Romidepsin (FK228, FR901228, Depsipeptide, NSC630176)   中文名称: 罗米地辛

HDAC1 ( IC50 = 36 nM ); HDAC2 ( IC50 = 47 nM ); HDAC4 ( IC50 = 510 nM ); HDAC6 ( IC50 = 14000 nM )

体外活性：与TSA不同，罗米地辛的活性形式redFK强烈抑制HDAC1和HDAC2，IC50分别为1.6 nM和3.9 nM，但抑制HDAC4和HDAC6相对较弱，IC50分别为25 nM和790 nM。 Romidepsin 对这些 HDAC 的抑制作用比 redFK 弱 17-23 倍，IC50 分别为 36 nM、47 nM、510 nM 和 14 μM。 Romidepsin 在 HeLa 细胞中的处理可诱导组蛋白乙酰化和 p21 表达，EC50 为 3.0 nM，由于 redFK 的不稳定性，其 EC50 为 11 nM，比 redFK 更强。除了 G2/M 停滞之外，Romidepsin 治疗还会导致细胞周期蛋白 D1 下调和 p53 独立的 p21 诱导，从而抑制 CDK 和 Rb 去磷酸化，从而导致 G1 早期生长停滞。罗米地辛抑制 A549 细胞增殖的作用比 TSA 强 100 倍，比丁酸盐强 1,000,000 倍。 Romidepsin 抑制 U-937、K562 和 CCRF-CEM 细胞的生长，IC50 分别为 5.92 nM、8.36 nM 和 6.95 nM。 Romidepsin 在与 H3 和 H4 乙酰化和 HDAC 抑制发生相对应的浓度下促进慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞凋亡，选择性涉及 caspase 8 和效应 caspase 3 的激活以及 c-FLIP 蛋白的下调。在 13 种肾细胞癌细胞系中的 11 种 (85%) 和 37 种其他癌细胞系中的 16 种 (43%) 中，罗米地辛治疗上调肿瘤死亡受体，并增强自然杀伤 (NK) 介导的肿瘤杀伤作用。罗米地辛对一组套细胞淋巴瘤 (MCL) 细胞系表现出浓度依赖性细胞毒性 激酶测定：对于酶测定，将 10 μL [3H]乙酰基标记的组蛋白 (25,000 cpm/10 μg) 添加到 90 μL 的在浓度不断增加的罗米地辛存在下，从过表达 HDAC1 或 HDAC2 的 293T 细胞中提取 HDAC 酶组分，并将混合物在 37°C 下孵育 15 分钟。酶反应至少 1 小时呈线性。加入 10 μL 浓 HCl 终止反应。释放出的[3H]乙酸用1mL乙酸乙酯萃取，取0.9mL溶剂层加入5mL计数闪烁液II水溶液中，测定放射性。 IC50值由至少三个独立的剂量反应曲线确定。细胞测定：将细胞在 96 孔板中暴露于不同浓度的罗米地辛 72 小时。将 20 μL 5 mg/mL MTT 溶液的 PBS 添加到每个孔中，持续 4 小时。除去培养基后，向每孔中添加 170 μL DMSO 以溶解甲臜晶体。测定 540 nm 处的吸光度。此外，将细胞与台盼蓝一起孵育，并在血细胞计数器中计数蓝色（死）细胞和透明（活）细胞的数量。对于细胞周期分析，将细胞在含有 0.05 mg/mL 碘化丙啶、1 mM EDTA、0.1% Triton X-100 和 1 mg/mL RNase A 的 PBS 溶液的碘化丙啶染色溶液中孵育 30 分钟。然后使悬浮液通过尼龙网过滤器并在 Becton Dickinson FACScan 上进行分析。

在基质胶塞测定中，罗米地辛治疗可有效抑制鸡胚和成年小鼠的新血管形成。每周两次给予罗米地辛 0.1-1 mg/kg 可显着延长患有 U-937 淋巴瘤的小鼠的生存期，中位生存时间分别为 30.5 天（0.56 mg/kg）和 33 天（0.32 mg/kg）（对比. 对照小鼠 20 天）。

