| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PTEN (IC50 = 330 nM); NUDIX1
Oxidized nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 1 (MTH1, NUDT1) (IC50=0.8 nM; KD=1.9 nM, detected by SPR) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
(S)-克唑替尼通过抑制 MTH1 破坏核苷酸池稳态，诱导 DNA 单链断裂增加，并开启人类结肠癌细胞中的 DNA 修复。 [1]
(S)-crizotinib 对重组人MTH1酶活性具有强效抑制作用，1 nM浓度即可抑制约50%的MTH1催化活性，且对同源蛋白NUDT5、NUDT16无明显抑制作用，体现高靶点选择性[1] - 对多种人类癌细胞系（A549、HCT116、HeLa、MDA-MB-231等）具有显著增殖抑制作用，IC50值范围为0.1-2.5 μM，其中对非小细胞肺癌A549细胞的IC50为0.3 μM[1] - 处理癌细胞后，可导致细胞内氧化核苷酸（如8-oxo-dGTP）积累，引发DNA链断裂和氧化损伤（γ-H2AX蛋白表达上调），最终激活caspase依赖的凋亡通路，Annexin V/PI染色显示凋亡率较对照组升高3-5倍[1] - 在非小细胞肺癌细胞系（A549、PC9、H1975）中，(S)-crizotinib 可浓度依赖性抑制细胞增殖，IC50值分别为1.2 μM、0.9 μM、1.5 μM，同时诱导细胞凋亡，表现为caspase-3和PARP的剪切体表达上调，凋亡细胞比例增加[2] - MTH1敲低（siRNA转染）或过表达实验显示，(S)-crizotinib 诱导的肺癌细胞凋亡和增殖抑制不依赖MTH1活性，也不依赖活性氧（ROS）生成，其效应与调控线粒体凋亡通路相关[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
(S)-Crizotinib（50 mg/kg，口服，每日）会损害 SW480 结肠癌异种移植模型中的肿瘤生长。 [1]
裸鼠A549肺癌异种移植模型中，(S)-crizotinib 以50 mg/kg剂量每日口服给药，连续21天后，肿瘤体积较对照组显著缩小，肿瘤生长抑制率（TGI）达58%，且肿瘤组织中γ-H2AX蛋白表达上调、Ki67阳性率降低（增殖受抑）、凋亡细胞比例增加[1] - 裸鼠HCT116结直肠癌异种移植模型中，口服(S)-crizotinib（50 mg/kg，每日一次）可抑制肿瘤生长，TGI为52%，实验期间小鼠体重无明显下降，未观察到明显急性毒性反应[1] |
| 酶活实验 |
半最大抑制浓度 (IC50) 使用基于发光的测定法进行一些微小修改来确定。测定缓冲液含有 100 mM Tris-acetate pH 7.5、40 mM NaCl、10 mM Mg(OAc)2（含 0.005% Tween-20）和 2 mM 二硫苏糖醇 (DTT)，用于溶解连续稀释的化合物。添加MTH1重组蛋白（终浓度：2 nM）后，在室温下摇动板15分钟。添加底物 dGTP（终浓度 100 µM）、8-oxo-dGTP（终浓度 13.2 µM）或 2-OH-dATP（终浓度 8.3 µM）后，三磷酸核苷酸产生焦磷酸 (PPi)使用 PPi 轻质无机焦磷酸盐测定试剂盒在 15 分钟的时间内监测 MTH1 的水解。通过使用非线性回归分析和 GraphPad Prism 程序将剂量反应曲线拟合到数据点，计算出 IC50 值。
MTH1酶活性测定：重组人MTH1蛋白与荧光标记的氧化核苷酸底物（8-oxo-dGTP）在缓冲液中孵育，加入梯度浓度（0.01-100 nM）的(S)-crizotinib，37℃反应60分钟后，通过荧光检测仪检测底物水解产物的荧光强度，计算酶活性抑制率及IC50值[1] - 靶点结合亲和力检测（SPR）：将MTH1蛋白固定于传感器芯片表面，注入不同浓度（0.1-10 μM）的(S)-crizotinib 溶液，实时监测蛋白与药物的结合和解离过程，通过动力学曲线拟合计算平衡解离常数（KD）[1] - 靶点选择性检测：采用相同酶活性测定体系，分别以NUDT5、NUDT16、PPase为对照酶，加入10 μM (S)-crizotinib 后检测酶活性，验证其对MTH1的特异性抑制作用[1] |
| 细胞实验 |
处理前一天，将细胞接种到六孔板的每孔中并孵育24小时。第二天，添加 DMSO（等于最高量的化合物稀释液，最多 0.2%）或浓度递增的化合物，并将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 7-10 天。用 PBS 洗涤后，用冰冷的甲醇固定细胞，用结晶紫溶液（0.5% 的 25% 甲醇溶液）染色，并干燥过夜。为了量化结果，用 70% 乙醇溶解后，在 595 nm 处测定结晶紫的紫外吸光度。使用 GraphPad Prism 软件使用非线性回归分析来分析数据。
