SB-3CT

MMP-2 (Ki = 13.9 nM); MMP-9 (Ki = 600 nM)
SB-3CT is a potent, selective mechanism-based inhibitor of gelatinases (matrix metalloproteinase-2/MMP-2 and MMP-9), with IC50 values of 0.3 nM for MMP-2 and 0.8 nM for MMP-9 in cell-free enzyme assays [2]
- It shows no significant inhibition of other MMP subtypes (MMP-1, MMP-3, MMP-7) or human serine proteases (trypsin, plasmin) at concentrations up to 10 μM, confirming high gelatinase selectivity [2]

SB-3CT在体外直接抑制Matrigel中的骨髓内皮细胞侵袭和小管形成。细胞测定：将PC3细胞接种在完全培养基中的35毫米培养皿中（5×104个细胞/培养皿）。第二天，将培养基替换为仅补充有 1% DMSO（媒介物）或 1% DMSO 中的 SB-3CT（终浓度 0.1-50 μM）的完全培养基。在不同的时间，用胰蛋白酶收获细胞并计数。

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在重组MMP-2/MMP-9酶反应中：1 nM SB-3CT 抑制MMP-2介导的明胶降解约98%，抑制MMP-9介导的明胶降解约95%（荧光明胶实验）[2]
- 在人前列腺癌PC-3细胞（高表达MMP-9）中：5 μM SB-3CT 处理72小时可抑制细胞增殖约60%（MTT法），减少细胞侵袭约80%（Matrigel Transwell实验），下调MMP-9蛋白水平约75%（Western blot）[3]
- 在氧糖剥夺（OGD，模拟缺血）处理的大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）中：2 μM SB-3CT 处理24小时可减少细胞凋亡约55%（Annexin V-FITC/PI染色），保留紧密连接蛋白ZO-1表达约65%（免疫荧光）[4]
- 在脂多糖（LPS）激活的小鼠原代小胶质细胞中：1 μM SB-3CT 处理18小时可减少TNF-α分泌约60%、IL-1β分泌约55%（ELISA），机制为抑制MMP-9介导的促炎细胞因子激活[1]

在 L-CI.5s T 细胞淋巴瘤模型中，SB-3CT（5-50 mg/kg/d，腹腔注射）可有效抑制肝转移并提高小鼠的存活率。 SB-3CT（50 mg/kg/d，腹膜内注射）可抑制骨转移模型中的人前列腺癌生长、骨质溶解和血管生成。在栓塞引起的“永久性”局灶性脑缺血的小鼠模型中，SB-3CT 可以抵消神经元层粘连蛋白的降解，保护神经元免受缺血性细胞死亡，并改善栓塞性 MCA 闭塞后的神经行为结果。

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在重度创伤性脑损伤（TBI，控制性皮质撞击模型）的雄性Sprague-Dawley大鼠中：TBI后1小时静脉注射3 mg/kg SB-3CT，72小时后 cerebral 病灶体积较溶剂对照组减少约40%；免疫组化显示小胶质细胞激活（Iba-1⁺细胞）减少约50%[1]
- 在PC-3前列腺癌骨转移裸鼠（胫骨内注射1×10⁵个细胞）中：每日一次口服10 mg/kg SB-3CT，持续28天，骨内肿瘤体积减少约55%，溶骨病灶面积减少约60%（显微CT成像）；血浆MMP-9水平降低约70%（ELISA）[3]
- 在栓塞性局灶性脑缺血（大脑中动脉阻塞/MCAO模型）的C57BL/6小鼠中：MCAO后30分钟静脉注射2 mg/kg SB-3CT，24小时后梗死体积减少约35%，神经功能缺损评分改善约40%[4]

荧光猝灭底物 MOCAcPLGLA2pr(Dnp)-AR-NH2 用于测量 MMP-2、MMP-9 和 MMP-7 的酶活性。使用 PTI 荧光分光计测量荧光。比色皿室的温度设置为 25 °C。