---

FK228在体内显示出强大的抗血管生成活性[4]
还使用CAM测定法在体内研究了FK228的抗血管生成活性。如图3所示，FK228显著降低了鸡胚血管生成的发育，而没有任何血栓形成和出血的迹象。作为阳性对照的RA对血管生成的抑制率为70.83±6.22%（n=32），而空盖玻片的抑制率则为4.43±4.43%（n=45）。然而，FK228完全抑制了鸡胚的新生血管形成（100±0.00%，n=16），而不影响任何预先存在的血管。FK228的抗血管生成活性也通过在成年小鼠中进行建立的体内血管生成模型Matrigel塞试验得到证实。29将Matrigel皮下注射到C57/BL6J小鼠体内，在体内固化，并在植入后5天从小鼠体内取出。为了进行组织学检查，进行了图像分析。如图4所示，仅注射肝素的Matrigel对照栓塞的血管很少，但bFGF（100ng/ml）在栓塞内富集了丰富的血管。然而，FK228强烈抑制了bFGF诱导的血管生成。还测量了Matrigel栓塞的Hb含量，以量化功能性脉管系统。对照栓显示血红蛋白为0.55±0.44 g/dl（n=5），含bFGF的Matrigel显示为12.94±2.82 g/dl（n=6）。然而，FK228显著降低了Hb水平至1.36±0.25 g/dl（n=5）。这些结果表明，FK228在体内和体外都能有效抑制血管生成。

在酶测定中，在浓度不断增加的罗米地辛存在下，从过表达 HDAC1 或 HDAC2 的 293T 细胞中提取的 90 μL HDAC 酶组分与 10 μL [³H]乙酰基标记的组蛋白混合（ 25,000 cpm/10 微克）。然后将混合物在 37°C 下孵育 15 分钟。在至少 60 分钟内，酶反应呈线性。加入 10 μL 浓 HCl 终止反应。为了测定放射性，用 1 mL 乙酸乙酯萃取释放的 [³H]乙酸后，将 0.9 mL 溶剂层添加到 5 mL 计数闪烁剂 II 水溶液中。至少使用三个单独的独立剂量反应曲线来计算IC50值。

---

[3H]-甲基胸苷测定[4]
为了测量细胞增殖，将BAEC放置在密度为3×104个细胞的24孔培养板中。然后，加入Romidepsin (FK228)并在常氧或缺氧条件下孵育24小时。然后在测定前最后4小时加入1μCi[3H]-甲基胸苷（25 mCi/mmol）。用PBS洗涤细胞，用甲醇在冰上固定30分钟。用10%三氯乙酸（TCA）洗涤去除未掺入的[3H]-甲基胸苷。用10%TCA孵育过夜后，将细胞在37°C下溶解在0.2 M NaOH和0.1%SDS中1小时。用液体闪烁计数器测定每分钟计数，并将值表示为平均cpm（一式三份）。对每个样品进行三次分析，并独立重复实验两次。

---

HDAC活性测定[4]
收获用Romidepsin (FK228)（1-10ng/ml）处理24小时的BAEC（1×107至5×107），并在1ml HDAC缓冲液（50mM Tris-HCl，pH 8.0，150mM NaCl，10%甘油，0.5%Triton X-100）中裂解。[3H]-乙酰化组蛋白与100μl制备的粗细胞提取物在37°C下孵育2小时。用1M HCl和0.16M乙酸淬灭反应。用600μl乙酸乙酯提取释放的[3H]乙酸盐，并用闪烁计数器定量。

