| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TLR4; TNF-R (IC50 = 1.9 nM); IL-6 (IC50 = 1.3 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
Resatorvid 的 IC50 值范围为 11 至 33 nM，可抑制 LPS 刺激的人外周血单核细胞 (PBMC) 产生的 NO、TNF-α 和 IL-6 [1]。在剂量为 100 nM 时，Resatorvid（1-100 nM；4 小时）会磷酸化并破坏 IκBβ。 Resatorvid（1-100 nM；15 分钟；PBMC 细胞）强烈抑制 LPS 诱导的细胞外信号调节模型 1/2 (Erk1/2)、p38 和 JNK /SAPK [1]。
促炎介质如细胞因子和NO在各种炎性疾病中起关键作用。为了成功地对抗炎症性疾病，促炎介质的产生将是一个关键的过程。本研究研究了新型小分子细胞因子产生抑制剂(6R)-6-[N-（2-氯-4-氟苯基）磺胺基]环己基-1-烯-1-羧酸乙酯（TAK-242）的体外作用及其机制。在RAW264.7细胞和小鼠腹膜巨噬细胞中，TAK-242抑制脂多糖（LPS）诱导的NO、肿瘤坏死因子- α (tnf - α)和白细胞介素-6的产生，50%的抑制浓度（IC50）为1.1 ~ 11 nM。TAK-242还能抑制lps刺激的人外周血单个核细胞（PBMCs）产生这些细胞因子，IC50值为11 ~ 33 nM。此外，lps对人pbmc、单核细胞和巨噬细胞诱导的IL-6和IL-12产生的抑制作用相似。TAK-242对LPS和干扰素诱导的RAW264.7细胞IL-6和tnf - α mRNA表达有抑制作用。LPS诱导的丝裂原活化蛋白激酶磷酸化也呈浓度依赖性被抑制。然而，TAK-242不拮抗LPS与细胞的结合。值得注意的是，TAK-242抑制toll样受体（TLR） 4配体诱导的细胞因子产生，而不抑制TLR2、-3和-9配体诱导的细胞因子产生。此外，il -1 β诱导的人PBMCs中IL-8的产生不受TAK-242的显著影响。这些数据表明，TAK-242通过选择性抑制TLR4细胞内信号传导抑制多种细胞因子的产生。最后，TAK-242是一种新型的小分子TLR4信号抑制剂，可能成为治疗炎症性疾病的有前景的药物，其发病机制与TLR4有关。[1] 从SAR研究结果来看，含1位酯基和6位取代苯基磺胺基的环己烯衍生物具有抑制活性。从改变环己烯环大小的结果来看，活性受到分子形状的影响，并且靶分子上的结合位点可能至少存在两个口袋（酯部分和苯基部分），因为上面提到的每个片段似乎都被严格识别。在所有化合物中，5n/TAK -242，具有环己烯环、乙酯基和2-氯-4-氟苯基磺甲酰基的组合，表现出最有效的抑制NO产生的活性，并对(R)-(+)-5n和(S)-(−)-5n两个对映体的活性进行了评估，以研究抑制的立体化学要求。结果表明，(R)-(+)-5n （IC50 = 1.8 nM）比(S)-(−)-5n （IC50 = 640 nM）的活性高350倍。此外，我们还研究了5n及其对映体对lps刺激的RAW264.7细胞产生细胞因子的抑制作用。(R)-(+)-5n强烈抑制TNF-α和IL-6的产生，IC50值分别为1.9 nM和1.3 nM（表4），比先导化合物5a强120倍。［2］ |
| 体内研究 (In Vivo) |
resporvid（TAK-242；3mg/kg；腹膜内注射；持续2天；雄性C57BL/6小鼠）均显着恢复了LPS引起的体重减轻、TA肌肉损失和肌肉力量损失。 TAK-242 增加间隙空间并逆转 LPS 产生的肌纤维的收缩。在给予 LPS 的小鼠中，TAK-242 抑制分解代谢细胞因子释放到系统中以及骨骼肌的蛋白水解作用 [3]。
采用小鼠内毒素休克模型检测体外实验中最高抑制剂(R)-(+)-5n/TAK-242的体内药效。在致死性LPS攻击前1小时静脉给药，(R)-(+)-5n以剂量依赖的方式拯救小鼠（图3）。在3mg /kg的剂量下，所有小鼠都存活，(R)-(+)-5n保护小鼠免于致死的最小有效剂量（ED50）值为0.3 mg/kg。LPS刺激后血清中TNF-α、IL-6、IL-1β和NO水平显著升高，(R)-(+)-5n （0.1 ~ 3 mg/kg）抑制LPS诱导的所有细胞因子和NO的产生并呈剂量依赖性。在0.1 mg/kg剂量下，(R)-(+)-5n显著抑制所有细胞因子和NO的产生（图4）。[2] 在这里，研究人员测试了TAK-242，一种toll样受体4 （TLR4）特异性信号抑制剂，对内毒素诱导的体外肌管萎缩和体内肌肉萎缩的影响。LPS处理小鼠C2C12肌管引起炎症反应（核因子-κB活性、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α表达增加），激活泛素-蛋白酶体和自噬蛋白水解途径（atroggin -1/MAFbx、MuRF1和LC-II表达增加），导致肌管萎缩。在小鼠中，LPS注射增加了骨骼肌中相同的炎症和蛋白水解途径，并诱导萎缩，导致握力降低。值得注意的是，在体外和体内，用TAK-242预处理细胞或小鼠可以减少或逆转LPS的所有有害影响。总之，我们的研究结果表明，TLR4信号的药理抑制可能是内毒素血症诱导的肌肉萎缩的一种新的治疗干预措施。[3] |
| 酶活实验 |
LPS诱导的丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化也以浓度依赖的方式受到抑制。然而，TAK-242不拮抗LPS与细胞的结合。值得注意的是，TAK-242抑制了Toll样受体（TLR）4配体诱导的细胞因子产生，而不是TLR2、-3和-9配体诱导的。此外，TAK-242对IL-1β诱导的人PBMC产生IL-8没有显著影响。这些数据表明，TAK-242通过选择性抑制TLR4细胞内信号传导来抑制多种细胞因子的产生。最后，TAK-242是一种新型的小分子TLR4信号抑制剂，可能是一种很有前途的炎症性疾病的治疗剂，其发病机制涉及TLR4[1]。
