Rupintrivir (AG7088)

别名: AG-7088; AG7088; AG 7088; 223537-30-2; ag7088; Ruprintrivir; Rupintrivir-d4; RGE5K1Q5QW; 芦平曲韦; (2E,4S)-4-[(2R,5S)-2-(4-氟苄基)-6-甲基-5-(5-甲基异恶唑-3-基甲酰氨基)-4-氧代庚酰氨基]-5-[[(3S)-2-氧代-3-吡咯烷基]-2-戊烯酸乙酯; 2-(4-氟苄基)-6-甲基-5-(5-甲基异恶唑-3-基甲酰氨基)-4-氧代庚酰氨基]-5-[[(3S)-2-氧代-3-吡咯烷基]-2-戊烯酸乙酯
目录号: V14128 纯度: =99.10%
Rupintrivir (AG-7088) 是一种新型、选择性和不可逆的鼻病毒 3C 蛋白酶抑制剂,有望用于治疗人鼻病毒-HRV 感染。
Rupintrivir (AG7088) CAS号: 223537-30-2
产品类别: Virus Protease
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
2mg
5mg
10mg
25mg
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纯度: =99.10%

产品描述
鲁平替韦 (AG-7088) 是一种新型、选择性且不可逆的鼻病毒 3C 蛋白酶抑制剂,具有治疗人鼻病毒 (HRV) 感染的潜在应用价值。在 H1-HeLa 和 MRC-5 细胞保护试验中,鲁平替韦可抑制 48 种不同 HRV 血清型的复制,平均 EC50 值为 0.023 μM。
鲁平替韦 (CAS#: 223537-30-2),又名 AG7088,是一种强效且选择性的不可逆人鼻病毒 (HRV) 3C 蛋白酶抑制剂,该蛋白酶是病毒复制所必需的酶。在 H1-HeLa 和 MRC-5 细胞保护试验中,鲁平替韦对 48 种 HRV 血清型均表现出抗病毒活性,平均 EC50 值为 0.023 μM (23 nM)。临床研究表明,鲁平替韦在降低普通感冒和其他 HRV 相关疾病患者的病毒载量和缓解症状方面具有潜力。
生物活性&实验参考方法
靶点
Antiviral; HRV (human rhinovirus) 3C protease
Rupintrivir targets the human rhinovirus (HRV) 3C protease, a cysteine protease that is essential for viral replication. As a peptidomimetic irreversible inhibitor, rupintrivir binds covalently to the active site of the 3C protease, blocking the processing of viral polyproteins into functional proteins. This inhibition prevents the formation of the viral replication complex and halts viral replication. Rupintrivir also exhibits immunomodulatory properties.
体外研究 (In Vitro)
在H1-HeLa和MRC-5细胞保护试验中,鲁平替韦(Rupintrivirvr,AG7088)抑制了所有受试人鼻病毒(HRV)血清型(48/48)的复制,以及相关的微小核糖核酸病毒(如柯萨奇病毒A21和B3、肠道病毒70和埃可病毒11)的复制。平均半数有效浓度(EC50)为0.023 μM(范围:0.003至0.081 μM),平均90%有效浓度(EC90)为0.082 μM(范围:0.018至0.261 μM)。