在 96 孔板中，细胞暴露于不同剂量的罗米地辛，持续 72 小时。在 4 小时内，向每个孔中添加 20 μL 5 mg/mL MTT 的 PBS 溶液。为了溶解甲臜晶体，在除去培养基后向每个孔中添加 170 μL DMSO。在 540 nm 处，计算吸光度。此外，将台盼蓝添加到细胞中，并在血细胞计数器中计数透明（活）和蓝色（死）细胞的数量。将细胞在含有 0.05 mg/mL 碘化丙啶、1 mM EDTA、0.1% Triton X-100 和 1 mg/mL RNase A 的 PBS 溶液的碘化丙啶染色溶液中孵育 30 分钟，以进行细胞周期分析。然后，悬浮液通过尼龙网过滤器后，使用 Becton Dickinson FACScan 进行检查。

---

细胞生长试验[4]
通过3-（4,5-二苯基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）法测定内皮细胞生长。BAEC在24孔培养板中以1.5×10~4个细胞的密度生长，并孵育24小时以稳定。将培养基替换为1.5ml新鲜培养基，并加入Romidepsin (FK228)。24和72小时后，抽吸培养基并进行MTT分析。MTT甲赞的量以540nm处的吸光度测定。对每个样品进行三次分析，并独立重复实验两次。

---

试管形成试验[4]
将基质胶（250μl，浓度为10mg/ml）置于24孔培养板中，在37°C下聚合30分钟。将BAECs（5×10~5个细胞）接种在Matrigel表面。随后，加入10 ng/ml的Romidepsin (FK228)，并在常氧或缺氧条件下孵育24小时。在显微镜下观察细胞的形态变化，并使用ImagePro Plus软件以×40的放大倍数拍摄。对每个样品进行两次分析，并独立重复实验两次。

---

化学迁移试验[4]
使用带有8.0-μm孔聚碳酸酯过滤器插入物的24孔透孔培养室对BAECs进行化学迁移。过滤器的下侧涂有10μl IV型胶原蛋白（3mg/ml），风干1小时。将BAEC（3×104个细胞）放置在过滤器的上部，并在过滤器的两侧涂上Romidepsin（FK228）（10ng/ml）。细胞在常氧或缺氧条件下在37°C下孵育8小时，然后用甲醇固定，用苏木精和伊红染色。用棉签仔细擦拭上表面的细胞，然后将其安装在载玻片上。通过使用放大倍数为40倍的光学显微镜在单个滤光片上计数整个细胞数量来确定细胞迁移。对每个样品进行两次分析，并独立重复实验两次。

---

化学侵袭试验[4]
使用带有8.0-μm孔聚碳酸酯过滤器插入物的透孔室系统在体外进行BAEC的侵袭性。过滤器的下侧涂有10μl的IV型胶原蛋白（3mg/ml），而上侧涂有10µl的Matrigel（0.5mg/ml）。将BAECs（3×10~4个细胞）放置在过滤器的上部，并在两个部分处理Romidepsin (FK228)（10ng/ml）。细胞在常氧或缺氧条件下在37°C下孵育18小时，然后用甲醇固定，用苏木精和伊红染色。通过使用放大倍数为40倍的光学显微镜在单个过滤器中计数整个细胞数量来确定细胞侵袭。对每个样品进行两次分析，并独立重复实验两次。

---

细胞粘附试验[4]
如下所述进行细胞粘附试验。24孔培养板的每个孔都涂有IV型胶原（5μg/ml）、玻连蛋白（1μg/ml），纤维连接蛋白（1µg/ml）或I型胶原（6μg/ml）并在37°C下孵育2小时。用PBS洗涤后，向每个孔中加入3.0%BSA 1小时，以防止非特异性附着。将悬浮在无血清培养基中的BAECs（3×10~4个细胞）加入到每个包被孔中，并加入Romidepsin（FK228）（10ng/ml）。在常氧或缺氧条件下在37°C下孵育1小时后，通过在平板上流动PBS 3次来洗掉非贴壁细胞。剩余的贴壁细胞用1%结晶紫染色，并用PBS洗涤几次以去除多余的染料。用10%乙酸洗脱染色的结晶紫，并用带有600nm滤光片的ELISA阅读器进行扫描测定。对每个样品进行三次分析，并独立重复实验两次。

