Sigma-2 receptor (Kd = 0.12 nM)
Sigma-1 receptor (Kd = 17 nM) [1]

IC50 (σ1) = 17 nM，IC50 (σ2) = 0.12 nM，IC50 (5-HT1A) = 21000 nM，IC50 (5-HT1A) = 2000 nM，IC50 (D2) = 800 nM，以及 IC50 (α1) = 330 nM 是盐酸西美美辛的结合亲和力[1]。在不同的细胞系（HaCaT、Hsc-4、HeLa 和 MCF-7，神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y 和胶质母细胞瘤细胞系 U-87MG）中，盐酸西美美辛（0-50μM；8 小时）可诱导细胞死亡[2]。在HaCaT和U-87MG细胞中，盐酸西拉美辛（0–40 μM；2–48小时）可激活caspase[2]。

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西拉美辛在浓度高于20 μM时，可在8小时内诱导多种细胞系（HaCaT、Hsc-4、HeLa、MCF-7、SH-SY5Y、U-87MG）的细胞死亡，浓度为40-50 μM时细胞死亡率达90%。泛caspase抑制剂Z-VAD-FMK显著降低了HaCaT和HeLa细胞的细胞死亡，但对缺乏caspase-3的MCF-7细胞无影响。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64d对所有细胞系均无影响。亲脂性抗氧化剂α-生育酚（0.3 mM）能有效抑制所有细胞系的细胞死亡[1]。
浓度低于20 μM时，西拉美辛在8小时内不影响HaCaT细胞的活力，但在长时间孵育（48小时）后会降低细胞活力[1]。
在所有测试的西拉美辛浓度下，半胱天冬酶（DEVDase）活性均升高。浓度≥25 μM时，DEVDase活性的检测时间显著提前（4小时），而低浓度时则需要48小时。α-生育酚在25 μM时能显著抑制半胱天冬酶的激活，但在40 μM时抑制作用减弱。在U-87MG细胞中，caspase活化水平显著低于HaCaT细胞[1]。浓度≥25 μM的西拉美辛可在15分钟内降低HaCaT和U-87MG细胞的线粒体膜电位（MMP），Z-VAD-FMK或E-64d均不能阻止这一过程，但α-生育酚可显著抑制。浓度≤10 μM时，大多数细胞的MMP维持在48小时[1]。西拉美辛可诱导心磷脂过氧化（通过NAO染色评估）和线粒体的主要结构改变，α-生育酚可显著抑制这些改变。在HaCaT细胞中，浓度≥25 μM的西拉美辛可在15分钟内诱导细胞色素c释放到胞质中，而α-生育酚可抑制这一过程[1]。
西拉美辛可在15分钟内产生大量活性氧（ROS），尤其是在高浓度下，而α-生育酚可有效抑制这一过程。在10 μM浓度下，ROS峰值出现在8小时。亲水性抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（8 mM）不影响细胞活力或线粒体膜电位（MMP）的丧失[1]。
透射电镜显示，用25-40 μM的西拉美辛处理HaCaT细胞6小时后，细胞呈现凋亡形态（染色质浓缩、凋亡小体），而α-生育酚可抑制这一过程。U-87MG细胞在40 μM浓度下呈现圆形和空泡化，但凋亡程度很低。在两种细胞系中，高尔基体囊泡均出现扩大和空泡化，尤其是在较高浓度下；α-生育酚可减轻但不能完全阻止这种现象[1]。
西拉美辛在所有测试浓度（5-40 μM）下均导致溶酶体示踪剂绿色标记物（LysoTracker Green）积累在15分钟内迅速减少，Z-VAD-FMK、E-64d或α-生育酚均不能阻止这种减少。然而，即使延长孵育时间，基于洋地黄皂苷的组织蛋白酶活性测定或胞质组分中的组织蛋白酶L免疫检测均未检测到溶酶体膜通透性（LMP）。 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性证实，在浓度低于 20 μM 时，溶酶体膜通透性 (LMP) 可持续 7 小时 [1]。
西拉美辛 导致组织蛋白酶 L、B 和 C 的前体积累，但未加工成熟，表明溶酶体降解受损。自噬标志物 LC3-II 随时间积累；免疫细胞化学显示，LC3 阳性囊泡与 LAMP-2 阳性囊泡不共定位，提示自噬体与溶酶体的融合受损 [1]。
西拉美辛 即使在 40 μM 浓度下，30 分钟内也未引起内质网膜通透性改变（通过 Fluo-4 细胞内钙离子浓度测定评估）。在 40 μM 浓度下，6 小时后在 U-87MG 细胞中观察到一些内质网肿胀，这可能是间接效应 [1]。

SA4503 或西拉美辛与 MEM（以及 AMA）联合给药可减少大鼠的静止不动时间。 西拉美辛 此前有报道称其在小鼠癌症模型中具有显著的抗癌活性（参考文献：Ostenfeld 等，2005），但本文并未提供新的体内实验结果 [1]。

