Ritanserin   中文名称: 利坦色林

5-HT₂ Receptor ( IC50 = 0.9 nM ); H₁ Receptor ( IC50 = 35 nM ); D₂ Receptor ( IC50 = 70 nM ); Adrenergic α1 ( IC50 = 97 nM ); Adrenergic α2 ( IC50 = 150 nM )

Ritanserin (R 55667) 是一种高效、相对耦合、长效的 5-HT2 钳耦合抗氧化剂，IC50 为 0.9 nM，对组胺-H1 (IC50，35 nM)，多巴胺-D2 (IC50，70 nM) ，首先素-α1 (IC50，97 nM)，首先素能-α2 受体 (IC50，150 nM) 的活性较低[1]。在体外试验中，利坦色林与血清素-S2（t1/2=160分钟）和组胺-H1位点的解离非常缓慢（t1/2=77分钟），与多巴胺-D2位点的解离速度很快（t1/2=1.1分钟）。从肾上腺素能α1和α2位点解离的一半时间为18和26分钟。发现利坦色林对[3H]酮色林结合的抑制是部分非竞争性的，抑制效力随着药物预孵育而增加。由于利坦色林与血清素-S2位点的缓慢解离，药物不能完全被[3H]酮色林置换。相比之下，利坦色兰对[3H]氟哌啶醇与大鼠纹状体多巴胺-D2位点结合的抑制是完全竞争性的，这与药物从后者位点的快速解离是一致的。[1]

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无虹膜症是一种全眼遗传性罕见眼病，与PAX6基因的杂合突变有关，PAX6不能正确产生正常眼睛发育和功能所必需的足够蛋白质。大多数患者患有无虹膜相关的角膜病，这是一种渐进性角膜混浊。这种致盲疾病没有有效的治疗方法。在这里，我们筛选了小化合物，并鉴定出一种血清素2A受体拮抗剂Ritanserin，它可以挽救突变边缘细胞的PAX6单倍体不足、细胞迁移缺陷和PAX6靶基因表达。我们进一步证明，Ritanserin通过选择性灭活MEK/ERK信号通路来激活PAX6的产生。我们的数据强烈表明，通过恢复角膜透明度，重新利用这种治疗分子可以有效预防或治疗现有的失明[2]。

在使用皮下注射Ritanserin /利坦色林的大鼠和豚鼠脑区进行的离体结合试验中，在非常低的剂量下（0.08-0.1 mg/kg时占50%）观察到血清素-S2位点被占据，并且这些位点在很长一段时间内仍被占据（在2.5 mg/kg利坦色兰后48小时内占70%以上）。豚鼠小脑中的组胺-H1受体位点在比产生剂量的额叶皮质血清素-S2位点高25倍的剂量下被占据。在较高剂量下，大鼠纹状体中的多巴胺-D2位点和皮质肾上腺素能α1位点仅略微被占据（小于20%），并且这种作用不是剂量依赖性的。皮下注射160mg/kg剂量时，肾上腺素能α2位点未被占据。使用[3H]spiperone的体内结合试验证实，在低剂量利坦色林和少量纹状体多巴胺-D2位点后，额叶皮质血清素-S2位点被占据。口服利坦色林至40mg/kg剂量的大鼠脑区多巴胺和血清素及其代谢产物水平保持不变。在160mg/kg剂量下，多巴胺和血清素含量似乎略有下降。[1]

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5HT（2A/2C）和5HT（3）受体在认知行为中起着重要作用，特别是在空间学习和记忆中，但关于这些受体在海马体中在认知中的作用的文献仍然存在争议。在本研究中，在Morris Water Maze（MWM）任务的每次训练前20分钟，将5HT（2A/2C）拮抗剂Ritanserin/利坦色林（0,2,4,8微克/0.5微升）和5HT（3）拮抗剂格拉司琼（0.0，0.05，0.25，0.5微克/0.5微克）双侧注射到大鼠海马CA1区。与对照组相比，利坦色林（4微克/0.5微升）显著降低了游泳到平台的逃逸潜伏期和行进距离，但格拉司琼（0.25微克/0.5微克）显著增加了这些参数。这两种药物对非空间视觉辨别任务的逃避潜伏期和行进距离都没有影响。这些结果表明，5HT（2A/2C）和5HT（3）受体在空间学习中的作用不同，利坦色林提高了大鼠在空间辨别任务中的表现，而格拉司琼则损害了它[3]。

筛选[2]
该测定在384孔板型中进行了优化。简而言之，TRE番茄HEK细胞被接种到384孔的黑色平板中，在以10μM的浓度添加化合物24小时后，用聚-d-赖氨酸预涂。重组PAX6蛋白[8μg/ml]用作阳性对照，而DMSO[0.1%]用作阴性对照。24小时后，用Hoechst（核染色）和Calcein AM绿（细胞质染色）对细胞进行染色，并使用InCell2200高含量分析仪进行成像。使用高含量图像分析算法分析图像，计算计算出的细胞区域内tdTomato报告物的强度。对番茄强度大于1.5标准差且毒性小于40%的化合物进行了进一步分析，以确定其半最大有效浓度（EC50）。在20次点击中，基于低毒性和增强PAX6基因表达的高效性，选择了利坦色林进行进一步验证。

