relugolix对人和猴GnRH受体具有更高的亲和力和更强的拮抗活性。对人GnRHR的结合IC50为0.33 nM（在血清存在下），对猴GnRHR的结合IC50为0.32 nM。

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在体外实验中，Relugolix展现出对GnRH受体的高效拮抗活性。放射性配体结合实验显示，Relugolix与人GnRH受体的结合解离常数（Kd）低至0.37~0.84 nM。在功能实验中，Relugolix能够有效抑制GnRH诱导的细胞内钙离子动员（IC50约为4.05 nM），同时抑制花生四烯酸的释放（IC50可低至0.33~0.82 nM），全面阻断GnRH受体的下游信号转导。值得注意的是，在40%人血清存在的条件下，其拮抗活性依然保持，提示该药物在生理条件下的有效性。

Relugolix（口服；1-3 mg/kg；单剂量用于药代动力学研究）在 1 mg/kg 剂量下表现出良好的药代动力学特征和明显的对猴子循环 LH 水平的抑制作用。雄性食蟹猴的药代动力学曲线显示，Cmax、Tmax 和 AUCo 分别为 16.0 ng/mL、2.7 h 和 90.1 ng[1]。 Relugolix（口服；3、10 或 30 mg/kg；每天两次；4 周）显着降低男性睾丸重量，并在 3 mg/kg 时降低腹侧前列腺重量，在 10 mg/kg 时将其降低至去势水平hGNRHR 敲入小鼠[2]。 Relugolix（口服；30、100 或 200 mg/kg；每天两次；4 周）在 100 mg/kg 剂量的第一周内诱导所有小鼠持续绝情期，并在该剂量后显着降低卵巢和子宫的重量雌性 hGNRHR 敲入小鼠 4 周[2]。动物模型：雄性hGNRHR敲入小鼠[2] 剂量：3、10或30 mg/kg 给药方法：口服； 3、10或30毫克/公斤；每天两次; 4 周 结果：睾丸功能下降。动物模型：雌性 hGNRHR 敲入小鼠[2] 剂量：30、100 或 200 mg/kg 给药方法：口服；给药方式： 30、100或200毫克/公斤；每天两次; 4 周结果：将下丘脑-垂体-性腺轴抑制至性腺切除水平。垂体中 GnRH 受体 mRNA 水平下调。

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雄性人GnRHR敲入小鼠： 每日两次口服relugolix，持续4周，在10 mg/kg剂量下显著降低睾丸重量。在3 mg/kg剂量下即显著降低腹侧前列腺重量，在10 mg/kg剂量下可将其降至去势水平。[1]
雌性人GnRHR敲入小鼠： 每日两次口服relugolix（100 mg/kg）在第一周内诱导持续的动情间期。4周后，显著降低卵巢和子宫重量，降至与卵巢切除小鼠相当的水平。在有效抑制性腺功能的剂量下，垂体中GnRH受体mRNA的表达被下调。[1]
恢复研究： Relugolix的抑制作用是可逆的。在接受100或200 mg/kg每日两次给药28天的雌性小鼠中，停药后约5天动情周期恢复，降低的卵巢和子宫重量在停药后14天内完全恢复。[1]
在接受30 mg/kg每日两次给药28天的雄性小鼠中，腹侧前列腺重量和血清睾酮水平在停药后14天内从完全抑制状态恢复，但睾丸重量在28天观察期内未恢复。

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在雄性和雌性 hGNRHR 敲入小鼠中，TAK-385 均剂量依赖性地抑制性腺功能。在雄性敲入小鼠中，每日两次口服给药 4 周，在 ≥10 mg/kg 剂量下显著降低睾丸重量，在 ≥10 mg/kg 剂量下将腹侧前列腺重量降低至去势水平。即使在最低测试剂量（3 mg/kg，每日两次）下也观察到对前列腺重量的显著影响。 [2]
在雌性敲入小鼠中，每日两次口服 TAK-385 100 mg/kg 可在第一周内诱导所有动物进入持续间情期，并在 4 周后显著降低卵巢和子宫重量至去卵巢水平。TAK-385 还在有效抑制性腺功能的剂量下下调垂体中的人 GnRH 受体 mRNA 表达。 [2]
TAK-385 的抑制作用是可逆的。在给予 TAK-385（100 或 200 mg/kg，每日两次，共 28 天）的雌性小鼠中，停药后约 5 天开始恢复持续间情期；动物随后出现持续数天的连续动情期，然后恢复正常的动情周期。降低的卵巢和子宫重量在停药后 14 天内恢复到接近正常水平。在给予 TAK-385（30 mg/kg，每日两次，共 28 天）的雄性小鼠中，腹侧前列腺重量和血清睾酮水平在停药后 14 天内恢复到正常水平，证实了雄性生殖轴的功能恢复。 [2]

