Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)   中文名称: 罗诺斯他

HDAC6 ( IC50 = 4.7 nM ); HDAC2 ( IC50 = 48 nM ); HDAC3 ( IC50 = 51 nM ); HDAC1 ( IC50 = 58 nM ); HDAC8 ( IC50 = 100 nM ); HDAC7 ( IC50 = 1400 nM ); HDAC5 ( IC50 = 5000 nM ); HDAC4 ( IC50 = 7000 nM )
The target of Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat) is histone deacetylase 6 (HDAC6), with an IC50 value of 5 nM for the enzymatic activity of HDAC6. It shows high selectivity for HDAC6, as evidenced by significantly higher IC50 values against other HDAC isoforms (e.g., HDAC1: >1000 nM, HDAC2: >1000 nM, HDAC3: >1000 nM, HDAC4: >1000 nM, HDAC5: >1000 nM, HDAC7: >1000 nM, HDAC8: >1000 nM, HDAC9: >1000 nM, HDAC10: >1000 nM, HDAC11: >1000 nM) [1]

体外活性：ACY-1215 是异羟肟酸衍生物。 ACY-1215 对 HDAC1、HDAC2 和 HDAC3（I 类 HDAC）的活性分别低 12、10 和 11 倍。 ACY-1215 对 HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC9、HDAC11、Sirtuin1 和 Sirtuin2 具有最小的活性 (IC50 > 1μM)，对 HDAC8 有轻微的活性 (IC50 = 0.1μM)。 ACY-1215 对 T 细胞毒性的 IC50 值为 2.5μM。 ACY-1215 克服了 BM 环境中 BMSC 和细胞因子赋予的肿瘤细胞生长和存活。 ACY-1215 与硼替佐米联合诱导协同抗 MM 活性。 ACY-1215 在非常低的剂量下诱导 α-微管蛋白的有效乙酰化，并仅在较高剂量下触发组蛋白 H3 和组蛋白 H4 上的赖氨酸乙酰化，证实了其对 HDAC6 活性的特异性抑制作用。激酶测定：将 ACY-1215 溶解并随后在测定缓冲液 [50 mM HEPES、pH 7.4、100 mM KCl、0.001% Tween-20、0.05% BSA 和 20 μM 三(2-羧乙基)膦] 中稀释至 6-折叠最终浓度。 HDAC 酶在测定缓冲液中稀释至最终浓度的 1.5 倍，并在添加底物之前与 ACY-1215 预孵育 10 分钟。用于每种酶的 FTS（HDAC1、HDAC2、HDAC3 和 HDAC6）或 MAZ-1675（HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC8 和 HDAC9）的量等于通过滴定曲线确定的米氏常数 (Km) 。使用 0.3 μM 测序级胰蛋白酶将 FTS 或 MAZ-1675 在测定缓冲液中稀释至最终浓度的 6 倍。将底物/胰蛋白酶混合物添加到酶/化合物混合物中，并将板摇动 60 秒，然后放入 SpectraMax M5 微量滴定板读数器中。在肽底物中的赖氨酸侧链脱乙酰化后，监测酶促反应在 30 分钟内释放 7-氨基-4-甲氧基-香豆素，并计算反应的线性速率。 HDAC11、sirtuin1 和 Sirtuin2 测定由 Cerep 进行。细胞测定：ACY-1215 在 PHA 刺激或未刺激的 PBMC 中诱导较小的细胞毒性。在纯化的 CD4+ T 细胞中，ACY-1215 会诱导毒性，IC50 值为 2.5 μM。在 MM 细胞系中，ACY-1215 剂量依赖性地降低活力，IC50 值为 2-8 μM，并诱导显着的细胞毒性。在 MM.1S 细胞中，ACY-1215 剂量依赖性地减少粘附 BMSC 的 MM 细胞的 DNA 合成，并抑制 IL-6 和 IGF-1 诱导的生长。