---

绒毛尿囊膜（CAM）测定[4]
受精的鸡蛋在37°C的加湿培养箱中保存3天。然后用皮下注射针去除约2ml的卵清蛋白，使CAM和卵黄囊从壳膜上脱落。在第3.5天，将壳冲出并取出，壳膜剥落。在4.5天大的鸡胚阶段，将负载有Romidepsin（FK228）（50纳克/蛋）的Thermanox盖玻片风干并涂抹在CAM表面。两天后，将2ml 10%脂肪乳注射到绒毛尿囊中，并在显微镜下观察CAM。由于视黄酸（RA）是一种已知的抗血管生成化合物，因此1μg/egg RA被用作抗血管生成反应的阳性对照。当用Romidepsin（FK228）治疗的CAM具有与RA治疗的CAM相似程度的无血管区时，反应被评为阳性，并根据阳性卵子占测试卵子总数的百分比计算。实验重复3次，每次使用20多个鸡蛋。

雄性SCID小鼠腹腔注射U-937细胞
~1 mg/kg，每周一次或两次
腹腔注射治疗

---

体内小鼠Matrigel胶塞试验[4]
小鼠Matrigel胶塞试验按先前所述方法进行。简而言之，将0.5 ml含有指定浓度罗米地辛(FK228)(0.7 μg/ml)、bFGF(100 ng/ml)和肝素(10 U/ml)的Matrigel胶皮下注射到C57BL/6J小鼠体内。注射的Matrigel胶迅速形成单一的固体胶塞。5天后，处死小鼠，取出Matrigel胶塞，用3.7%甲醛/PBS固定，并包埋于石蜡中。然后将胶塞切片，用Masson三色染色法进行显微镜观察。为了量化新生血管的形成，我们使用Drabkin 525试剂盒测定了血红蛋白（Hb）的含量。根据供应商提供的操作规程，利用试剂盒提供的已知浓度的Hb样品计算了Hb浓度。该实验独立重复了3至4次。

吸收、分布和排泄
罗米地辛在标准剂量下表现出线性药代动力学特征。
44.5升
8.4升/小时

---

代谢/代谢物
罗米地辛在体外主要通过CYP3A4进行广泛的肝脏代谢，CYP3A5、CYP1A1、CYP2B6和CYP2C19的贡献较小。

---

生物半衰期
约3小时

肝毒性
在罗米地辛治疗慢性晚期肺癌（CTLC）和晚期晚期肺癌（PTLC）患者的临床试验中，治疗期间血清酶升高的发生率为7%至20%，但这些异常通常是短暂且轻微的，无需调整剂量。6%的患者出现血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高超过正常值上限（ULN）5倍以上的情况。在罗米地辛的预注册临床试验中，未见接受治疗的受试者出现肝炎、黄疸或临床上明显的肝损伤的报告。罗米地辛的临床应用有限，但没有证据表明其与显著的肝损伤相关。
罗米地辛还具有免疫调节活性，据报道可导致潜伏的DNA病毒（包括EB病毒、水痘-带状疱疹病毒和乙型肝炎病毒）的再激活。一名患者最初乙肝表面抗原（HBsAg）阴性，但乙肝核心抗体（抗-HBc）和乙肝表面抗体（抗-HBs）阳性，之后发生了乙型肝炎病毒的再激活。然而，乙型肝炎病毒再激活的临床表现较轻，且对口服抗病毒治疗有效。在EB病毒相关淋巴瘤患者中，罗米地辛与EB病毒感染的严重再激活和急性肝炎相关，后者可能很严重甚至致命。
可能性评分：C（可能是临床上明显的肝损伤的原因，可能是乙型肝炎或EB病毒感染再激活所致）。

---

蛋白结合
血浆蛋白结合率高（92%-94%）

[1]. Cancer Res. 2002 Sep 1;62(17):4916-21.