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在人GnRH受体敲入小鼠模型中，Relugolix口服给药可强效、持续且可逆地抑制下丘脑-垂体-性腺轴。雄性小鼠连续4周每日两次口服10 mg/kg的Relugolix后，前列腺重量降低至去势水平；雌性小鼠以100 mg/kg相同方案给药后，在一周内进入持续间情期，子宫重量下降至卵巢切除水平。停药后，两性小鼠的性腺功能均在5天内开始恢复，14天内几乎完全恢复，表明其作用具有可逆性。在晚期前列腺癌患者中，Relugolix能够快速将睾酮降至去势水平，且不引起睾酮激增。

Relugolix与GnRH受体的结合亲和力通常采用放射性配体竞争结合实验进行评估。标准流程如下：将表达重组人GnRH受体的细胞膜匀浆与固定浓度的放射性标记配体（如[¹²⁵I]亮丙瑞林或¹²⁵I标记的[D-Trp6]-LH-RH）以及梯度浓度的Relugolix共同孵育。孵育条件通常为室温或37°C，持续60分钟。孵育结束后，通过快速真空过滤或离心将结合配体与游离配体分离，并用洗涤缓冲液多次清洗以去除未结合放射性。滤膜或沉淀中的放射性信号通过γ计数器或液体闪烁计数器检测。通过绘制竞争曲线计算Relugolix的半数抑制浓度（IC50），随后利用Cheng-Prusoff方程将IC50转换为解离常数（Ki或Kd）。

Relugolix的细胞水平拮抗活性常用表达人GnRH受体的细胞系（如CHO细胞或HEK293细胞）进行检测。典型的实验流程包括：将细胞接种于多孔板中培养过夜。对于钙通量实验，细胞先加载钙荧光指示剂（如Fluo-4 Direct），加入不同浓度的Relugolix预孵育（通常15-30分钟），随后使用荧光成像读板仪（FLIPR）实时监测加入激动剂（GnRH）后细胞内钙离子浓度的变化。对于花生四烯酸释放实验，细胞需预先用³H标记的花生四烯酸孵育过夜，洗涤后加入Relugolix和GnRH，孵育45分钟后收集上清液，通过闪烁计数检测释放的放射性。根据剂量-反应曲线计算Relugolix的IC50值，评估其对GnRH诱导反应的抑制效果。

雄性hGNRHR敲入小鼠
3、10或30 mg/kg
口服给药；3、10或30 mg/kg；每日两次；4周

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模型：所有疗效研究均在人GnRH受体（hGNRHR）敲入小鼠中进行，其中小鼠Gnrhr基因被替换为人GnNRHR cDNA。
药物制剂：Relugolix溶解于含6 mg/mL柠檬酸一水合物的0.5%甲基纤维素溶液中。
雄性小鼠研究：化合物以指定剂量每日两次（BID）口服给药，持续4周。在终点评估器官重量（睾丸、腹侧前列腺）。
雌性小鼠研究：化合物以指定剂量每日两次口服给药，持续4周。通过阴道细胞学监测动情周期。在实验终点评估器官重量（卵巢、子宫）和垂体促性腺激素释放激素受体（GnRHR）mRNA表达。
恢复期研究：每日两次口服给药28天后，停止药物治疗。在停药后的特定时间点（例如，第3、7、10、14、28天）监测雌性小鼠的动情周期和雄性小鼠的器官重量。采集雄性小鼠的血液样本用于血清睾酮水平测定。

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hGNRHR 敲入小鼠构建：通过将小鼠 Gnrhr 基因座的第一外显子替换为人 GNRHR cDNA 和新霉素抗性单元来构建靶向载体。将载体电穿孔到胚胎干细胞中，用 G418 筛选正确重组的细胞。将重组细胞注射到 C57BL/6J 胚泡中，将嵌合雄鼠与 C57BL/6J 雌鼠回交。 [2]
雄性小鼠药效研究：6-11 周龄雄性 hGNRHR 敲入小鼠口服 TAK-385（3、10 或 30 mg/kg），每日两次，共 4 周。第 28 天处死，称量睾丸和腹侧前列腺重量。 [2]
雌性小鼠药效研究：10 周龄雌性敲入小鼠口服 TAK-385（30、100 或 200 mg/kg），每日两次，共 4 周。通过吉姆萨染色的阴道涂片监测动情周期。第 28 天处死，收集垂体、卵巢和子宫。称量卵巢和子宫重量；通过实时 PCR 测量垂体 GnRH 受体 mRNA 表达。 [2]
雌性恢复研究：8 周龄雌性敲入小鼠接受 TAK-385（100 或 200 mg/kg，每日两次，共 28 天）。在第 28 天、第 42 天和第 56 天处死亚组，评估卵巢和子宫重量的恢复情况。在治疗期间和治疗后监测动情周期。 [2]
雄性恢复研究：14 周龄雄性敲入小鼠接受 TAK-385（30 mg/kg，每日两次，共 28 天）。在第 28、31、35、38、42 和 56 天处死亚组。称量睾丸和腹侧前列腺重量，测量血清睾酮水平。 [2]

