DNA gyrase

Sitafloxacin (DU6859a) 一水合物对野生型 ATCC 49619、gyrA 突变体 SP39 和 parC 突变体 1026523 肺炎链球菌菌株表现出抗菌活性，MIC 值分别为 0.03、0.12 和 0.06 mg/L[1]。对于喹诺酮敏感的肺炎链球菌菌株，西他沙星（DU6859a）一水合物具有抗菌活性，EG 00218 菌株和 EG 00093 菌株的 MIC 值分别为 0.03 mg/L 和 0.03 mg/L[1]。 DNA 旋转酶和拓扑异构酶 IV (TopoIV) 被西他沙星 (DU6859a) 一水合物抑制，>IC50 分别为 4.38 和 3.12 mg/L[1]。

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与加替沙星、莫西沙星和其他受试喹诺酮类药物相比，DC-159a和西他沙星对喹诺酮类敏感菌株和肺炎链球菌的第一步parC突变体均表现出强效抗菌活性、低突变选择频率、低MPC和窄突变选择窗。DC-159a和西他沙星对单gyrA或parC突变体的MIC比相对于野生型菌株相对较低，对DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的IC（50）比较低。 结论：DC-159a和西他沙星比加替沙星、莫西沙星和其他喹诺酮类药物具有更平衡的双重靶向活性。此外，DC-159a和西他沙星选择第一步和第二步抗性突变体的倾向较低[1]。

西他沙星一水合物（DU6859a；12.5–100 mg/kg；IR；每天一次，持续 4 周；雌性 BALB/c 小鼠）具有抗菌特性。 M.没有足垫肿胀的迹象，并且可以从感染的足垫中分离出溃疡细胞[2]。

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使用小鼠脚垫系统在体内评估了新型氟喹诺酮西他沙星（DU-6859a）对溃疡分枝杆菌的疗效。当小鼠以每天25mg/kg体重的剂量喂食西他沙星时，小鼠脚垫中溃疡分枝杆菌的生长完全受到抑制；另一方面，每天100mg/kg体重的氧氟沙星也观察到了类似的效果。在利福平存在的情况下，西他沙星的上述剂量可以减少75%以实现完全抑制，而在类似情况下，氧氟沙星的剂量只能减少50%。无论是单独使用还是与利福平联合使用，西他沙星都具有杀菌作用。结果表明，西他沙星应作为治疗溃疡分枝杆菌感染的化疗药物进行评估[2]。

对肺炎链球菌DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的抑制活性测定[1]
DNA旋转酶超螺旋和TopoIV脱羧酶测定如前所述22,23进行，但稍作修改。对于DNA旋转酶超螺旋分析，反应混合物含有40 mM Tris-HCl（pH 7.5）、30 mM KCl、5 mM MgCl2、1 mM亚精胺、4 mM ATP、1 mM二硫苏糖醇（DTT）和每毫升20µg BSA。每种纯化的GyrA和GyrB与0.1µg松弛的pBR322质粒DNA在37°C下孵育60分钟。 对于TopoIV脱氮测定，反应混合物含有40 mM Tris-HCl（pH 7.5）、20 mM KCl、5 mM MgCl2、0.5 mM ATP、1 mM DTT和每毫升50µg BSA。脱氮活性是在37°C下使用1 U的每种纯化ParC和ParE以及0.4µg的链状动基质DNA（k-DNA）进行60分钟。

细菌菌株和抗菌药物敏感性试验[1]
使用两种喹诺酮类敏感的肺炎链球菌菌株（EG00093和EG00218）和两种第一步parC突变体（60和1026523）进行突变体选择实验，这两种菌株在gyrA、gyrB、parC和parE基因的QRDR中没有突变。2002年，EG00093和EG00218被选为日本监测收集的喹诺酮类敏感肺炎链球菌的代表性菌株。在parC中携带单个QRDR突变的菌株60（Ser-79→Tyr）和具有gyrA突变的分离物SP39（Ser-81→Phe）都是ATCC 49619的突变体。菌株1026523是一种临床分离株，在parC（Ser-79→Phe）和parE（Ile-460→Val）的QRDR中携带突变组合，其从2003年的GLOBAL监测研究中获得（Focus Bio-Inova股份有限公司，Herndon，VA，USA）。根据标准琼脂稀释法，至少进行两次MIC测定。20

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突变体选择频率和MPC的确定[1]
突变体选择频率的测定和MPC实验同时进行。测量突变频率和MPC的方法是对之前描述的方法的修改。21每个分离物在35°C下在含有5%羊血的心脏输注琼脂上生长12小时。然后将几个菌落悬浮在无菌PBS中，浊度相当于0.5 McFarland标准（1×108cfu/mL）。将悬浮液（20mL）平均分为四个烧瓶，每个烧瓶含有500mL新鲜BHIY肉汤（总体积为2L），并在不摇晃的情况下再孵育6小时。然后通过离心将培养物浓缩10至30倍（在20°C下离心5000g 30分钟），使浓度达到1010-1011cfu/mL。将100µL细菌悬浮液（含109-1010cfu）的等分试样铺在含有10%马去纤维蛋白血的BHI琼脂平板上，每种喹诺酮类药物的MIC都是其倍数。将含有喹诺酮类药物的平板在35°C下孵育72小时，将无抗生素平板在35℃下孵育16-24小时。突变选择频率计算为72小时时耐药菌落数与菌落总数的比值。每种喹诺酮类药物的MPC被确定为当在琼脂平板上散布超过1010个细菌并在35°C下孵育72小时时，防止耐药菌落生长的最低浓度。