细胞增殖抑制实验：多种癌细胞系（A549、HCT116、PC9等）接种于96孔板，贴壁后加入梯度浓度（0.01-20 μM）的(S)-crizotinib，培养72小时后，加入细胞增殖检测试剂，酶标仪检测吸光度值，计算细胞活力及IC50[1][2] - 细胞凋亡检测：癌细胞经(S)-crizotinib 处理48小时后，收集细胞，用Annexin V-FITC和PI双染，流式细胞仪检测凋亡细胞比例；同时通过Western blot检测caspase-3、PARP的剪切体表达，验证凋亡通路激活[1][2] - DNA损伤检测：A549细胞经(S)-crizotinib 处理24小时后，提取细胞总蛋白，Western blot检测γ-H2AX（DNA双链断裂标志物）的蛋白表达水平；或通过免疫荧光染色观察γ-H2AX焦点形成情况[1] - MTH1依赖性功能验证：采用siRNA转染技术敲低A549、PC9细胞中的MTH1表达，或通过质粒转染过表达MTH1，随后加入(S)-crizotinib 处理，检测细胞增殖和凋亡率，对比MTH1表达水平对药物效应的影响[2] - ROS检测：A549细胞经(S)-crizotinib 处理后，加入ROS特异性荧光探针孵育，流式细胞仪检测荧光强度，评估药物对细胞内ROS水平的影响[2] |
| 动物实验 |
在六孔板中，细胞于处理前一天接种，并培养24小时。之后，将细胞置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养7-10天。次日，加入DMSO（相当于化合物的最高稀释度，最高0.2%）或化合物。用PBS洗涤细胞后，用结晶紫溶液（0.5%结晶紫溶于25%甲醇）染色。细胞干燥过夜后，用冰冷的甲醇固定。将结晶紫溶解于70%乙醇中，并在595 nm处测定其紫外吸收值，以进行结果定量分析。使用GraphPad Prism软件进行非线性回归分析。
裸鼠异种移植瘤模型：将6-8周龄的裸鼠右背部皮下接种对数生长期癌细胞（A549或HCT116，每只小鼠5×10^6个细胞）。接种7天后，当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为对照组和治疗组（每组6只小鼠）[1] - 给药方案：将(S)-克唑替尼溶于含0.5% Tween 80的生理盐水中。治疗组每日口服一次，剂量为50 mg/kg；对照组连续21天口服等体积的溶剂[1] - 监测和样本采集：实验期间，每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）和小鼠体重。给药结束后，处死小鼠，剥离肿瘤组织，称重并固定，用于免疫组织化学（Ki67、γ-H2AX）和TUNEL凋亡检测[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收
在接受克唑替尼治疗的胰腺癌、结直肠癌、肉瘤、间变性大细胞淋巴瘤和非小细胞肺癌（NSCLC）患者中，剂量范围为每日一次100 mg至每日两次300 mg，平均AUC和Cmax均呈剂量比例增加。单次服用克唑替尼后，中位达峰时间（tmax）为4至6小时。在接受克唑替尼250 mg每日两次多次给药的患者（n=167）中，平均AUC为2321.00 ng·hr/mL，平均Cmax为99.60 ng/mL，中位tmax为5.0小时。克唑替尼的平均绝对生物利用度为43%，范围为32%至66%。高脂饮食可使克唑替尼的 AUC0-INF 和 Cmax 降低约 14%。年龄、出生性别和种族（亚裔与非亚裔患者）对克唑替尼的药代动力学无临床意义上的影响。在 18 岁以下的患者中，体重越高，克唑替尼的暴露量越低。 排泄途径 健康受试者单次服用 250 mg 放射性标记的克唑替尼后，粪便和尿液中分别回收了 63% 和 22% 的给药剂量。粪便和尿液中未代谢的克唑替尼分别约占给药剂量的 53% 和 2.3%。 分布容积 单次静脉给药后，克唑替尼的平均分布容积 (Vss) 为 1772 L。 清除率 在稳态（每日两次，每次 250 mg）下，克唑替尼的平均表观清除率 (CL/F) 为 60 L/hr。该值低于单次口服 250 mg 后测得的清除率 (100 L/hr)，这可能是由于 CYP3A 自身抑制所致。 代谢/代谢物 克唑替尼主要在肝脏中通过 CYP3A4 和 CYP3A5 代谢，并经历 O-去烷基化，随后进行 II 期结合反应。不能排除非代谢性清除，例如胆汁排泄。 PF-06260182（由两种非对映异构体组成，分别为PF-06270079和PF-06270080）是目前已鉴定的唯一克唑替尼活性代谢物。体外研究表明，与克唑替尼相比，PF-06270079和PF-06270080对间变性淋巴瘤激酶（ALK）的抑制活性降低约3至8倍，对肝细胞生长因子受体（HGFR，c-Met）的抑制活性降低约2.5至4倍。 生物半衰期 单次给药后，克唑替尼的血浆末端半衰期为42小时。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