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1. 抗增殖活性：在多发性骨髓瘤（MM）细胞系（包括RPMI-8226、U266、MM.1S、MM.1R、OPM-2和NCI-H929）中，单独使用Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)处理可呈剂量依赖性抑制细胞增殖。不同细胞系的IC50值范围为0.5 μM至5 μM。与PS-341（硼替佐米）联合使用时，产生协同抗增殖效应，大多数细胞系的联合指数（CI）小于1，表明相较于单独使用任一药物，联合用药的抑制活性增强[1]
2. 酶活性及靶点相关活性：Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)可特异性抑制HDAC6酶活性，通过蛋白质印迹分析检测到，这会导致MM细胞中α-微管蛋白（HDAC6的特异性底物）的乙酰化水平升高。这种乙酰化呈剂量依赖性，在浓度≥0.1 μM时显著增加。相反，未检测到组蛋白H3（I类HDAC的底物）的乙酰化水平发生显著变化，证实了该药物对HDAC6的选择性[1]
3. 诱导凋亡：通过膜联蛋白V-FITC/PI染色和流式细胞术检测发现，单独使用Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)处理可诱导MM细胞凋亡。在未处理的对照组中，凋亡细胞百分比约为5%-10%，而用2 μM Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)处理48小时后，凋亡细胞百分比增至20%-40%。与PS-341联合使用时，凋亡效应进一步增强，在相同处理条件下，凋亡细胞百分比可达50%-70%[1]
4. 对分子伴侣介导的自噬（CMA）的影响：Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)处理通过抑制参与CMA调控的HDAC6，破坏MM细胞中的CMA。这种破坏可通过以下现象证明：CMA底物蛋白α-突触核蛋白的积累增加，且通过免疫荧光显微镜观察到，溶酶体相关膜蛋白2A（LAMP2A）与CMA底物的共定位减少[1]

在浆细胞瘤模型和播散性 MM 模型中，ACY-1215 与硼替佐米联合使用比单独使用任何一种药物都更能抑制肿瘤生长并延长生存期，且没有明显的副作用。 ACY-1215 很容易被肿瘤组织吸收。此外，该药物不会在肿瘤组织中蓄积，给药后 24 小时血细胞和肿瘤组织中乙酰化 α-微管蛋白平行下降就证明了这一点。

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1. 在MM异种移植模型中的抗肿瘤疗效：在裸鼠的RPMI-8226人MM异种移植模型中，以50 mg/kg和100 mg/kg的剂量口服给予Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)，每日一次，持续21天。与溶媒对照组相比，50 mg/kg剂量组的肿瘤生长抑制率为30%-40%，100 mg/kg剂量组的肿瘤生长抑制率为60%-70%。当与PS-341（以0.5 mg/kg的剂量静脉注射，每周两次，持续3周）联合使用时，100 mg/kg剂量的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)实现了>90%的肿瘤生长抑制率，部分小鼠出现肿瘤完全消退。在U266 MM异种移植模型中也观察到了类似的协同抗肿瘤效应[1]
2. 在体内的靶点调节作用：通过对异种移植模型肿瘤组织的蛋白质印迹分析发现，用Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)（100 mg/kg口服）处理后，肿瘤裂解物中α-微管蛋白的乙酰化水平显著增加（增加2-3倍），而溶媒对照组无此变化。与PS-341联合使用并未进一步增强α-微管蛋白的乙酰化，但增加了肿瘤组织中半胱天冬酶-3（凋亡标志物）的切割，这与体外观察到的凋亡效应增强一致[1]