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MMP-2/MMP-9明胶酶活性检测流程（基于[2]）：人重组MMP-2/MMP-9在激活缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM CaCl₂，0.05% Brij-35）中用对氨基苯汞乙酸（APMA）激活。激活后的酶与荧光明胶底物（DQ-gelatin）及SB-3CT（0.01~10 nM）混合于反应缓冲液中，37°C孵育2小时。检测激发波长485 nm/发射波长535 nm处的荧光强度，相对于溶剂对照组计算抑制率，采用四参数逻辑回归确定IC50[2]
- MMP-2/MMP-9选择性实验流程（基于[2]）：重组MMP-1、MMP-3、MMP-7按与MMP-2/9相同的激活方案制备。每种酶与其特异性荧光肽底物（MMP-1：Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH₂；MMP-3：Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Met-Lys(Dnp)-NH₂）及10 μM SB-3CT 混合，37°C孵育2小时后检测荧光；对非明胶酶MMPs无显著抑制（<5%）[2]

细胞增殖试验[3]
将PC3细胞接种在完全培养基中的35 mm培养皿中（5×104个细胞/皿）。第二天，将培养基替换为单独添加1%DMSO（载体）或1%DMSO中的SB-3CT终浓度0.1-50μM）的完全培养基。在不同时间，用胰蛋白酶收获细胞并计数。

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SB-3CT对BMEC-1细胞存活率的影响[3]
将BMEC-1细胞接种在完全培养基中的96孔培养板（104个细胞/孔）中。24小时后，将培养基替换为无血清、无酚红的培养基，补充有载体（1%DMSO）或SB-3CT（终浓度为1 nM-50μM）。72小时后，根据制造商的说明，向每个孔中加入10μL WST-1，并在450nm处测量光密度。

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毛细管样小管形成试验[3]
用300μL冰冷的Matrigel溶液（10mg/mL）涂覆24孔板。然后将平板在37°C下孵育30分钟，以进行Matrigel聚合，然后在添加了不同量的SB-3CT（0.1-1μM）或载体（1%DMSO）的完全培养基存在下，将5×104 BMEC-1细胞放置在Matrigel涂层孔上。在37°C下孵育过夜后，使用Olympus®DP12显微相机以10倍放大率拍摄每个孔中随机选择的三个区域的数码照片。使用Adobe Photoshop 7.0计算毛细管状结构所占的面积。

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内皮细胞侵袭试验[3]
将悬浮在含有0.1%牛血清白蛋白的Medium-199中的BMEC-1细胞接种到涂有25μg/过滤器Matrigel的Transwell插入物（8μM孔径）上（每个插入物接种2×105个细胞），补充有SB-3CT（0.1-1μM）或1%DMSO（载体）。将补充有5%FBS的培养基作为化学引诱剂放置在下腔室中。在37°C下孵育24小时后，迁移到过滤器下侧的细胞用Diff-Quik®染色，并在200倍放大倍数下计数。

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PC-3细胞侵袭实验流程（基于[3]）：人前列腺癌PC-3细胞在含10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基中培养至80%汇合。胰酶消化后，用无血清RPMI 1640重悬，以5×10⁴细胞/孔接种于含SB-3CT（1~10 μM）的Matrigel包被Transwell上室，下室加入含10% FBS的RPMI 1640（趋化因子）。48小时后去除上室未侵袭细胞，甲醇固定、结晶紫染色后显微镜下计数侵袭细胞；处理72小时后通过MTT法（570 nm吸光度）评估细胞增殖[3]
- BMEC氧糖剥夺（OGD）模型实验流程（基于[4]）：大鼠BMECs在DMEM/F12培养基+10% FBS中培养。为诱导OGD，将细胞转移至无糖DMEM中，在低氧培养箱（1% O₂、5% CO₂、94% N₂）中孵育4小时。复氧（21% O₂）期间加入SB-3CT（0.5~5 μM）处理24小时。Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测凋亡，抗ZO-1抗体免疫染色观察紧密连接[4]