吸收、分布和排泄
单次口服瑞卢戈利后，其Cmax和AUC呈比例增加；相反，重复给药时，AUC仍与剂量成比例，而Cmax的增加幅度大于剂量比例。每日一次服用120mg后，瑞卢戈利的稳态AUC和Cmax分别为407 (± 168) ng·hr/mL和70 (± 65) ng/mL。瑞卢戈利的绝对口服生物利用度约为 12%，口服给药后的中位达峰时间 (Tmax) 为 2.25 小时。
口服剂量的约 81% 从粪便中排出，其中 4.2% 为原药；4.1% 从尿液中排出，其中 2.2% 为原药。
瑞卢戈利的平均肾清除率为 8 L/h，总清除率为 26.4 L/h。

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代谢/代谢物
瑞卢戈利主要由 P450 酶 CYP3A 亚家族代谢，CYP2C8 的贡献较小。

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生物半衰期
瑞卢戈利的平均有效半衰期为 25 小时，平均末端消除半衰期为 60.8 小时。

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Relugolix具有良好的口服生物利用度，吸收迅速。在健康女性受试者中，单次口服40 mg后，中位达峰时间（t_max）为1.50-2.26小时，几何平均峰浓度（C_max）为9.36-16.1 ng/mL，消除半衰期（t_1/2）约为15.9-56.6小时（平均约25-33小时）。在雄性Beagle犬中，肌内注射长效微晶制剂后表现出显著的缓释特征，AUC和t_max显著延长。该药物是P-糖蛋白（P-gp）的底物，与口服P-gp抑制剂联用时会显著增加Relugolix的暴露量，因此需要调整给药间隔或剂量。与强效CYP3A和P-gp联合诱导剂合用时，Relugolix暴露量降低，可能需要剂量调整。

肝毒性
接受瑞卢戈利治疗的患者中，1%至3%的患者出现血清转氨酶升高超过正常值上限（ULN）3倍，接受亮丙瑞林或地加瑞克等对照药物治疗的患者中，类似比例的患者也出现这种情况。血清酶升高通常较轻且具有自限性，即使不调整剂量也能自行恢复。ALT值超过ULN 5倍的患者不到1%，在瑞卢戈利单药或联合雌二醇和炔诺酮的预注册临床试验中，未观察到伴有症状或黄疸的ALT升高事件。自获批并广泛应用以来，尚未有已发表的关于瑞卢戈利引起临床明显肝损伤的报告。
可能性评分：E（不太可能是临床明显肝损伤的原因）。

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蛋白结合
瑞卢戈利在血浆中的蛋白结合率为68-71%，主要与白蛋白结合，其次与α1-酸性糖蛋白结合。

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在临床应用中，Relugolix的常见不良事件与其药理作用机制（睾酮抑制）相关。最常见的不良反应（≥10%）包括潮热（54%）、血糖升高（44%）、甘油三酯升高（35%）、肌肉骨骼疼痛（30%）、血红蛋白降低（28%）、丙氨酸氨基转移酶升高（27%）、疲劳（26%）、天冬氨酸氨基转移酶升高（18%）、便秘（12%）和腹泻（12%）。严重不良事件包括心肌梗死（0.8%）、急性肾损伤（0.6%）、心律失常（0.6%）、出血（0.6%）等。QT/QTc间期延长是需要关注的潜在风险，特别是对于有先天性长QT综合征、充血性心力衰竭或电解质异常的患者。上市后有血管性水肿（包括咽部水肿）的报告。该药物禁用于对Relugolix或其任何成分有严重过敏反应的患者。在动物研究中，基于其作用机制，Relugolix可导致胎儿损害和妊娠丢失。

[1]. Discovery of 1-{4-[1-(2,6-Difluorobenzyl)-5-[(dimethylamino)methyl]-3-(6-methoxypyridazin-3-yl)-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahydrothieno[2,3-d]pyrimidin-6-yl]phenyl}-3-methoxyurea (TAK-385) as a Potent, Orally Active, Non-Peptide Antagonist of the Human Gonadotropin-Releasing Hormone Receptor. J. Med. Chem. 2011, 54, 14, 4998–5012

[2]. Suppression of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis by TAK-385 (relugolix), a novel, investigational, orally active, small molecule gonadotropin-releasing hormone (GnRH) antagonist: studies in human GnRH receptor knock-in mice. Eur J Pharmacol . 2014 Jan 15:723:167-74.