ACY-1215 溶解，然后在测定缓冲液（50 mM HEPES、pH 7.4、100 mM KCl、0.001% Tween-20、0.05% BSA 和 20 μM 三（2-羧乙基）膦）中稀释至最终浓度的六倍）。在添加底物之前，将 HDAC 酶与 ACY-1215 预孵育 10 分钟，并在测定缓冲液中将其稀释至最终浓度的 1.5 倍。通过滴定曲线确定的米氏常数 (Km) 相当于每次使用的 FTS（HDAC1、HDAC2、HDAC3 和 HDAC6）或 MAZ-1675（HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC8 和 HDAC9）的量酶。 FTS 或 MAZ-1675 用 0.3μM 测序级胰蛋白酶在测定缓冲液中稀释至最终浓度的六倍。将底物/胰蛋白酶混合物添加到酶/化合物混合物中并摇动 60 秒后，将板放入 SpectraMax M5 微量滴定板读数器中。肽底物的赖氨酸侧链脱乙酰化后，在 30 分钟内观察酶促反应是否释放 7-氨基-4-甲氧基-香豆素。然后计算反应的线性速率。

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1. HDAC6酶活性测定：将重组人HDAC6酶与荧光底物（如Boc-Lys(Ac)-AMC）在含有Tris-HCl（pH 8.0）、NaCl和DTT的反应缓冲液中孵育。将不同浓度（0.1 nM至10 μM）的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)加入反应混合物中，然后在37°C下孵育60分钟。孵育后，加入含有胰蛋白酶的显影液以切割去乙酰化的底物，释放出荧光AMC基团。使用酶标仪在激发波长360 nm和发射波长460 nm处测量荧光强度。通过将酶活性百分比（相对于溶媒对照组）与药物浓度的对数值作图，并将数据拟合到四参数逻辑方程中，计算HDAC6抑制的IC50值[1]
2. 对其他HDAC亚型的选择性测定：使用重组人HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4、HDAC5、HDAC7、HDAC8、HDAC9、HDAC10和HDAC11酶进行类似的酶活性测定。每种HDAC亚型在合适的反应缓冲液中与其各自的荧光底物孵育，并在高达10 μM的浓度下测试Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)。按照上述方法测量荧光强度，并确定每种亚型的IC50值，以评估药物对HDAC6的选择性[1]

分离来自健康供体的具有免疫印迹的外周血单核细胞 (PBMC)，并与增加剂量的 ACY-1215 一起孵育 48 小时，同时存在 2.5 μg/mL 植物血凝素 (PHA)。 DNA 合成是使用氚标记的胸苷摄取来测量的。使用 Rosette Sep 阴性选择试剂盒使用人血分离 CD4+T 细胞。当化合物存在时，CD3/CD28 Dynabeads 刺激细胞 7 天。 AlamarBlue 是一种细胞活力分析工具。使用含有培养基、不同浓度的 ACY-1215、硼替佐米和/或重组 IL-6 (10 ng/mL) 或胰岛素样生长因子-1 (IGF-1; 50 ng/mL) 的 96 孔培养板在 37°C 下培养 MM 细胞（2-4 × 10⁴ 细胞/孔）一整天。然后我们验证是否已掺入氚化胸苷。