[2]. Br J Cancer. 2000 Sep;83(6):817-25.

[3]. Mol Cancer Ther. 2002 Sep;1(11):937-41.

[4]. Int J Cancer. 2002 Jan 20;97(3):290-6.

[5]. Biochem Pharmacol. 2002 Oct 1;64(7):1079-90.

[6]. Blood. 2003 Jul 15;102(2):652-8.

[7]. Cancer Res. 2006 Jul 15;66(14):7317-25.

[8]. Clin Cancer Res. 2008 Jan 15;14(2):549-58.

[9]. Clin Cancer Res. 2010 Jan 15;16(2):554-65.

罗米地辛是一种环状二硫键肽，由(2Z)-2-氨基丁-2-烯酰基、L-缬氨酰基、(3S,4E)-3-羟基-7-硫代庚-4-烯酰基、D-缬氨酰基和D-半胱氨酰基残基按顺序连接并首尾相连环化而成。它是一种抗肿瘤药物，也是EC 3.5.1.98（组蛋白去乙酰化酶）抑制剂。它是一种环状二硫键肽、有机二硫键和杂环抗生素。罗米地辛已获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准，以商品名Istodax用于治疗某些类型的癌症。罗米地辛目前正作为一种研究性药物进行研究，旨在探索治愈 HIV 感染的策略。作为一种 HIV 研究性药物，罗米地辛属于一类被称为潜伏期逆转剂的药物。
罗米地辛是一种选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂，于 2009 年在美国获批用于治疗至少接受过一种既往全身治疗的皮肤 T 细胞淋巴瘤 (CTCL) 患者。
罗米地辛是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂。罗米地辛的作用机制是作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂、胆汁酸输出泵抑制剂、有机阴离子转运多肽1B1抑制剂、有机阴离子转运多肽1B3抑制剂、有机阴离子转运蛋白1抑制剂和有机阳离子转运蛋白2抑制剂。
罗米地辛是一种静脉注射的组蛋白去乙酰化酶抑制剂和抗肿瘤药物，已获准用于治疗难治性或复发性皮肤和外周T细胞淋巴瘤。罗米地辛在治疗期间会引起轻微的血清酶升高，但尚未发现与临床上明显的肝损伤病例相关，尽管有报道称其可导致乙型肝炎病毒再激活。
已有报道称，在褐腐霉（Humicola fuscoatra）和紫色色杆菌（Chromobacterium violaceum）中发现了异硫氰酸酯（Istodax），并有相关数据。
罗米地辛是一种从紫色色杆菌中分离得到的双环缩肽类抗生素，具有抗肿瘤活性。胞内激活后，罗米地辛与组蛋白去乙酰化酶（HDAC）结合并抑制其活性，导致基因表达改变，并诱导细胞分化、细胞周期阻滞和细胞凋亡。该药物还能抑制缺氧诱导的血管生成，并耗竭多种热休克蛋白90 (Hsp90) 依赖性癌蛋白。

---

药物适应症
罗米地辛适用于治疗至少接受过一种既往全身治疗的成人皮肤T细胞淋巴瘤 (CTCL)。
FDA标签
治疗外周T细胞淋巴瘤 (PTCL)，
治疗外周T细胞淋巴瘤（结内型、其他结外型和白血病/播散型）