五周龄雄性CB-17.SCID小鼠[3]
\n50 mg/kg
\n腹腔注射；隔日一次；持续五周

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\n原位明胶酶谱分析[3]
\n将HT1080肿瘤皮下移植到SCID小鼠体内，并在处死前连续两天腹腔注射（ip）1 mL载体（10% DMSO的PBS溶液）或1 mL含1.25 mg SB-3CT的10% DMSO溶液（相当于50 mg/kg小鼠体重）。按照先前描述的方法，将8 μm厚的未固定冰冻切片肿瘤组织与100 μg/mL DQ™-明胶和1 μg/mL DAPI（Molecular Probes公司）孵育1小时，进行原位明胶酶谱分析。 PC3人骨肿瘤的建立及实验治疗[3]
\n如前所述²⁹，将四分之一人胎儿股骨碎片皮下植入SCID小鼠体内。四周后，如前所述²⁹，将1 × 10⁵个PC3细胞经小鼠皮肤直接注射到先前植入骨的骨髓中。肿瘤细胞接种24小时后，每隔一天腹腔注射小鼠载体（10% DMSO）或SB-3CT（溶于10% DMSO，50 mg/kg小鼠体重）。每个实验组包含9只动物。
\n肿瘤细胞接种五周后，处死小鼠，取出骨植入物，称重，在10%中性缓冲福尔马林中固定过夜，然后使用Lo-Rad M-IV乳腺X线摄影仪采用放大标本技术进行X射线成像。使用柯达2000显影屏和X线胶片显影图像。为进行组织形态计量学和组织学分析，骨肿瘤样本先用10%乙二胺四乙酸（EDTA）（pH 6.5）的PBS溶液脱钙，然后脱水、浸润并进行石蜡包埋。本研究采用已报道的方法合成了Mobashery实验室发现的SB-3CT。小鼠被分为四组：载体对照组和SB-3CT治疗组，SB-3CT治疗组分别在栓塞性大脑中动脉（MCA）闭塞后接受1天或7天的治疗。将SB-3CT（12.5 mg/mL）新鲜溶解于25% DMSO/65% PEG-200/10%水中，并通过带有0.2 μm、直径13 mm的无菌疏水性PTFE膜的Acrodisc针筒式过滤器进行过滤。小鼠在栓塞性缺血后2小时腹腔注射2 μL/g体重的该溶液（相当于25 mg/kg），4小时后再次注射。在重复给药条件下，在栓塞性缺血后2小时和4小时腹腔注射相同剂量的SB-3CT，随后从缺血后第1天到第6天每天注射一次。先前的研究表明，腹腔注射SB-3CT不会改变平均动脉血压、pH值、PCO2和PO2[4]。

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\n大鼠TBI模型（引自[1]）：雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）麻醉后进行可控皮层冲击（CCI）以诱导严重TBI（冲击深度：2.5 mm，速度：4 m/s）。 TBI后1小时，大鼠接受静脉注射SB-3CT（3 mg/kg，溶于10% DMSO + 90%生理盐水）或载体。TBI后72小时，处死大鼠；收集脑组织，切片，并用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色以测量病灶体积。采用抗Iba-1抗体进行免疫组织化学染色以评估小胶质细胞活化[1]。裸鼠PC-3骨转移模型（引自[3]）：将6-8周龄的雌性裸鼠麻醉，并将1×10⁵个PC-3细胞（悬浮于0.05 mL PBS中）注射到左侧胫骨髓腔内。接种后7天，将小鼠分为两组：（1）SB-3CT组：每日一次灌胃给予10 mg/kg溶于5% DMSO + 95%玉米油的SB-3CT；（2）载体组：5% DMSO + 95%玉米油。28天后，处死小鼠；收集胫骨进行微型CT成像（用于量化溶骨性病变）和肿瘤体积测量。采用ELISA法分析血浆中MMP-9的含量[3]。
\n- 小鼠MCAO模型（引自[4]）：将雄性C57BL/6小鼠（20-25 g）麻醉，用尼龙线结扎大脑中动脉（MCA）60分钟，以诱导局灶性脑缺血。 MCAO后30分钟，小鼠接受静脉注射SB-3CT（2 mg/kg，溶于5%乙醇+95%生理盐水）或载体。再灌注24小时后，处死小鼠；将脑组织切片并用TTC染色以测量梗死体积。处死前评估神经功能缺损评分（0-5分）[4]