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| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： PBMC 细胞 测试浓度： 1 nM、10 nM、100 nM 孵育时间：15分钟 实验结果：LPS诱导的丝裂原激活蛋白激酶的磷酸化也以浓度依赖性方式被抑制。 NO生成抑制活性测定。[2] RAW264.7细胞以1 × 105个/孔的比例在96孔培养板中孵育过夜。去除细胞培养上清后，在37℃、5% CO2的湿化气氛中，用10 ng/mL LPS和不同浓度的测试化合物刺激细胞20 h。刺激介质为无酚红RPMI1640，含1%热灭活FBS和10 μg/mL卡那霉素。将试验化合物以10 mmol/L溶解于DMF中，用RPMI-1640培养基稀释至适当浓度，加入培养液中。 根据使用2,3-二氨基萘的荧光法，通过测量一氧化氮的稳定代谢物亚硝酸盐的量来估计一氧化氮的产生。简单地说，将25 μL的20 μg/mL DAN加入到50 μL的培养上清中，室温孵育10 min。加入25 μL的0.5 N NaOH后，在460 nm处（激发波长：355nm）测量荧光。 抑制细胞因子产生的活性测定。[2] 根据制造商的说明，使用特异性酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中TNF-α和IL-6的浓度。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 雄性 C57BL/6 小鼠（8-12 周龄）经脂多糖 (LPS) 处理[3]
剂量： 3 mg/kg 给药途径： 腹腔注射 (ip)；持续 2 天 实验结果： 小鼠预处理可减轻或逆转 LPS 的所有有害作用。 内毒素休克模型。[2] 小鼠腹腔注射致死剂量为 7 mg/kg 的 LPS。记录小鼠在 LPS 攻击后 7 天内的存活情况。化合物 (R)-(+)-5n / TAK-242溶解于 10% (w/v) 葡萄糖醛酸-β-环糊精钠盐溶液中，并在 LPS 注射前 1 小时静脉注射。 体内细胞因子和 NO 生成的评估。[2] 在指定时间点采集血液，并使其在室温下凝固。通过离心分离血清，并储存于 -80 °C 直至分析。根据制造商的说明，使用特异性 ELISA 法测定血清中 TNF-α、IL-6 和 IL-1β 的水平。 使用荧光法测定血清中亚硝酸盐和硝酸盐的水平，它们是 NO 代谢的稳定终产物。简而言之，取10 μL样品与20 μL β-NADPH（0.2 mmol/L）和20 μL曲霉硝酸还原酶（0.25 U/mL）混合，室温孵育20分钟，使硝酸盐转化为亚硝酸盐。向上述样品中加入25 μL溶于2 mol/L HCl的DAN（25 μg/mL），室温孵育10分钟。加入25 μL NaOH（0.5 mol/L），测定荧光强度（激发波长：355 nm，发射波长：460 nm）。亚硝酸盐浓度根据亚硝酸钠标准曲线计算得出。 [2] 8-12周龄的雄性C57BL/6小鼠在实验前于安静、湿度适宜的房间内隔离至少1周，光照/黑暗周期为12小时（上午7点/下午7点）。小鼠可自由摄取标准啮齿动物饲料和水。每24小时测量一次食物摄入量和体重，持续48小时。肌肉分解代谢的诱导方法为腹腔注射1 mg/kg LPS，对照组注射等体积的溶剂（PBS），具体方法如前所述19。除非另有说明，小鼠在注射LPS前1小时腹腔注射TAK-242（3 mg/kg）或溶剂（含0.9% DMSO的PBS）进行预处理。LPS和TAK-242的剂量和给药时间均参考了多篇相关文献。两天后，将小鼠安乐死，收集胫前肌，立即用液氮冷冻，并在−80°C下保存直至使用。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
Resatorvid 是一种用于治疗严重脓毒症的在研化合物。
药物适应症 已研究用于治疗脓毒症和败血症。 作用机制 TAK-242 通过抑制 Toll 样受体 4 (TLR4) 的信号转导来抑制炎症介质（如细胞因子）的产生。TLR4 是识别细菌成分的受体之一。 在本研究中，通过筛选新的小分子 NO 和炎症细胞因子抑制剂，发现了先导化合物 5a。通过在 Et3N 存在下，将磺酰氯与多种苯胺偶联，并伴随双键迁移，设计并合成了带有 6-(取代苯基)磺酰基和 1-(烷基酯)基团的环己烯衍生物 I。对苯环、乙酯部分和环己烯环上的取代基进行化学修饰，鉴定出一系列新型环己烯衍生物，这些衍生物对LPS刺激的小鼠巨噬细胞产生NO具有显著的抑制作用。在所有制备的化合物中，(R)-(+)-5n对TNF-α、IL-6等炎症细胞因子以及NO的产生表现出最强的抑制作用。其IC50值比先导化合物5a高约100倍。此外，(R)-(+)-5n在小鼠内毒素休克模型中显示出显著的体内疗效。保护小鼠免于死亡的ED50值为0.3 mg/kg，在3 mg/kg剂量下，所有小鼠均存活。此外，(R)-(+)-5n抑制了血清中TNF-α、IL-6、IL-1β和NO等炎症介质水平的升高。化合物(R)-(+)-5n（TAK-242）被选为临床研究候选药物，是一种有前景的新型脓毒症治疗药物。尽管(R)-(+)-5n的分子靶点尚未明确，但推测(R)-(+)-5n选择性抑制Toll样受体(TLR)4依赖性信号通路。 [2] 我们利用体外培养的C2C12肌管和体内内毒素血症小鼠模型，发现TLR4介导信号通路的选择性抑制剂TAK-242能够阻断全身和骨骼肌的炎症反应，抑制多种蛋白水解途径的激活，并改善LPS诱导的骨骼肌萎缩。这些发现可能有助于开发新的治疗策略，以减轻内毒素血症引起的肌肉萎缩。[3] |
| 分子式 |
C15H17CLFNO4S
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|---|---|
| 分子量 |
361.82
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| 精确质量 |
361.055