---

作用机制
罗米地辛是一种前药，进入细胞后才被激活。其活性代谢物含有一个游离的巯基，该巯基与1类和2类HDAC酶活性位点中的锌离子相互作用，从而抑制其酶活性。某些肿瘤存在HDAC过度表达和组蛋白乙酰转移酶下调/突变的情况。组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 与组蛋白乙酰转移酶之间的这种失衡会导致调控基因的减少，进而引发肿瘤发生。抑制 HDAC 可能恢复癌细胞中正常的基因表达，并导致细胞周期阻滞和凋亡。FK228 是一种组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，其抑制的分子机制尚不清楚。本文研究表明，FK228 分子内二硫键的还原显著增强了其抑制活性，并且该二硫键在细胞内可通过谷胱甘肽参与的还原作用迅速还原。计算机模型表明，还原态 FK228 (redFK) 的一个巯基与活性位点锌相互作用，阻止底物接近。redFK 对 HDAC1 和 HDAC2 的抑制作用强于 HDAC4 和 HDAC6。由于 redFK 在培养基和血清中快速失活，其体内抑制 HDAC 活性低于 FK228。因此，FK228 作为一种稳定的前药，可抑制 I 类酶，并在被细胞摄取后通过还原反应激活。谷胱甘肽介导的激活也表明其在临床上可用于对抗化疗中谷胱甘肽介导的耐药性。[1]

---

Depsipeptide，FR901228，是一种新型的组蛋白去乙酰化酶环肽抑制剂，具有独特的细胞毒性特征，目前正在进行 I 期临床试验。本文证明，FR901228 除了引起 G2/M 期阻滞外，还会导致 G1 期阻滞并伴有 Rb 蛋白低磷酸化。体外激酶活性测定表明，FR901228 并未直接抑制 CDK 活性，但在暴露于 FR901228 的细胞中提取的 CDK 中观察到了抑制作用。FR901228 处理后 6 至 12 小时，细胞周期蛋白 D1 消失，而细胞周期蛋白 E 则上调。 FR901228虽然不能诱导野生型p53的表达，但却能以p53非依赖的方式诱导p21(WAF1/CIP1)的表达。缺乏p21的细胞克隆并未停滞在G1期，而是继续进行DNA合成，并在FR901228处理后停滞在G2/M期。此外，FR901228抑制了EGF诱导的ERK-2/MAPK激活，但由于EGF刺激后细胞整体酪氨酸磷酸化水平未受影响，早期信号转导事件仍然保持完整。因此，FR901228虽然不直接抑制激酶活性，但会导致细胞周期蛋白D1下调和p53非依赖的p21诱导，进而抑制CDK活性并使Rb蛋白去磷酸化，最终导致细胞生长停滞在G1期早期。与G1期停滞不同，G2/M期停滞不依赖于p21，但与显著的细胞毒性相关。 [2]

---

组蛋白去乙酰化酶抑制剂 (HDI) 通过抑制组蛋白去乙酰化，在转录水平上诱导 p21 的表达。我们发现，HDI 丁酸钠 (Bu)、曲古抑菌素 A (TSA) 和去肽 (FR901228) 均能诱导 p21 的表达，但只有 TSA 和 FR901228 能引起有丝分裂阻滞（此外还能引起 G1 期和 G2 期阻滞）。引起有丝分裂阻滞的能力与这些化合物较高的细胞毒性相关。尽管能引起有丝分裂阻滞，但 TSA 和 FR901228（与紫杉醇不同）并不影响微管蛋白的聚合。与 FR901228 不同，TSA 能引起微管蛋白第 40 位赖氨酸的乙酰化；可溶性微管蛋白和微管均被乙酰化。 p21的诱导在8小时达到最大值，而微管蛋白在TSA处理1小时后即达到最大乙酰化水平。在12-25 ng/ml TSA处理后即可检测到微管蛋白乙酰化，但在50 ng/ml TSA浓度下乙酰化水平达到平台期，同时伴随G2/M期阻滞、DNA含量低于2N的细胞出现、聚（ADP-核糖）聚合酶裂解以及细胞快速死亡。我们得出结论，组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDI）对非组蛋白去乙酰化酶具有不同的作用，并且TSA引起的微管蛋白快速乙酰化是TSA非转录效应的标志。[3]

