Rhoifolin   中文名称: 野漆树苷

insulin receptor-β; GLUT4; NF-κB; MAPK
Rhoifolin exhibits toxic activity against various E. coli cell lines, which in MRC-5, HCT, HepG2, HeLa, and Hep2 are 77.0 nM, 60.1 nM, 39.0 nM, 10.7 nM, and 10.1 nM, respectively [3].

Rhoifolin 对多种大肠杆菌细胞系表现出毒性活性，在 MRC-5、HCT、HepG2、HeLa 和 Hep2 中分别为 77.0 nM、60.1 nM、39.0 nM、10.7 nM 和 10.1 nM [3]。

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在分化的3T3-L1脂肪细胞中，rhoifolin表现出胰岛素样活性。它在0.001–5 µM浓度范围内剂量依赖性地增强脂联素分泌。最大刺激反应出现在0.5 µM，使脂联素水平较对照组增加1.7倍，此反应与10 nM胰岛素的效果相似。1 µM和5 µM浓度显示出与0.5 µM相似的效力。
Rhoifolin还能剂量依赖性（0.5–5 µM）地增强胰岛素受体β亚基的酪氨酸磷酸化水平。在0.5 µM、1 µM和5 µM浓度下，分别使pIR-β水平提高1.1、1.6和3.9倍。5 µM时的反应与10 nM胰岛素相似。
此外，rhoifolin（在0.5 µM、1 µM和5 µM浓度下）能促进葡萄糖转运蛋白GLUT4从细胞内区间向质膜转运，效果与胰岛素类似。0.01 µM和0.1 µM浓度未引起显著的GLUT4转运。[1]
Rhoifolin能强烈抑制RANKL刺激的骨髓巨噬细胞向破骨细胞分化，且呈剂量依赖性（2.5, 5, 10, 20 µM）。它显著减少了抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞的数量和大小，在20 µM时效果最显著。
Rhoifolin（5 µM）在分化早期（第1-3天）存在时，对抑制破骨细胞形成最有效。它还减少了破骨细胞融合，降低了破骨细胞数量和每个破骨细胞的平均核数。
在功能实验中，rhoifolin以剂量依赖性方式（2.5, 5, 10 µM）减弱了破骨细胞在羟基磷灰石涂层板上的骨吸收能力，与对照组相比，2.5 µM和5 µM浓度下分别将吸收面积减少至27%和3.8%。
Rhoifolin下调了RANKL刺激的BMMs中破骨细胞特异性基因的mRNA表达，包括Acp5（编码TRAcP）、Calcr（降钙素受体）、Ctsk（组织蛋白酶K）和Atp6v0d2（V-ATP酶亚基）。
在作用机制上，rhoifolin减弱了RANKL诱导的NF-κB通路激活。它抑制了IκBα的降解和NF-κB p65的磷酸化，并通过免疫荧光显示阻碍了p65的核转位。
Rhoifolin（5 µM）还抑制了RANKL刺激后早期时间点（15, 30分钟）MAPK通路中ERK和JNK的磷酸化，但对p38磷酸化影响不大。
此外，rhoifolin抑制了NFATc1的转录活性，并下调了RANKL刺激第3天和第5天关键破骨细胞生成转录因子NFATc1和c-Fos的蛋白表达。[2]

扬声器的辐射会引起全身伤害和心脏生化损伤。 Rhoifolin（12、24、30、36 和 40 mg/kg；口服，持续 7 d）对这些效应具有辐射防护作用 [4]。

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在小鼠钛颗粒刺激的颅骨骨溶解模型中，每日腹腔注射2.5 mg/kg（低剂量）和5 mg/kg（高剂量）的rhoifolin，持续14天，显著减轻了钛颗粒诱导的骨侵蚀。
Micro-CT分析显示，与载体对照组（仅钛颗粒）相比，rhoifolin治疗增加了骨矿物质密度和骨体积/总体积比，同时降低了孔隙率和孔隙数量。高剂量组效果更显著。
组织学分析（H&E染色）证实rhoifolin治疗减少了骨破坏。颅骨切片的TRAcP染色显示，与载体组相比，rhoifolin治疗组中TRAcP阳性破骨细胞数量显著减少。[2]