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QRDR的PCR扩增和DNA序列分析[1]
通过PCR研究gyrA、gyrB、parC和parE基因的QRDR中是否存在突变。用于扩增gyrA QRDR的引物序列如下：SPGA3，5′-GTCATCTGACAAAGGAGAGAGAGGAAGG-3′（位置25至49）和SPGA6，5′-CAATCTGTACGAACGTAGGAC-3′（位置715至739）。为了扩增脑回B QRDR，使用了SPGB3:5′-TTACAATCGCCTCTCTCAGTGAAGC-3′（位置1070至1094）和SPGB4:5′-CTCCAACTGACATAGG-3′（位置1621至1646）；用于扩增parC QRDR，SPPC1:5′-GGCTTTTGTGTATCTTATGTCTAACATTC-3′（位置-14至27）和SPPC6:5′-AAACTGCAGCATTAGACCTCAGC-3′（位548至573），以及用于扩增parE QRDR，SPE3:5′-AGTGTGGATGGAATAGTGTCT-3′（位1061至1084）和SPPE4:5′-GGACATTCTTGTAAGAGGTGGGAG-3′（位于1615至1638）。扩增在总体积为50µL的条件下进行，其中含有1µL模板DNA、4µL每种脱氧核苷三磷酸（每种2.5mM）、5µL 10×Ex-Taq DNA聚合酶缓冲液、1µL每一种引物（10pmol/µL）和0.25µL Ex-Taq脱氧核糖核酸聚合酶（5U/μL）。扩增条件为94°C 2分钟，98°C 20秒35个循环，62°C 2 min和72°C 3 min，最终在68°C下延长3 min。根据制造商的说明，使用ABI PRISM 3100 Avant遗传分析仪对PCR产物进行DNA测序。

动物/疾病模型： BALB/c 雌性小鼠[2]
剂量： 12.5、25、50 和 100 mg/kg
给药途径： 口服（灌胃）；每日一次，持续 4 周
实验结果： 抑制溃疡分枝杆菌及其细胞的生长。

[1]. Dual-targeting properties of the 3-aminopyrrolidyl quinolones, DC-159a and sitafloxacin, against DNA gyrase and topoisomerase IV: contribution to reducing in vitro emergence of quinolone-resistant Streptococcus pneumoniae. J Antimicrob Chemother. 2008 Jul;62(1):98-104.

[2]. Activities of sitafloxacin (DU-6859a), either singly or in combination with rifampin, against Mycobacterium ulcerans infection in mice. J Chemother. 2003 Feb;15(1):47-52.

[3]. Drugs Today (Barc).2008 Jul;44(7):489-501;
[4]. Drugs.2011 Apr 16;71(6):731-44.

西他沙星属于喹诺酮类抗生素，也属于氟喹诺酮类抗生素。

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目的：DC-159a（一种新型喹诺酮类药物）和西他沙星（DU-6859a）是结构相关的喹诺酮类药物，均带有3-氨基吡咯烷基取代基。我们研究了这些3-氨基吡咯烷基喹诺酮类药物的靶点偏好性、体外抗菌活性以及肺炎链球菌中喹诺酮耐药突变株的出现情况，并与其他喹诺酮类药物进行了比较。方法：使用喹诺酮敏感菌株和肺炎链球菌的parC第一步突变株测定最小抑菌浓度（MIC）、耐药频率和突变预防浓度（MPC）。通过以下两种方法测试靶点偏好性：针对gyrA或parC突变株的抗菌活性测定以及体外酶活性测定（IC50值）。 [1]

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总之，DC-159a 和西他沙星对 DNA 回旋酶和拓扑异构酶 IV 的平衡双重靶向活性可能具有更大的潜力，从而最大限度地减少喹诺酮类耐药性的发展。DC-159a 和西他沙星可能成为治疗由喹诺酮类敏感菌株和耐药菌株引起的肺炎球菌肺炎的潜在治疗选择。[1]

C19H18CLF2N3O3.3/2H2O

436.84

409.1

163253-35-8

Sitafloxacin;127254-12-0;Sitafloxacin hydrochloride;346607-37-2;Sitafloxacin monohydrate;163253-37-0; 163253-35-8

461399

White to off-white solid powder

629.2ºC at 760mmHg

145-147°C (dec.)

334.3ºC

1.06E-16mmHg at 25°C

3.403

97.79

2

8

3

28

761

3

ClC1=C2C(C(C(C(=O)O[H])=C([H])N2[C@]2([H])C([H])([H])[C@]2([H])F)=O)=C([H])C(=C1N1C([H])([H])[C@]([H])(C2(C1([H])[H])C([H])([H])C2([H])[H])N([H])[H])F.O([H])[H]

MPORYQCGWFQFLA-ONPDANIMSA-N

InChI=1S/2C19H18ClF2N3O3.3H2O/c2*20-14-15-8(17(26)9(18(27)28)5-25(15)12-4-10(12)21)3-11(22)16(14)24-6-13(23)19(7-24)1-2-19;;;/h2*3,5,10,12-13H,1-2,4,6-7,23H2,(H,27,28);3*1H2/t2*10-,12+,13+;;;/m00.../s1

3-Quinolinecarboxylic acid, 7-((7S)-7-amino-5-azaspiro(24)hept-5-yl)-8-chloro-6-fluoro-1-((1R,2S)-2-fluorocyclopropyl)-1,4-dihydro-4-oxo-, hydrate (2:3)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~15 mg/mL (~34.33 mM)
H2O : ~1 mg/mL (~2.29 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: ≥ 2.08 mg/mL (4.76 mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。