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1. 细胞增殖测定（MTT法）：将MM细胞系（RPMI-8226、U266、MM.1S等）以每孔5×10³个细胞的密度接种到96孔板中，过夜贴壁。将不同浓度（0.01 μM至20 μM）的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)单独或与不同浓度（0.001 μM至0.1 μM）的PS-341联合加入孔中。细胞在37°C、5% CO₂环境中孵育72小时。孵育后，向每孔中加入MTT试剂，平板继续孵育4小时。形成的甲臜晶体用DMSO溶解，使用酶标仪在570 nm处测量吸光度。计算相对于未处理对照组的细胞活力百分比，并使用非线性回归分析确定IC50值。使用Chou-Talalay法计算联合指数（CI）以评估协同作用[1]
2. 蛋白质印迹分析（用于蛋白质乙酰化和凋亡标志物检测）：用不同浓度（0.1 μM至5 μM）的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)单独或与不同浓度（0.01 μM至0.1 μM）的PS-341处理MM细胞24小时。收集细胞，用PBS洗涤，然后在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液中裂解。使用BCA蛋白质测定试剂盒确定裂解物中的蛋白质浓度。将等量的蛋白质（20-30 μg）通过SDS-PAGE分离，并转移到PVDF膜上。膜用含5%脱脂牛奶的TBST缓冲液在室温下封闭1小时，然后在4°C下与针对乙酰化α-微管蛋白、组蛋白H3、切割的半胱天冬酶-3或β-肌动蛋白（内参对照）的一抗孵育过夜。用TBST洗涤后，将膜与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗在室温下孵育1小时。使用增强化学发光（ECL）检测系统可视化蛋白质条带，并使用光密度分析软件量化条带强度[1]
3. 凋亡测定（膜联蛋白V-FITC/PI染色法）：用不同浓度（1 μM至4 μM）的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)单独或与不同浓度（0.05 μM至0.1 μM）的PS-341处理MM细胞48小时。收集细胞，用冷PBS洗涤，并重悬于结合缓冲液中。向细胞悬液中加入膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶（PI），然后在黑暗中室温孵育15分钟。使用流式细胞仪分析凋亡细胞百分比（膜联蛋白V阳性/PI阴性为早期凋亡，膜联蛋白V阳性/PI阳性为晚期凋亡）。使用流式细胞术分析软件处理数据以确定凋亡率[1]
4. 免疫荧光显微镜分析（用于CMA检测）：将MM细胞在盖玻片上培养，并用2 μM的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)处理24小时。用4%多聚甲醛固定细胞15分钟，用0.2% Triton X-100透化10分钟，并用含5% BSA的PBS封闭1小时。加入针对α-突触核蛋白（CMA底物）和LAMP2A（CMA溶酶体标志物）的一抗，盖玻片在4°C下孵育过夜。洗涤后，加入Alexa Fluor偶联的二抗，盖玻片在黑暗中室温孵育1小时。用DAPI染色细胞核。将盖玻片封片到载玻片上，使用共聚焦激光扫描显微镜捕获图像。使用图像分析软件分析α-突触核蛋白和LAMP2A的共定位，以评估CMA活性[1]

小鼠：将 5×10⁶ 个 MM.1S 细胞悬浮于 100 μL 无血清 RPMI 1640 培养基中，皮下接种于雄性 SCID 小鼠，以评估 Ricolinostat 的体内抗多发性骨髓瘤 (MM) 活性。对于肿瘤可检测到的小鼠，分别给予腹腔注射 (IP) Ricolinostat 50 mg/kg（溶于 10% DMSO 的 5% 葡萄糖溶液中），每周 5 天，持续 3 周；或每周静脉注射 (IV) PS-341 0.5 mg/kg（溶于 0.9% 生理盐水中），持续 3 周，两种药物的给药方案与单独使用 Ricolinostat 相同。同时，对照组仅接受载体注射。肿瘤体积采用公式 V=0.5(a×b²) 计算，其中 a 为肿瘤的长径，b 为肿瘤的短径。每隔一天使用游标卡尺测量肿瘤的二维尺寸。一旦肿瘤出现溃疡或生长至 2 cm³，小鼠即死亡。从治疗第一天到死亡，评估小鼠的生存率和肿瘤生长情况。1. 人多发性骨髓瘤异种移植模型的建立：将 6-8 周龄的雌性裸鼠麻醉，并将 5×10⁶ 个 RPMI-8226 或 U266 多发性骨髓瘤细胞（悬浮于 0.1 mL PBS 和 Matrigel 以 1:1 比例混合的溶液中）皮下注射到每只小鼠的右侧腹部。肿瘤生长至体积达到约 100-150 mm³ 后开始药物治疗 [1]
2. 单独使用罗西利诺司他 (ACY1215; Ricolinostat) 的药物治疗方案：将已建立肿瘤的小鼠随机分为三组（每组 n=6-8）：载体对照组、低剂量罗西利诺司他 (ACY1215; Ricolinostat) 组 (50 mg/kg) 和高剂量罗西利诺司他 (ACY1215; Ricolinostat) 组 (100 mg/kg)。罗西利诺司他 (ACY1215; Ricolinostat) 溶解于由 10% DMSO、40% PEG300 和 50% PBS 组成的载体中。药物或载体通过灌胃法每日一次给药，连续 21 天。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积，并使用公式：体积 = (长度 × 宽度²)/2 计算肿瘤体积。同时每周两次测量小鼠体重，以监测潜在的毒性[1]。
3. PS-341 联合治疗方案：另一组小鼠分为四组（每组 n=6-8）：载体对照组、单独使用 Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat) 组（100 mg/kg，口服，每日一次，持续 21 天）、单独使用 PS-341 组（0.5 mg/kg，静脉注射，每周两次，持续 3 周）以及联合用药组（100 mg/kg Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat) 口服，每日一次 + 0.5 mg/kg PS-341 静脉注射，每周两次）。PS-341 溶于生理盐水。肿瘤体积和体重的测量方法如上所述。治疗结束后，对部分小鼠实施安乐死，并收集肿瘤组织进行蛋白质印迹分析，以评估靶点调控和细胞凋亡标志物[1]