药效学
约56%的患者在治疗第4天达到去势水平的睾酮浓度（<50 ng/dL），97%的患者在48周的治疗期间维持该水平。瑞卢戈利需要每日口服一次以维持所需的睾酮浓度。雄激素剥夺疗法可能会延长QTc间期，因此对于基线QTc间期延长风险较高的患者，例如电解质紊乱、充血性心力衰竭或正在服用其他已知可延长QTc间期的药物的患者，应谨慎使用。根据其作用机制和动物研究数据，如果对孕妇使用瑞卢戈利克斯（relugolix），可能会对胎儿造成伤害——应建议有女性伴侣的男性患者在整个治疗期间以及停止治疗后 2 周内采取有效的避孕措施，以防止意外的胎儿暴露。

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瑞卢戈利克斯 (TAK-385) 是一种研究性新型非肽类口服活性促性腺激素释放激素 (GnRH) 拮抗剂。它是一种噻吩并嘧啶衍生物。[1]
它基于先前对TAK-013（舒福戈利）的研究，但对人和猴的GnRH受体具有更高的亲和力。[1]
由于其对大鼠GnRH受体的亲和力较低，因此需要使用人GnRH受体敲入小鼠进行体内评估。[1]
该研究表明，每日口服relugolix可以有效、持续且可逆地抑制该人源化模型中的下丘脑-垂体-性腺轴。[1]
relugolix被认为是一种潜在的激素依赖性疾病（如子宫内膜异位症、子宫肌瘤、前列腺癌和绝经前乳腺癌）的治疗干预手段。[1]
relugolix对垂体GnRH受体mRNA的下调作用可能是其除竞争性受体抑制作用之外的其他药理作用机制。敌对。

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化合物命名：TAK-385 也称为 relugolix。它是一种噻吩并嘧啶衍生物。 [2]
相对于肽类拮抗剂的优势：与需要皮下注射的肽类 GnRH 拮抗剂不同，TAK-385 具有口服活性。这为患者提供了便利，并在出现不良反应时可快速停药。 [2]
有效剂量的性别差异：在雌性敲入小鼠中，完全抑制性腺功能所需的 TAK-385 剂量是雄性小鼠的 10 倍。作者认为，这可能是由于 HPG 轴调节的性别差异，而非药代动力学差异。 [2]
受体下调：TAK-385 在有效抑制生殖功能的剂量下下调垂体中 GnRH 受体的 mRNA 表达，这除了竞争性拮抗作用外，可能还有助于其药理作用。 [2]
睾丸重量的可逆性：虽然前列腺重量和睾酮水平快速恢复（14 天内），但在停药后 28 天的观察期内，睾丸重量没有恢复。这可能是由于生精上皮再生需要时间，而生精上皮占睾丸重量的大部分。 [2]

C29H27F2N7O5S

623.630391359329

623.18

C, 55.85; H, 4.36; F, 6.09; N, 15.72; O, 12.83; S, 5.14

737789-87-6

Relugolix-d6

10348973

White to off-white solid powder

3.966

169.36

2

11

9

44

1010

0

O=C(NOC)NC1=CC=C(C(S2)=C(CN(C)C)C(C(N3C4=NN=C(OC)C=C4)=O)=C2N(CC5=C(F)C=CC=C5F)C3=O)C=C1

AOMXMOCNKJTRQP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H27F2N7O5S/c1-36(2)14-19-24-26(39)38(22-12-13-23(42-3)34-33-22)29(41)37(15-18-20(30)6-5-7-21(18)31)27(24)44-25(19)16-8-10-17(11-9-16)32-28(40)35-43-4/h5-13H,14-15H2,1-4H3,(H2,32,35,40)

1-[4-[1-[(2,6-difluorophenyl)methyl]-5-[(dimethylamino)methyl]-3-(6-methoxypyridazin-3-yl)-2,4-dioxothieno[2,3-d]pyrimidin-6-yl]phenyl]-3-methoxyurea

TAK 385; TAK385; TAK-385; trade names: Orgovyx; Relumina

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 61~100 mg/mL (97.8~160.4 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 8.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。