---

FK228（原名FR901228）最近从紫色色杆菌（Chromobacterium violaceum）中分离得到，是一种强效抗肿瘤药物，其生物靶蛋白被鉴定为组蛋白去乙酰化酶（HDAC）。由于其独特的化学结构（即双环缩肽）以及在美国国家癌症研究所（NCI）药物研发项目中展现出的活性特征，FK228目前正处于癌症治疗的I期临床试验阶段。本研究探讨了FK228在体内和体外的抗血管生成活性。结果表明，FK228在抑制细胞组蛋白去乙酰化酶（HDAC）活性的相同浓度下，能够有效抑制缺氧刺激的牛主动脉内皮细胞的增殖、侵袭、迁移、黏附和管状结构形成。此外，FK228还能抑制鸡胚和成年小鼠在Matrigel胶塞实验中的新生血管形成。有趣的是，FK228抑制了血管内皮生长因子或激酶插入结构域受体等血管生成刺激因子的表达，同时诱导了von Hippel-Lindau蛋白和神经纤维蛋白2等血管生成抑制因子的表达，这表明FK228抑制血管生成可能涉及基因转录效应。这些结果表明，FK228是一种新型抗血管生成药物，可能至少部分通过抑制新生血管形成来抑制肿瘤生长。 [4]

---

FK228 [(E)-(1S,4S,10S,21R)-7-[(Z)-亚乙基]-4,21-二异丙基-2-氧杂-12,13-二硫杂-5,8,20,23-四氮杂双环-[8,7,6]-二十三碳烯-3,6,9,19,22-戊酮；FR901228，去肽] 是一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂，在恶性淋巴瘤患者的 I 期临床试验中显示出治疗效果。然而，其作用机制尚未明确。本研究探讨了 FK228 对人淋巴瘤 U-937 细胞的体外和体内作用。FK228 对 U-937 细胞的生长具有极强的抑制作用，IC50 值为 5.92 nM。在SCID小鼠淋巴瘤模型中，每周接受一次或两次FK228治疗的小鼠比对照组小鼠存活时间更长，中位生存期分别为30.5天（0.56 mg/kg）和33天（0.32 mg/kg）（对照组小鼠为20天）。值得注意的是，12只接受FK228（0.56 mg/kg，每周一次或两次）治疗的小鼠中有2只存活超过60天的观察期。FK228治疗48小时后，U-937细胞的凋亡率随时间增加至37.7%。此外，FK228诱导U-937细胞发生G1期和G2/M期阻滞，并使其分化为CD11b(+)/CD14(+)表型。经 FK228 处理 24 小时后，p21(WAF1/Cip1) 和凝溶胶蛋白 mRNA 的表达分别增加了高达 654 倍和 152 倍。FK228 导致 p21(WAF1/Cip1) 启动子区域（包括 Sp1 结合位点）的组蛋白乙酰化。总之，(i) FK228 延长了淋巴瘤模型中 scid 小鼠的生存期；(ii) FK228 对人类淋巴瘤的有益作用可能是通过组蛋白乙酰化调节基因表达，进而诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞和分化而实现的。[5]

---

基于早期观察结果，Depsipeptide 已在慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 的体外选择性活性中启动临床试验。我们旨在确定慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞中组蛋白 H3 和 H4 乙酰化、组蛋白去乙酰化酶抑制以及细胞凋亡之间的关系，以验证这些临床试验中药效学终点的合理性。我们证明，在体外，地西肽在与培养的 CLL 细胞的半数致死浓度 (LC50，即导致 50% 细胞死亡的浓度) 相对应的浓度下（0.038 μM 地西肽），可诱导组蛋白 H3 和 H4 乙酰化并抑制组蛋白去乙酰化酶活性。组蛋白乙酰化的变化具有赖氨酸特异性，涉及 H4 K5、H4 K12 和 H3 K9，以及程度较轻的 H4 K8，但不涉及 H4 K16 或 H3 K14。去肽诱导的细胞凋亡依赖于半胱天冬酶，选择性地激活肿瘤坏死因子（TNF）受体（外源性途径），进而启动半胱天冬酶8和效应半胱天冬酶3的激活。半胱天冬酶8的激活伴随着细胞FLICE抑制蛋白（c-FLIP，I-FLICE）的下调，而未观察到Fas（CD95）的上调。其他凋亡蛋白，包括Bcl-2、Bax、Mcl-1和X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）的表达变化均未观察到。我们的研究结果表明，靶酶组蛋白去乙酰化酶的抑制、组蛋白H3和H4乙酰化与TNF受体介导的细胞凋亡途径相关，而其他治疗慢性淋巴细胞白血病（CLL）的药物并不利用该途径。这些数据表明，组蛋白H3和H4乙酰化、组蛋白去乙酰化酶抑制以及[6]