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| 元素分析 |
C, 49.80; H, 4.74; Cl, 9.80; F, 5.25; N, 3.87; O, 17.69; S, 8.86
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| CAS号 |
243984-11-4
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| PubChem CID |
11703255
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| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
462.0±55.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
68-69ºC
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| 闪点 |
233.2±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.574
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| LogP |
3.58
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| tPSA |
80.85
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
560
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1(C(OCC)=O)=CCCC[C@H]1S(NC1=C(Cl)C=C(F)C=C1)(=O)=O
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| InChi Key |
LEEIJTHMHDMWLJ-CQSZACIVSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H17ClFNO4S/c1-2-22-15(19)11-5-3-4-6-14(11)23(20,21)18-13-8-7-10(17)9-12(13)16/h5,7-9,14,18H,2-4,6H2,1H3/t14-/m1/s1
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| 化学名 |
ethyl (R)-6-(N-(2-chloro-4-fluorophenyl)sulfamoyl)cyclohex-1-ene-1-carboxylate
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| 别名 |
TAK242; TAK 242; Resatorvid [INN]; CLI-095; CHEMBL225157; H2MZ648C31; TAK-242
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~276.38 mM)
Ethanol : ~20 mg/mL (~55.28 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5.5 mg/mL (15.20 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 5.5 mg/mL (15.20 mM) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 5 mg/mL (13.82 mM) in 10% DMSO + 90% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (7.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 5 中的溶解度: 2.75 mg/mL (7.60 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将100μL 27.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 6 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (7.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 配方 7 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.91 mM) in 5% DMSO + 95% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 8 中的溶解度: 0.5 mg/mL (1.38 mM) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7638 mL | 13.8190 mL | 27.6381 mL | |
| 5 mM | 0.5528 mL | 2.7638 mL | 5.5276 mL | |
| 10 mM | 0.2764 mL | 1.3819 mL | 2.7638 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
TLR7/8 agonist 13
L07-2
GNE-5152
3A-MPLA ammonium
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COA
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