Romidepsin (FK228, FR901228, Depsipeptide, NSC630176)   中文名称: FK228 罗米地辛

HDAC1 ( IC50 = 36 nM ); HDAC2 ( IC50 = 47 nM ); HDAC4 ( IC50 = 510 nM ); HDAC6 ( IC50 = 14000 nM )

体外活性：与TSA不同，罗米地辛的活性形式redFK强烈抑制HDAC1和HDAC2，IC50分别为1.6 nM和3.9 nM，但抑制HDAC4和HDAC6相对较弱，IC50分别为25 nM和790 nM。 Romidepsin 对这些 HDAC 的抑制作用比 redFK 弱 17-23 倍，IC50 分别为 36 nM、47 nM、510 nM 和 14 μM。 Romidepsin 在 HeLa 细胞中的处理可诱导组蛋白乙酰化和 p21 表达，EC50 为 3.0 nM，由于 redFK 的不稳定性，其 EC50 为 11 nM，比 redFK 更强。除了 G2/M 停滞之外，Romidepsin 治疗还会导致细胞周期蛋白 D1 下调和 p53 独立的 p21 诱导，从而抑制 CDK 和 Rb 去磷酸化，从而导致 G1 早期生长停滞。罗米地辛抑制 A549 细胞增殖的作用比 TSA 强 100 倍，比丁酸盐强 1,000,000 倍。 Romidepsin 抑制 U-937、K562 和 CCRF-CEM 细胞的生长，IC50 分别为 5.92 nM、8.36 nM 和 6.95 nM。 Romidepsin 在与 H3 和 H4 乙酰化和 HDAC 抑制发生相对应的浓度下促进慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞凋亡，选择性涉及 caspase 8 和效应 caspase 3 的激活以及 c-FLIP 蛋白的下调。在 13 种肾细胞癌细胞系中的 11 种 (85%) 和 37 种其他癌细胞系中的 16 种 (43%) 中，罗米地辛治疗上调肿瘤死亡受体，并增强自然杀伤 (NK) 介导的肿瘤杀伤作用。罗米地辛对一组套细胞淋巴瘤 (MCL) 细胞系表现出浓度依赖性细胞毒性 激酶测定：对于酶测定，将 10 μL [3H]乙酰基标记的组蛋白 (25,000 cpm/10 μg) 添加到 90 μL 的在浓度不断增加的罗米地辛存在下，从过表达 HDAC1 或 HDAC2 的 293T 细胞中提取 HDAC 酶组分，并将混合物在 37°C 下孵育 15 分钟。酶反应至少 1 小时呈线性。加入 10 μL 浓 HCl 终止反应。释放出的[3H]乙酸用1mL乙酸乙酯萃取，取0.9mL溶剂层加入5mL计数闪烁液II水溶液中，测定放射性。 IC50值由至少三个独立的剂量反应曲线确定。细胞测定：将细胞在 96 孔板中暴露于不同浓度的罗米地辛 72 小时。将 20 μL 5 mg/mL MTT 溶液的 PBS 添加到每个孔中，持续 4 小时。除去培养基后，向每孔中添加 170 μL DMSO 以溶解甲臜晶体。测定 540 nm 处的吸光度。此外，将细胞与台盼蓝一起孵育，并在血细胞计数器中计数蓝色（死）细胞和透明（活）细胞的数量。对于细胞周期分析，将细胞在含有 0.05 mg/mL 碘化丙啶、1 mM EDTA、0.1% Triton X-100 和 1 mg/mL RNase A 的 PBS 溶液的碘化丙啶染色溶液中孵育 30 分钟。然后使悬浮液通过尼龙网过滤器并在 Becton Dickinson FACScan 上进行分析。

在基质胶塞测定中，罗米地辛治疗可有效抑制鸡胚和成年小鼠的新血管形成。每周两次给予罗米地辛 0.1-1 mg/kg 可显着延长患有 U-937 淋巴瘤的小鼠的生存期，中位生存时间分别为 30.5 天（0.56 mg/kg）和 33 天（0.32 mg/kg）（对比. 对照小鼠 20 天）。

在酶测定中，在浓度不断增加的罗米地辛存在下，从过表达 HDAC1 或 HDAC2 的 293T 细胞中提取的 90 μL HDAC 酶组分与 10 μL [³H]乙酰基标记的组蛋白混合（ 25,000 cpm/10 微克）。然后将混合物在 37°C 下孵育 15 分钟。在至少 60 分钟内，酶反应呈线性。加入 10 μL 浓 HCl 终止反应。为了测定放射性，用 1 mL 乙酸乙酯萃取释放的 [³H]乙酸后，将 0.9 mL 溶剂层添加到 5 mL 计数闪烁剂 II 水溶液中。至少使用三个单独的独立剂量反应曲线来计算IC50值。

在 96 孔板中，细胞暴露于不同剂量的罗米地辛，持续 72 小时。在 4 小时内，向每个孔中添加 20 μL 5 mg/mL MTT 的 PBS 溶液。为了溶解甲臜晶体，在除去培养基后向每个孔中添加 170 μL DMSO。在 540 nm 处，计算吸光度。此外，将台盼蓝添加到细胞中，并在血细胞计数器中计数透明（活）和蓝色（死）细胞的数量。将细胞在含有 0.05 mg/mL 碘化丙啶、1 mM EDTA、0.1% Triton X-100 和 1 mg/mL RNase A 的 PBS 溶液的碘化丙啶染色溶液中孵育 30 分钟，以进行细胞周期分析。然后，悬浮液通过尼龙网过滤器后，使用 Becton Dickinson FACScan 进行检查。

Male scid mice inoculated i.p. with U-937 cells
~1 mg/kg once or twice a week
Treated i.p.

[1]. Cancer Res . 2002 Sep 1;62(17):4916-21.

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[9]. Clin Cancer Res . 2010 Jan 15;16(2):554-65.

C24H36N4O6S2

540.7

540.207

C, 53.31; H, 6.71; N, 10.36; O, 17.75; S, 11.86

128517-07-7

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

942.8±65.0 °C at 760 mmHg

219-224°C

524.0±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.529

0.95

193.3

S1C([H])([H])[C@]2([H])C(N([H])/C(=C(/[H])\C([H])([H])[H])/C(N([H])C([H])(C(=O)O[C@]([H])(C([H])=C([H])C([H])([H])C([H])([H])S1)C([H])([H])C(N([H])[C@@]([H])(C(N2[H])=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)=O |c:27|

OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N

InChI=1S/C24H36N4O6S2/c1-6-16-21(30)28-20(14(4)5)24(33)34-15-9-7-8-10-35-36-12-17(22(31)25-16)26-23(32)19(13(2)3)27-18(29)11-15/h6-7,9,13-15,17,19-20H,8,10-12H2,1-5H3,(H,25,31)(H,26,32)(H,27,29)(H,28,30)/b9-7+,16-6-/t15-,17-,19-,20+/m1/s1

(1S,4S,7Z,10S,16E,21R)-7-ethylidene-4,21-di(propan-2-yl)-2-oxa-12,13-dithia-5,8,20,23-tetrazabicyclo[8.7.6]tricos-16-ene-3,6,9,19,22-pentone

NSC 630176;FK228; FK 228; FK-228; FR901228; FR-901228; FR 901228; NSC-630176; NSC-630176; depsipeptide; US trade name: Istodax.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Note: This product is not stable in solution, please use freshly prepared working solution for optimal results.

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.85 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 18mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。