细胞活力（MTT实验）： 将分化的3T3-L1细胞接种于24孔板中。细胞达到90%融合度后，用不同浓度的rhoifolin处理24小时。然后通过添加MTT试剂（终浓度0.5 mg/mL）并测量生成的甲臜产物来确定细胞活力。该实验显示，与未处理的对照组相比，rhoifolin处理后的细胞活力没有显著变化。[1]
乳酸脱氢酶（LDH）释放实验： 用rhoifolin处理分化的3T3-L1细胞24小时。然后收集培养上清液，按照制造商的说明使用商业细胞毒性检测试剂盒测量LDH活性。细胞毒性计算为相对于对照组（裂解细胞的最大LDH释放）的百分比。未观察到rhoifolin处理后LDH释放增加。[1]
脂联素分泌和pIR-β的蛋白质印迹分析： 将分化的3T3-L1脂肪细胞血清饥饿处理3小时，然后与rhoifolin（0–5 µM）孵育24小时（用于检测脂联素）或20分钟（用于检测pIR-β）。细胞在含有蛋白酶抑制剂的冰冷裂解缓冲液中裂解。对于分泌的脂联素，培养液通过冷冻干燥浓缩。蛋白质样品通过SDS-PAGE分离，转印至PVDF膜，用脱脂奶粉封闭，并与抗脂联素或抗磷酸化胰岛素受体β的一抗在4°C孵育过夜。洗涤后，膜与HRP标记的二抗孵育，并使用增强化学发光系统检测信号。使用图像分析软件对条带强度进行定量。[1]
GLUT4转运实验（免疫荧光）： 3T3-L1脂肪细胞在聚-L-赖氨酸包被的盖玻片上生长。血清饥饿后，用rhoifolin或胰岛素处理细胞20分钟。然后用多聚甲醛固定细胞，用马血清封闭，并在4°C与抗GLUT4和质膜标记物（Na⁺-K⁺ ATP酶）的一抗孵育过夜。洗涤后，细胞与荧光染料标记的二抗（例如，GLUT4用Alexa Fluor 488，Na⁺-K⁺ ATP酶用Cy3）孵育。细胞核用DAPI染色。使用荧光显微镜观察并拍摄GLUT4的细胞定位。GLUT4信号从核周区域向细胞周边/质膜的移动表明发生了转运。[1]
细胞活力（MTS）实验： 将骨髓巨噬细胞接种于96孔板中，用一系列浓度（0至640 µM）的rhoifolin处理2天。通过添加MTS溶液并在490 nm波长下测量吸光度来评估细胞活力。浓度高达320 µM时未观察到细胞毒性。[2]
破骨细胞分化及TRAcP染色： 接种BMMs并用M-CSF（50 ng/ml）和RANKL（100 ng/ml）刺激以诱导破骨细胞分化。从第2天开始添加不同浓度（0, 2.5, 5, 10, 20 µM）的rhoifolin。培养5-7天后，固定细胞并进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色。将具有三个或更多细胞核的TRAcP阳性细胞计为破骨细胞。[2]
阶段特异性处理实验： 为确定有效阶段，BMMs在不同时间窗口用rhoifolin（5 µM）处理：早期（第1-3天）、中期（第3-5天）、晚期（第5-7天）或整个时期（第1-7天）。培养期结束时进行TRAcP染色。[2]
骨吸收陷窝实验： 用M-CSF和RANKL从BMMs生成成熟破骨细胞，然后将其消化并等量重铺于羟基磷灰石涂层的96孔板上。重铺的破骨细胞在有或无rhoifolin（0, 2.5, 5, 10 µM）的条件下培养2天。随后移除细胞，使用图像分析软件对羟基磷灰石表面的吸收面积进行可视化处理和定量。[2]
F-肌动蛋白环染色： 将BMMs培养在盖玻片上，在存在或不存在rhoifolin（0, 2.5, 5, 10 µM）的情况下用RANKL（100 ng/ml）刺激。破骨细胞形成后，固定、透化细胞，用罗丹明标记的鬼笔环肽染色以显示F-肌动蛋白环，用DAPI染色细胞核。使用荧光显微镜成像并分析破骨细胞数量和核计数。[2]
实时定量PCR： 用RANKL和不同浓度rhoifolin处理BMMs。使用TRIzol试剂提取总RNA，并合成cDNA。使用针对破骨细胞标记基因（Acp5, Calcr, Ctsk, Atp6v0d2）和內参基因β-actin的特异性引物，基于SYBR Green检测系统进行qRT-PCR。[2]
荧光素酶报告基因检测： 将稳定转染了NF-κB响应性或NFATc1响应性荧光素酶构建体的RAW264.7细胞接种于48孔板中。细胞用rhoifolin预处理1小时，然后用RANKL（100 ng/ml）刺激6小时（NF-κB检测）或24小时（NFATc1检测）。使用商业荧光素酶检测系统测量荧光素酶活性。[2]
蛋白质印迹分析： BMMs用或不用于rhoifolin（5 µM）预处理1小时，然后用RANKL（100 ng/ml）刺激不同时间点（信号蛋白：0, 15, 30, 60分钟；转录因子：0, 1, 3, 5天）。裂解细胞，蛋白质通过SDS-PAGE分离，转印至PVDF膜，并用针对信号分子（p-IκBα, IκBα, p-p65, p65, p-ERK, ERK, p-JNK, JNK, p-p38, p38）或转录因子（NFATc1, c-Fos）的特异性一抗进行孵育。与HRP标记的二抗孵育后，通过增强化学发光法检测蛋白质。[2]
p65免疫荧光染色： 将BMMs接种在盖玻片上，血清饥饿处理后，用或不用rhoifolin预处理1小时，然后用或不用RANKL刺激30分钟。固定、透化、封闭细胞，与抗p65抗体在4°C孵育过夜，然后与荧光二抗孵育。用DAPI复染细胞核。使用荧光显微镜观察p65的亚细胞定位。[2]