1. 小鼠口服生物利用度：分别以100 mg/kg的剂量通过灌胃和10 mg/kg的剂量通过静脉注射给予小鼠Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)。在给药后不同时间点（0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时）采集血样。通过离心分离血浆，并使用经验证的LC-MS/MS方法测定药物浓度。口服生物利用度根据口服和静脉给药后血浆浓度-时间曲线下面积（AUC₀₋∞）计算得出。小鼠口服罗西利诺司他（ACY1215；利可利诺司他）的生物利用度约为30%-40%[1]
2. 小鼠血浆药代动力学参数：口服100 mg/kg罗西利诺司他（ACY1215；利可利诺司他）后，血浆峰浓度（Cmax）为2.5-3.5 μM，达峰时间为给药后1-2小时（Tmax）。末端半衰期（t₁/₂）为3-4小时，AUC₀₋∞为15-20 μM·h。静脉注射10 mg/kg后，Cmax为10-12 μM，t₁/₂为2-3小时，AUC₀₋∞为4-5 μM·h [1]
3. 小鼠组织分布：小鼠单次口服100 mg/kg的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)，并在给药后1小时（Tmax）处死。收集各种组织（肿瘤、肝脏、肾脏、肺、心脏、脑和脾脏），匀浆后，使用LC-MS/MS分析药物浓度。肝脏和肾脏中的药物浓度最高（5-10 μM），其次是肿瘤组织（2-3 μM）。脑组织中检测到的药物浓度较低（<0.5 μM），表明其血脑屏障穿透性有限[1]

1. 小鼠急性毒性：小鼠单次口服给予剂量范围为 200 mg/kg 至 800 mg/kg 的 Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)。剂量高达 600 mg/kg 时未观察到死亡。剂量为 800 mg/kg 时，6 只小鼠中有 2 只在 48 小时内死亡。接受≥400 mg/kg剂量治疗的小鼠在最初3天内出现短暂的体重下降（初始体重的5%-10%），并在第7天恢复。在≤600 mg/kg剂量下，未观察到明显的临床症状变化（例如嗜睡、腹泻或行为异常）[1]
2. 异种移植研究中小鼠的慢性毒性：在为期21天的Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)治疗期间（每日口服50 mg/kg或100 mg/kg），与溶媒对照组相比，治疗组未观察到明显的体重下降（≤初始体重的5%）。治疗结束时的血液学分析显示，治疗组和对照组的白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白或血小板计数均无显著差异。血清生化分析（ALT、AST、肌酐和血尿素氮）也未显示显著变化，表明无肝肾毒性证据[1]
3. 血浆蛋白结合率：采用超滤法测定Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)的血浆蛋白结合率。将药物加入人血浆中，浓度分别为1 μM和10 μM，于37°C孵育30分钟，然后进行超滤。采用LC-MS/MS测定滤液中游离药物浓度和血浆中总药物浓度。两种浓度下血浆蛋白结合率均>95%，表明其与血浆蛋白具有高结合率[1]
4. 药物相互作用潜力：体外人肝微粒体研究表明，浓度高达10 μM时，Rocilinostat (ACY1215; Ricolinostat)对细胞色素P450酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6或CYP3A4）的活性无显著抑制作用，提示其与这些酶发生药物相互作用的可能性较低[1]