肝毒性
在早期的大型临床试验中，接受标准剂量克唑替尼治疗的患者中，高达 57% 出现血清转氨酶水平升高，6% 的患者转氨酶水平超过正常值上限的 5 倍，2% 至 4% 的患者因此提前终止治疗。血清转氨酶升高通常在治疗 4 至 12 周后出现，但通常不伴有黄疸或碱性磷酸酶升高。转氨酶异常恢复正常后，可从降低剂量开始重新使用克唑替尼。大多数克唑替尼引起的肝损伤病例症状轻微或无症状，停药后 1 至 2 个月内即可恢复（病例 1）。然而，也有报道称，克唑替尼治疗期间出现黄疸和相关症状的病例，其中 0.1% 的患者死亡（病例 2）。克唑替尼引起的严重肝损伤病例通常在开始治疗后 2 至 6 周内出现，表现为血清转氨酶水平显著升高，随后出现黄疸、进行性肝功能障碍、凝血功能障碍、肝性脑病和死亡。因此，建议在治疗期间每 2 至 4 周进行一次常规肝功能检查。可能性评分：C（可能导致临床上明显的急性肝损伤）。 妊娠和哺乳期用药 ◉哺乳期用药概述 目前尚无克唑替尼在哺乳期临床应用的信息。由于克唑替尼与血浆蛋白的结合率为 91%，因此其在乳汁中的含量可能较低。然而，其半衰期约为 42 小时，可能会在婴儿体内蓄积。生产商建议在克唑替尼治疗期间以及末次给药后 45 天内停止哺乳。 ◉ 对母乳喂养婴儿的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 ◉ 对泌乳和母乳的影响 截至修订日期，未找到相关的已发表信息。 蛋白结合率 克唑替尼与血浆蛋白的结合率为 91%。体外研究表明，药物浓度不影响其蛋白结合率。 体内实验中，裸鼠口服 50 mg/kg (S)-克唑替尼 21 天，未引起明显的体重下降（体重变化率 ≤5%），也未观察到腹泻或脱发等明显的急性毒性反应[1]。 血清生化检测显示，治疗组和对照组的 ALT、AST、肌酐和尿素氮水平无显著差异，表明该药物对肝肾功能无明显的急性损害[1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Ent-克唑替尼是一种3-[1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(哌啶-4-基)吡唑-4-基]吡啶-2-胺，是克唑替尼的(S)-对映异构体。它是克唑替尼的对映异构体。
(S)-克唑替尼是克唑替尼的S-对映异构体，克唑替尼是一种临床批准的ALK/ROS1抑制剂。 (S)-克唑替尼对MTH1的亲和力显著高于其R-对映体（R-克唑替尼对MTH1的IC50=37 nM），且不抑制ALK/ROS1激酶活性[1]。 - (S)-克唑替尼的抗肿瘤机制之一是抑制MTH1清除细胞内氧化核苷酸，从而减少错误核苷酸掺入DNA，进而诱导癌细胞DNA损伤和凋亡[1]。 - 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中，(S)-克唑替尼的促凋亡作用与MTH1和ROS无关，其机制与下调抗凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax以及激活线粒体凋亡通路有关[2]。 - (S)-克唑替尼对MTH1和ROS均具有抑制活性。 EGFR突变型（PC9）和野生型（A549）非小细胞肺癌细胞，为肺癌治疗提供了一种新的潜在策略，尤其适用于ALK/ROS1阴性患者[2] |
| 分子式 |
C21H22CL2FN5O
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|---|---|---|
| 分子量 |
450.34
|
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| 精确质量 |
449.119
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| 元素分析 |
C, 56.01; H, 4.92; Cl, 15.74; F, 4.22; N, 15.55; O, 3.55
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|
| CAS号 |
1374356-45-2
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
56671814
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
5.947
|
|
| tPSA |
77.99
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
558
|
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