动物/疾病模型：瑞士白化小鼠（10 Gy辐射可诱发某些血液学和心脏生化异常）[4]
剂量：12、24、30、36和40 mg/kg
给药途径：口服，连续7天
实验结果：可降低以丙二醛衡量的脂质过氧化物水平，减轻辐射毒性作用，改善血浆和组织中一氧化氮、乳酸脱氢酶、肌酸激酶和血浆脂质谱的变化。

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在8-10周龄雄性C57/BL6小鼠中建立了钛颗粒刺激的骨溶解模型。小鼠麻醉后，在颅骨中央做一个1 cm的切口。将 30 mg 钛颗粒悬浮于 100 µl PBS 中，植入颅骨表面，假手术组仅接受 PBS 注射。
第二天开始治疗。小鼠分为四组：假手术组（PBS）、载体组（钛颗粒 + PBS）、低剂量罗福林组（钛颗粒 + 2.5 mg/kg 罗福林）和高剂量罗福林组（钛颗粒 + 5 mg/kg 罗福林）。连续14天，每天通过腹腔注射给予小鼠罗伊福林（Rhoifolin）或PBS。
第14天，处死小鼠，取出颅骨，用4%多聚甲醛固定，进行微型CT扫描和后续组织学处理（脱钙、石蜡包埋、切片进行H&E染色和TRAcP染色）。[2]