体外实验表明,鲁平替韦对48种HRV血清型具有抗病毒活性,在H1-HeLa和MRC-5细胞保护试验中,平均EC50为0.023 μM。鲁平替韦是一种选择性HRV 3C蛋白酶抑制剂,EC50值为5 nM。它能抑制EV71和EV-D68的复制。该化合物的抗病毒活性已在多种基于细胞的病毒复制和细胞病变效应检测中得到证实。鲁平替韦还具有免疫调节特性。
体内研究 (In Vivo)
鲁平替韦 (AG7088) 可降低离体屋尘螨致敏小鼠肺切片 (PCLS) 中由鼻病毒 (RV) 诱导的 TH-2 细胞因子 IL-4 的水平[2]。
在体内,临床研究表明鲁平替韦具有降低病毒载量和缓解普通感冒及其他 HRV 相关疾病患者症状的潜力。然而,现有文献中关于动物模型体内疗效的具体数据尚不详尽。该化合物对 HRV 3C 蛋白酶的不可逆抑制使其成为抗病毒研究的重要工具。目前已在治疗鼻病毒感染的临床试验中进行评估。
酶活实验
酶活性测定。[1]
HRV 14 3C 蛋白酶的蛋白水解活性采用连续荧光共振能量转移法测定,具体方法如前所述。简而言之,在 Perkin-Elmer LS50-B 分光光度计上,通过监测 336 nm 激发后 490 nm 处的荧光发射来检测底物肽的裂解情况。数据采用非线性回归分析程序 ENZFITTER 进行分析,该程序可计算 HRV 14 3C 蛋白酶失活的一级反应速率常数。蛋白酶选择性测定采用市售蛋白酶(浓度约为 10 nM),基本按照供应商的说明进行。
蛋白水解过程分析。 [1]
通过对HRV 14感染细胞的放射性标记十二烷基硫酸钠(SDS)溶解裂解物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),评估了Rupintrivirvr (AG7088)抑制HRV 14 3C介导的蛋白水解加工的能力。首先,以10的MOI感染H1-HeLa细胞。感染8.5小时后,用PBS洗涤细胞,并将培养基更换为缺乏甲硫氨酸和半胱氨酸的培养基。感染9小时后,加入适当浓度的化合物。化合物处理30分钟后,加入50 μCi的[35S]Met-[35S]Cys(Expre35S 35S蛋白标记)。一小时后,用冰冷的PBS洗涤单层细胞两次,并在250 μl放射免疫沉淀分析缓冲液(50 mM Tris-Cl [pH 8.0]、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脱氧胆酸钠、0.1% SDS)中裂解细胞,超声处理后,储存于−70°C以备后续分析。将溶解的细胞裂解液中的蛋白质通过12% PAGE凝胶电泳分离。电泳后,凝胶用考马斯亮蓝染色,脱色,并用Amplify试剂处理。凝胶在纤维素膜中风干过夜,并在−80°C下曝光成膜。
鲁平替韦的体外酶/受体结合试验是使用纯化的HRV 3C蛋白酶的蛋白酶抑制试验。将该酶与荧光肽底物和不同浓度的鲁平替韦孵育,并通过荧光法测定底物裂解速率。根据剂量反应曲线确定抑制3C蛋白酶活性的IC50值。通过预孵育和稀释实验证实了不可逆抑制。
细胞实验
添加时间检测。[1]
将六孔板中亚融合的H1-HeLa细胞单层以15的MOI感染HRV 14。吸附1小时后,用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞单层三次,并更换培养基。在感染时以及之后的不同时间点,加入浓度为EC50(通过细胞保护试验确定)20倍以上的AG7088(0.5 μM)或WIN 51711(3.0 μM)。感染8小时后,对样品进行三次冻融循环处理,然后超声处理15秒,并通过离心(4°C,15,000 × g,5分钟)澄清。将澄清的细胞和上清裂解液储存在−70°C,用于后续的感染性病毒分析。