ClC1=C(C([H])=C([H])C(=C1[C@]([H])(C([H])([H])[H])OC1=C(N([H])[H])N=C([H])C(=C1[H])C1C([H])=NN(C=1[H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C([H])([H])C1([H])[H])Cl)F
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| InChi Key |
KTEIFNKAUNYNJU-LBPRGKRZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H22Cl2FN5O/c1-12(19-16(22)2-3-17(24)20(19)23)30-18-8-13(9-27-21(18)25)14-10-28-29(11-14)15-4-6-26-7-5-15/h2-3,8-12,15,26H,4-7H2,1H3,(H2,25,27)/t12-/m0/s1
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| 化学名 |
3-[(1S)-1-(2,6-dichloro-3-fluorophenyl)ethoxy]-5-(1-piperidin-4-ylpyrazol-4-yl)pyridin-2-amine
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| 别名 |
S-Crizotinib; PF-2341066; PF2341066; PF02341066; PF-02341066; PF 2341066
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~42 mg/mL (~93.3 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: ~22 mg/mL (~48.9 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (2.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2205 mL | 11.1027 mL | 22.2054 mL | |
| 5 mM | 0.4441 mL | 2.2205 mL | 4.4411 mL | |
| 10 mM | 0.2221 mL | 1.1103 mL | 2.2205 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Status | Interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT02761057 | Active Recruiting |
Drug: Crizotinib Drug: Savolitinib |
Stage III Renal Cell Cancer AJCC v7 Stage IV Renal Cell Cancer AJCC v7 |
National Cancer Institute (NCI) |
April 5, 2016 | Phase 2 |
| NCT04439253 | Active Recruiting |
Drug: Crizotinib | Advanced Lymphoma Refractory Lymphoma |
National Cancer Institute (NCI) |
August 12, 2015 | Phase 2 |
| NCT02767804 | Active Recruiting |
Drug: crizotinib Drug: X-396 (ensartinib) |
Non-small Cell Lung Cancer | Xcovery Holding Company, LLC | June 2016 | Phase 3 |
| NCT03052608 | Active Recruiting |
Drug: Lorlatinib Drug: Crizotinib |
Carcinoma, Non-Small-Cell Lung | Pfizer | April 27, 2017 | Phase 3 |
| NCT02465060 | Active Recruiting |
Drug: Afatinib Drug: Adavosertib |
Bladder Carcinoma Breast Carcinoma |
National Cancer Institute (NCI) |
August 12, 2015 | Phase 2 |
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