在分化的 3T3-L1 脂肪细胞中，浓度高达 5 µM 的 rhoifolin 处理 24 小时后，MTT 细胞活力检测和 LDH 释放检测均未显示任何显著的细胞毒性。[1]
在颅骨骨溶解模型中，用 rhoifolin（2.5 和 5 mg/kg）处理小鼠 14 天后，对肝脏和肾脏组织进行病理学检查，与假手术组和溶剂对照组相比，H&E 染色显示未见毒性迹象或组织学异常。[2]

[1]. Insulin-Mimetic Action of Rhoifolin and Cosmosiin Isolated from Citrus grandis (L.) Osbeck Leaves: Enhanced Adiponectin Secretion and Insulin Receptor Phosphorylation in 3T3-L1 Cells. Evid Based Complement Alternat Med. 2011;2011:624375.

[2]. Rhoifolin ameliorates titanium particle-stimulated osteolysis and attenuates osteoclastogenesis via RANKL-induced NF-κB and MAPK pathways. J Cell Physiol. 2019 Aug;234(10):17600-17611.

[3]. Rhoifolin; A Potent Antiproliferative Effect on Cancer Cell Lines. Journal of Pharmaceutical Research International, 2012, 3(1), pp. 46-53.

[4]. Protective Effect of Rhoifolin on Gamma Irradiation Induced Cardiac Dysfunctions in Albino Mice. Feb 15, 2014.

芹菜素 7-O-新橙皮苷是一种芹菜素衍生物，其 7-羟基上连接有 α-(1→2)-L-鼠李糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基部分。它是一种代谢产物。它是一种新橙皮苷、二羟基黄酮和糖基氧基黄酮。它在功能上与芹菜素相关。
据报道，罗伊福林存在于卡氏金合欢（Gonocaryum calleryanum）、日本金合欢（Euchresta japonica）和其他有相关数据的生物体中。

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罗伊福林（芹菜素-7-O-β-新橙皮苷）是一种黄酮糖苷，首次从大柑橘（Citrus grandis，又名红温顿）的叶片中分离得到。叶片富含罗伊福林（1.1% w/w）。
该化合物通过增强脂联素分泌、促进胰岛素受体β亚基酪氨酸磷酸化以及促进脂肪细胞中GLUT4转位，表现出胰岛素样活性。这些作用提示其抗糖尿病特性的潜在机制，可能涉及增强胰岛素信号通路。[1]
罗伊福林是一种黄酮类化合物。本研究表明，罗伊福林可通过靶向抑制过度活跃的破骨细胞，在预防全关节置换术后常见的并发症——假体周围骨溶解和无菌性假体松动方面具有潜在的治疗应用价值。[2]

C₂₇H₃₀O₁₄

578.52

578.163

17306-46-6

17306-46-6

5282150

Light yellow to yellow solid

1.7±0.1 g/cm3

916.5±65.0 °C at 760 mmHg

305.4±27.8 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.726

1.72

228.97

8

14

6

41

939

10

O([C@@]1([H])[C@@]([H])([C@@]([H])([C@]([H])([C@]([H])(C([H])([H])[H])O1)O[H])O[H])O[H])[C@@]1([H])[C@]([H])(OC2=C([H])C(=C3C(C([H])=C(C4C([H])=C([H])C(=C([H])C=4[H])O[H])OC3=C2[H])=O)O[H])O[C@]([H])(C([H])([H])O[H])[C@]([H])([C@]1([H])O[H])O[H]

RPMNUQRUHXIGHK-PYXJVEIZSA-N

InChI=1S/C27H30O14/c1-10-20(32)22(34)24(36)26(37-10)41-25-23(35)21(33)18(9-28)40-27(25)38-13-6-14(30)19-15(31)8-16(39-17(19)7-13)11-2-4-12(29)5-3-11/h2-8,10,18,20-30,32-36H,9H2,1H3/t10-,18+,20-,21+,22+,23-,24+,25+,26-,27+/m0/s1

7-[(2S,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chromen-4-one

NSC-649413; NSC 649413; NSC649413; Rhoifolin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 62.5~100 mg/mL (108.0~172.9 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。