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qRT-PCR分析[2]
细胞用1μM的<强>利坦色林或其DMSO缓冲液（对照）处理24小时进行救援实验，并作为干颗粒收获。然后使用RNEasy Mini试剂盒提取RNA，并使用iScript cDNA合成试剂盒从1μg RNA中合成cDNA。使用2X SYBR Green PCR Master Mix进行三次定量PCR。使用2-ΔΔCt法计算每个基因的表达。结果以倍数变化的形式呈现，该变化标准化为B2M管家基因，并与对照（用蛋白质缓冲液处理或未处理）T-LSCs相关。Roux等人列出了所使用的特异性引物序列。

Microinjection procedure [3]
Drugs and vehicles were administered intrahippocampally through guide cannulas (21-gauge) using injection needles (27-gauge) connected by polyethylene tubing to 5.0 μl Hamilton microsyringe. The injection needle was inserted 0.5 mm beyond the tip of the cannula and 0.5 μl vehicle (saline or Dimethyl Sulfoxide, DMSO) or different doses of drugs (Ritanserin or granisetron) were injected during 3–4 min. Ritanserin, 6-[2-[4-[bis(4-fluorophenyl)methylene]-1-piperidinyl]ethyl]-7-methyl-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidinin-5-one, (RBI)was dissolved in DMSO and granisetron hydrochloride (kytril), endo-N-(9-methyl-9-azabiocyclo [3.3.1]non-3-yl)-1-methyl-1H-indazol-3-carboxamide hydrochloride was dissolved in saline. All injections were done 20 min before training session each day.

[1]. Receptor-binding properties in vitro and in vivo of ritanserin: A very potent and long acting serotonin-S2 antagonist. Mol Pharmacol. 1985 Jun;27(6):600-11.

[2]. Ritanserin, a potent serotonin 2A receptor antagonist, represses MEK/ERK signalling pathway to restore PAX6 production and function in aniridia-like cellular model. Biochem Biophys Res Commun. 2021 Dec 10:582:100-104.

[3]. The effect of intrahippocampal injections of ritanserin (5HT2A/2C antagonist) and granisetron (5HT3 antagonist) on learning as assessed in the spatial version of the water maze. Behav Brain Res. 2005 Feb 28;157(2):205-10.

Ritanserin is a thiazolopyrimidine that is 5H-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one which is substituted at position 7 by a methyl group and at position 6 by a 2-{4-[bis(4-fluorophenyl)methylidene]piperidin-1-yl}ethyl group. A potent and long-acting seratonin (5-hydroxytryptamine, 5-HT) antagonist of the subtype 5-HT2 (Ki = 0.39 nM), it is used in the treatment of a variety of disorders including anxiety, depression and schizophrenia. It has little sedative action. It has a role as a dopaminergic antagonist, a serotonergic antagonist, an antipsychotic agent, an anxiolytic drug, an antidepressant and an EC 3.4.21.26 (prolyl oligopeptidase) inhibitor. It is an organofluorine compound, a member of piperidines and a thiazolopyrimidine.
Ritanserin has been used in trials studying the treatment of Cocaine-Related Disorders.
A selective and potent serotonin-2 antagonist that is effective in the treatment of a variety of syndromes related to anxiety and depression. The drug also improves the subjective quality of sleep and decreases portal pressure.

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This is the first report indicating that 5HT3 antagonism produces a deficit in cognitive processes. However, it should be considered that the precise mechanism(s) through which granisetron causes impairment in spatial learning is not clear for us. In conclusion, our results show that blockade of hippocampal 5HT2A/2C receptors by ritanserin improves but hippocampal 5HT3 receptors blockade by granisetron in same region (CA1) impairs learning in spatial version of Morris water maze task. In accordance with several previous studies in which 5HT system has been manipulated, these findings suggest that various 5HT receptor subtypes implicate in learning and memory differently, and indicate that 5HT2A/2C and 5HT3 receptors are importantly involved in spatial learning.[3]

C27H25F2N3OS

477.57

477.169

C, 67.91; H, 5.28; F, 7.96; N, 8.80; O, 3.35; S, 6.71

87051-43-2

93076-39-2 (tartrate); 87051-43-2

5074

White to yellow solid powder

1.3g/cm3

618.7ºC at 760 mmHg

328ºC

1.646

5.42

65.85

0

6

5

34

877

0

O=C1N2C(SC=C2)=NC(C)=C1CCN1CC/C(=C(\C2C=CC(F)=CC=2)/C2C=CC(F)=CC=2)/CC1

JUQLTPCYUFPYKE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H25F2N3OS/c1-18-24(26(33)32-16-17-34-27(32)30-18)12-15-31-13-10-21(11-14-31)25(19-2-6-22(28)7-3-19)20-4-8-23(29)9-5-20/h2-9,16-17H,10-15H2,1H3

6-[2-[4-[bis(4-fluorophenyl)methylidene]piperidin-1-yl]ethyl]-7-methyl-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one

Ritanserin; R55667; R-55667; ritanserin; 87051-43-2; Tiserton; Ritanserina; Ritanserine; Ritanserinum; R-55,667; Ritanserine [French]; R 55667

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~25 mg/mL (~52.4 mM)
H2O: < 0.1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。