HCMV抗病毒试验。 [1]
采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测定了 AG7088 对 MRC-5 细胞中 HCMV AD169 复制的抗病毒活性。该方法使用针对 HCMV 主要即刻早期基因产物的单克隆抗体 (MAb)。简而言之,病毒吸附 2 小时后,去除接种物,并加入含有适当浓度化合物的培养基。感染 5 天后,将 MRC-5 单层细胞与 MAb 810 孵育,随后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体,最后使用四甲基联苯胺液体底物系统在 650 nm 波长处分光光度法检测病毒抗原。EC50 定义为使光密度降低至病毒对照组 50% 的化合物浓度。 CC50 的测定采用上述 XTT 还原法。
RV 感染 PCLS[2]
将两株 PCLS 置于细胞培养条件下(33 °C,5% CO2,100% 湿度),在培养基中用 1 × 10⁵ IU/mL 的 RV 感染 48 小时。为确定复制依赖性免疫反应,使用同一批次的紫外线灭活病毒(260 nm,1 小时),并在相同条件下进行实验。药理学干预是在 100 nM 鲁平替韦存在下,用 RV(1 × 10⁻⁵ IU/mL)感染细胞。
鲁平替韦的体外细胞试验使用 HRV 感染的细胞系,例如 H1-HeLa 或 MRC-5 细胞。将细胞感染 HRV,并用不同浓度的鲁平替韦处理。病毒复制可通过测量细胞病变效应、病毒RNA水平或噬斑形成情况来评估。细胞毒性采用MTT法测定选择性指数。抑制病毒复制的EC50值由剂量反应曲线确定。
动物实验
小鼠经屋尘螨(HDM)致敏。从HDM致敏或未致敏小鼠中制备精确切割的肺切片(PCLS)。肺切片在体外分别感染鼻病毒(RV)或RV联合鲁平替韦。感染后48小时通过细胞因子分泌评估免疫反应的调节情况。结果:体内HDM致敏导致以TH-2/TH-17为主的细胞因子反应,该反应在体外PCLS中持续存在。RV感染未致敏小鼠的PCLS可诱导抗病毒和促炎免疫反应,表现为IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α、MCP-1、IP-10、IL-10和IL-17A的分泌。相比之下,来自屋尘螨致敏小鼠的PCLS细胞表现出抗病毒反应减弱,但在感染后IL-4、IL-6和IL-10分泌过度。鲁平替韦可抑制屋尘螨致敏小鼠体内过度分泌的促炎细胞因子IL-6和TH-2细胞因子IL-4。[2]
鲁平替韦的体内动物实验是在鼻病毒感染的动物模型中进行的,例如感染人鼻病毒(HRV)的小鼠或棉鼠。动物通过口服或鼻内给药给予鲁平替韦,并通过定量PCR检测呼吸道病毒载量。同时评估打喷嚏、鼻涕和肺部炎症等临床症状。然而,现有文献中并未详细记录具体的实验方案。
药代性质 (ADME/PK)
鲁平替韦的分子量为598.66 g/mol,分子式为C31H39FN4O7。它是一种肽模拟抑制剂,纯度≥98%。该化合物应在推荐条件下储存。临床研究已对其半衰期、Cmax和生物利用度等详细的药代动力学参数进行了表征。作为一种抗病毒药物,鲁平替韦已进行口服给药的评估。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
鲁平替韦已在临床研究中进行评估,据报道耐受性良好。常见不良反应可能包括轻度至中度胃肠道不适、头痛或其他治疗期间出现的不良事件。临床试验中未报告任何重大安全问题。临床研究提供了全面的安全性数据。该化合物是一种研究工具,并非获批药物。
参考文献