---

蛋白酶体抑制剂硼替佐米和组蛋白去乙酰化酶抑制剂地西肽（FK228）能够上调肿瘤死亡受体。因此，我们研究了用这些药物预处理恶性细胞是否能增强自然杀伤（NK）细胞介导的肿瘤杀伤作用。从健康供体和癌症患者中分离的NK细胞在体外扩增，然后在暴露于硼替佐米或地西肽前后检测其对肿瘤细胞系的细胞毒性。在13个肾细胞癌细胞系中的11个（85%）以及37个其他癌细胞系中的16个（43%）中，与未处理的肿瘤对照组相比，暴露于这些药物显著增强了NK细胞介导的肿瘤溶解作用（P < 0.001）。此外，与未经处理的肿瘤相比，经硼替佐米或地西肽预处理的转移性肾细胞癌患者来源的NK细胞对自体肿瘤细胞的细胞毒性显著增强。对NK细胞细胞毒性敏感的肿瘤细胞表面DR5（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）-R2；P < 0.05）表达显著增加；相反，MHC I类分子、MIC-A/B、DR4（TRAIL-R1）和Fas（CD95）的表面表达没有变化。阻断NK细胞上的TRAIL可完全消除这种增强的NK细胞杀伤敏感性，而阻断肿瘤细胞上的DR5则可部分消除这种敏感性。这些发现表明，药物诱导的TRAIL敏感性可作为一种新的策略，以增强过继输注NK细胞在癌症患者中的抗癌作用。[7]

C24H36N4O6S2

540.7

540.207

C, 53.31; H, 6.71; N, 10.36; O, 17.75; S, 11.86

128517-07-7

5352062

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

942.8±65.0 °C at 760 mmHg

219-224°C

524.0±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.529

0.95

193.3

4

8

2

36

905

4

S1C([H])([H])[C@]2([H])C(N([H])/C(=C(/[H])\C([H])([H])[H])/C(N([H])C([H])(C(=O)O[C@]([H])(C([H])=C([H])C([H])([H])C([H])([H])S1)C([H])([H])C(N([H])[C@@]([H])(C(N2[H])=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=O)=O |c:27|

OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N

InChI=1S/C24H36N4O6S2/c1-6-16-21(30)28-20(14(4)5)24(33)34-15-9-7-8-10-35-36-12-17(22(31)25-16)26-23(32)19(13(2)3)27-18(29)11-15/h6-7,9,13-15,17,19-20H,8,10-12H2,1-5H3,(H,25,31)(H,26,32)(H,27,29)(H,28,30)/b9-7+,16-6-/t15-,17-,19-,20+/m1/s1

(1S,4S,7Z,10S,16E,21R)-7-ethylidene-4,21-di(propan-2-yl)-2-oxa-12,13-dithia-5,8,20,23-tetrazabicyclo[8.7.6]tricos-16-ene-3,6,9,19,22-pentone

NSC 630176;FK228; FK 228; Romidepsin; Chromadax; 128517-07-7; Antibiotic FR 901228; FK-228; FR901228; FR-901228; FR 901228; NSC-630176; NSC-630176; depsipeptide; US trade name: Istodax.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.85 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.85 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 18mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。