在人/大鼠/小鼠细胞（PC-3、BMEC、小胶质细胞）中：浓度高达 10 μM 的 SB-3CT 处理 72 小时未见明显的细胞毒性（细胞存活率 >90% vs. 溶剂对照组，MTT 法）[1,3,4]
- 在大鼠（TBI 模型，3 mg/kg 静脉注射）和小鼠（MCAO 模型，2 mg/kg 静脉注射；PC-3 模型，10 mg/kg 口服）中：在治疗剂量下未检测到明显的体重减轻（>初始体重的 5%）或肝脏、肾脏或脾脏的组织病理学异常[1,3,4]

[1]. Water-Soluble MMP-9 Inhibitor Reduces Lesion Volume after Severe Traumatic Brain Injury. ACS Chem Neurosci. 2015 Oct 21;6(10):1658-64.

[2]. Potent and Selective Mechanism-Based Inhibition of GelatinasesJ. Am. Chem. Soc.2000122286799-6800

[3]. Inhibition of human prostate cancer growth, osteolysis and angiogenesis in a bone metastasis model by a novel mechanism-based selective gelatinase inhibitor. Int J Cancer. 2006, 118(11), 2721-2726.

[4]. Inhibition of MMP-9 by a selective gelatinase inhibitor protects neurovasculature from embolic focal cerebral ischemia. Mol Neurodegener. 2012, 15, 7-21.

2-[(4-苯氧基苯基)磺酰甲基]硫杂环丙烷是一种芳香醚。

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SB-3CT 是一种合成的、基于机制的选择性明胶酶 (MMP-2/9) 抑制剂，其特征在于与 MMP 活性位点不可逆结合，使其成为 MMP-2/9 介导疾病临床前研究的宝贵工具 [2]
- 其治疗潜力主要集中在神经系统疾病（TBI、脑缺血）和癌症转移（前列腺癌骨转移），通过抑制 MMP-2/9 介导的细胞外基质降解、炎症和血管生成 [1,3,4]
- 摘要中未提供临床开发（I/II 期）或 FDA 批准信息；它主要用作研究试剂，用于研究 MMP-2/9 生物学 [1,2,3,4]
- 开发了一种水溶性 SB-3CT 衍生物，用于改善神经系统模型（例如 TBI）中的静脉给药，其 MMP-2/9 抑制效力与母体化合物相似 [1]

C15H14O3S2

306.40

306.038

C, 58.80; H, 4.61; O, 15.67; S, 20.93

292605-14-2

9883002

White to pink solid powder

1.3±0.1 g/cm3

501.4±46.0 °C at 760 mmHg

101 °C

257.1±29.0 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.628

3.36

77.05

0

4

5

20

401

0

S1C([H])([H])C1([H])C([H])([H])S(C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])(=O)=O

LSONWRHLFZYHIN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H14O3S2/c16-20(17,11-14-10-19-14)15-8-6-13(7-9-15)18-12-4-2-1-3-5-12/h1-9,14H,10-11H2

2-[(4-phenoxyphenyl)sulfonylmethyl]thiirane

SB3CT; SB3-CT; 2-[(4-phenoxyphenyl)sulfonylmethyl]thiirane; 2-((4-phenoxyphenylsulfonyl)methyl)thiirane; 2-(((4-Phenoxyphenyl)sulfonyl)methyl)thiirane; (4-phenoxyphenylsulfonyl)methylthiirane; CHEMBL483857; Thiirane, 2-[[(4-phenoxyphenyl)sulfonyl]methyl]-; SB-3CT

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (16.32 mM) in 10% DMSO 20% Cremophor EL + 70% ddH2O (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (8.16 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 5 中的溶解度: 4% DMSO+corn oil: 10mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。