[1]. In vitro antiviral activity of AG7088, a potent inhibitor of human rhinovirus 3C protease. Antimicrob Agents Chemother. 1999 Oct;43(10):2444-50.

[2]. Rupintrivir reduces RV-induced TH-2 cytokine IL-4 in precision-cut lung slices (PCLS) of HDM-sensitized mice ex vivo. Respir Res. 2019 Oct 22;20(1):228.

[3]. Structure-based design, synthesis, and biological evaluation of irreversible human rhinovirus 3C protease inhibitors. 3. Structure-activity studies of ketomethylene-containing peptidomimetics. J Med Chem. 1999 Apr 8;42(7):1203-12.

其他信息
鲁平替韦(Rupintrivir)是一种在研的鼻病毒3C蛋白酶抑制剂,用于治疗人鼻病毒(HRV)感染。在H1-HeLa细胞保护试验中,鲁平替韦对所有48种HRV血清型均有效。它旨在对抗由鼻病毒引起的普通感冒。鲁平替韦是一种肽模拟抑制剂,对人鼻病毒具有活性。它是一种不可逆的3C蛋白酶抑制剂,可阻断病毒蛋白加工,从而抑制病毒复制。其用于治疗病毒感染的用途正在研究中。作用机制:3C蛋白酶(3CP)是鼻病毒复制的核心酶。AG7088通过与该酶结合并抑制其活性,从而阻止呼吸道细胞中鼻病毒的复制,进而预防感冒症状的发生。
鲁平替韦是一种强效且选择性的不可逆人鼻病毒3C蛋白酶抑制剂。它也被称为AG7088。鲁平替韦(Rupintrivir)对48种人鼻病毒(HRV)血清型具有抗病毒活性,平均EC50值为0.023 μM。它还具有免疫调节特性。临床研究表明,鲁平替韦具有降低病毒载量和缓解普通感冒患者症状的潜力。它是一种研究性化合物,尚未获批上市。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C31H39FN4O7
分子量
598.66
精确质量
598.28
元素分析
C, 62.19; H, 6.57; F, 3.17; N, 9.36; O, 18.71
CAS号
223537-30-2
PubChem CID
6440352
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.213g/cm3
沸点
866.7ºC at 760mmHg
熔点
170-171°C
闪点
477.9ºC
蒸汽压
1.87E-30mmHg at 25°C
折射率
1.537
LogP
3.935
tPSA
156.7
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
16
重原子数目
43
分子复杂度/Complexity
1010
定义原子立体中心数目
4
SMILES
CCOC(=O)/C=C/[C@H](C[C@@H]1CCNC1=O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)F)CC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C3=NOC(=C3)C
InChi Key
CAYJBRBGZBCZKO-BHGBQCOSSA-N
InChi Code
InChI=1S/C31H39FN4O7/c1-5-42-27(38)11-10-24(16-21-12-13-33-29(21)39)34-30(40)22(15-20-6-8-23(32)9-7-20)17-26(37)28(18(2)3)35-31(41)25-14-19(4)43-36-25/h6-11,14,18,21-22,24,28H,5,12-13,15-17H2,1-4H3,(H,33,39)(H,34,40)(H,35,41)/b11-10+/t21-,22+,24+,28-/m0/s1
化学名
ethyl (S,E)-4-((2R,5S)-2-(4-fluorobenzyl)-6-methyl-5-(5-methylisoxazole-3-carboxamido)-4-oxoheptanamido)-5-((S)-2-oxopyrrolidin-3-yl)pent-2-enoate
别名
AG-7088; AG7088; AG 7088; 223537-30-2; ag7088; Ruprintrivir; Rupintrivir-d4; RGE5K1Q5QW;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~83.52 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。

配方 2 中的溶解度: 10% DMSO+90% Corn Oil: ≥ 1.67 mg/mL (2.79 mM)

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.6704 mL 8.3520 mL 16.7040 mL
5 mM 0.3341 mL 1.6704 mL 3.3408 mL
10 mM 0.1670 mL 0.8352 mL 1.6704 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • Chemical structure of AG7088.[1].In vitro antiviral activity of AG7088, a potent inhibitor of human rhinovirus 3C protease. Antimicrob Agents Chemother. 1999 Oct;43(10):2444-50.
  • In vitro activity of AG7088 against HRV serotypes.[1].In vitro antiviral activity of AG7088, a potent inhibitor of human rhinovirus 3C protease. Antimicrob Agents Chemother. 1999 Oct;43(10):2444-50.
  • Antiviral activity of AG7088 when added at various times after virus infection.[1].In vitro antiviral activity of AG7088, a potent inhibitor of human rhinovirus 3C protease. Antimicrob Agents Chemother. 1999 Oct;43(10):2444-50.
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