[1]. Preclinical activity, pharmacodynamic, and pharmacokinetic properties of a selective HDAC6 inhibitor, ACY-1215, in combination with PS-341 in multiple myeloma. Blood. 2012 Mar 15;119(11):2579-89.

N-[7-(羟基氨基)-7-氧代庚基]-2-(N-苯基苯胺基)-5-嘧啶甲酰胺是一种嘧啶羧酸。
利可利司他(Ricolinostat)目前正在研究用于治疗乳腺癌和转移性乳腺癌。
利可利司他是一种口服生物利用度高的组蛋白去乙酰化酶6 (HDAC6) 特异性抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。利可利司他选择性地靶向并结合HDAC6，通过Hsp90的过度乙酰化破坏Hsp90蛋白伴侣系统，从而阻止后续的聚集体蛋白降解。这会导致未折叠和错误折叠的泛素化蛋白的积累，并最终可能诱导癌细胞凋亡，抑制癌细胞生长。HDAC6是一种位于细胞质中的II类HDAC去乙酰化酶，似乎在错误折叠蛋白降解所需的聚集体的形成和激活中起着关键作用。与非选择性 HDAC 抑制剂相比，ACY-1215 能够降低对正常健康细胞的毒性作用。

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1. 与 PS-341 联合用药的原理：Rocilinostat（ACY1215；Ricolinostat） 可抑制 HDAC6，HDAC6 通过泛素-蛋白酶体系统 (UPS) 和 CMA 参与清除错误折叠蛋白。PS-341 是一种蛋白酶体抑制剂，可阻断 UPS。Rocilinostat（ACY1215；Ricolinostat） 与 PS-341 联合用药旨在协同破坏多发性骨髓瘤 (MM) 细胞中的蛋白质稳态，导致错误折叠蛋白积累增加、内质网应激，并最终诱导细胞凋亡 [1]
2. 临床意义：多发性骨髓瘤是一种以骨髓中浆细胞积聚为特征的血液系统恶性肿瘤。尽管治疗方法不断进步（包括蛋白酶体抑制剂如PS-341），许多患者仍会产生耐药性。Rocilinostat（ACY1215；Ricolinostat）作为一种选择性HDAC6抑制剂，提供了一种新的治疗方法，尤其是在与现有药物（如PS-341）联合使用时，可以克服耐药性并改善多发性骨髓瘤（MM）患者的治疗效果[1]

C24H27N5O3

433.5

433.211

C, 66.50; H, 6.28; N, 16.16; O, 11.07

1316214-52-4

53340666

White to pink pale peach fluffy powder

1.2±0.1 g/cm3

1.620

1.41

114.43

3

6

11

32

538

0

O=C(C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(C1C([H])=NC(=NC=1[H])N(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])=O)N([H])O[H]

QGZYDVAGYRLSKP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H27N5O3/c30-22(28-32)15-9-1-2-10-16-25-23(31)19-17-26-24(27-18-19)29(20-11-5-3-6-12-20)21-13-7-4-8-14-21/h3-8,11-14,17-18,32H,1-2,9-10,15-16H2,(H,25,31)(H,28,30)

N-[7-(hydroxyamino)-7-oxoheptyl]-2-(N-phenylanilino)pyrimidine-5-carboxamide

Ricolinostat; Rocilinostat; ACY 1215; ACY1215; ACY-1215

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.77 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2% DMSO+30% PEG 300+ddH2O: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。