细胞活力检测：将细胞以 0.5×10^5 个细胞/孔的密度接种于 24 孔板中，用递增浓度的西拉美辛处理 8-48 小时，然后用 Annexin V 和碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。活细胞定义为 Annexin V/PI 双阴性细胞。每个实验重复两次，至少进行两次独立实验 [1]。
半胱天冬酶活性测定：用含去垢剂的半胱天冬酶缓冲液（50 mM HEPES、200 mM NaCl、10% 蔗糖、0.1% CHAPS、5 mM MgCl2、0.02% BSA、1% NP-40、0.5% Triton X-100，pH 7.5）制备总细胞提取物，超声处理，离心。将 75 μg 蛋白质与 10 μM 荧光底物 Ac-DEVD-AFC 孵育。使用微孔板读数仪在 37°C 下测量初始速度（激发波长 400 nm，发射波长 505 nm）。重复三次独立实验 [1]。
线粒体膜电位：用 JC-1 (3.5 μg/mL) 染色 15 分钟的细胞，通过流式细胞术进行分析。红色细胞被认为是具有完整线粒体的细胞。此外，还进行了 NAO (50 nM) 染色以检测心磷脂完整性 [1]。
溶酶体 pH 值：细胞用 LysoTracker Green DND-26 (40 nM) 染色 10 分钟，然后通过流式细胞术进行分析 [1]。
溶酶体膜通透性测定：细胞用西拉美辛处理，然后在冰上用洋地黄皂苷 (15-200 μg/mL) 在醋酸盐缓冲液（50 mM 乙酸钠，150 mM 氯化钠，0.5 mM EDTA，pH 5.6）中孵育 12 分钟。使用 Z-FR-AMC (30 μM) 和 5 mM DTT（激发波长 380 nm，发射波长 460 nm）通过荧光法测定半胱氨酸蛋白酶活性。比较胞质活性（仅裂解质膜）与总活性（裂解所有膜）[1]。
细胞色素c释放：使用洋地黄皂苷（15-30 μg/mL）制备胞质提取物，然后用抗细胞色素c抗体进行Western blot分析[1]。
活性氧（ROS）测定：将细胞与5 μM CM-H2DCFDA孵育40分钟，然后通过流式细胞术进行分析[1]。
Western blot：将RIPA缓冲液中的总提取物进行电泳分离，在12.5%或15% SDS-PAGE凝胶上进行电泳，然后转移至硝酸纤维素膜，用抗组织蛋白酶L、LC3和β-肌动蛋白的抗体进行检测[1]。
免疫细胞化学：将细胞生长在聚赖氨酸包被的盖玻片上，用冷甲醇固定，用3% BSA封闭，然后与抗LC3（兔）和抗LAMP-2A（鼠）一抗孵育。抗体孵育后，使用荧光二抗（绿色和红色），用ProLong Gold抗淬灭剂封片，在荧光显微镜下观察[1]。
透射电镜：细胞用2%戊二醛固定，用含1.5%铁氰化钾的2%四氧化锇后固定，用1.5%醋酸铀酰整体染色，经乙醇系列脱水，包埋于环氧树脂中。切取超薄切片（60-70 nm），用Philips CM100透射电镜观察。使用网格进行高尔基体腔立体学分析：计数高尔基体腔膜的交叉点，计算相对表面密度，即交叉点长度与细胞质面积的比值[1]。

老鼠

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Cell Death Dis.2013 Oct 3;4:e818.

西拉美辛最初由H. Lundbeck A/S公司开发。研究表明，它是一种强效的细胞死亡诱导剂，具有抗癌活性。一些研究报道该化合物可作为溶酶体趋向性去污剂发挥作用（例如，Ostenfeld等人，2005，2008），但本研究表明，细胞死亡主要通过线粒体不稳定而非溶酶体膜通透性增加介导。该化合物还会影响高尔基体的形态和自噬通量。西拉美辛不太可能仅通过σ-2受体发挥作用；相反，它在细胞内具有多个分子靶点[1]。

C30H32CLFN2O

491.05

490.218

224177-60-0

Siramesine;147817-50-3;Siramesine fumarate;163630-79-3

9891778

White to off-white solid powder

225 °C

7.353

17.4

1

3

6

35

656

0

ILSRGIFRZZSGPN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C30H31FN2O.ClH/c31-25-12-14-26(15-13-25)33-21-23(27-9-2-4-11-29(27)33)7-5-6-18-32-19-16-30(17-20-32)28-10-3-1-8-24(28)22-34-30;/h1-4,8-15,21H,5-7,16-20,22H2;1H

1'-[4-[1-(4-fluorophenyl)indol-3-yl]butyl]spiro[1H-2-benzofuran-3,4'-piperidine];hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.09 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。