| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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描述：SMIFH2（SMIFH 2；SMIFH2）是一种新型高效的小分子抑制剂，可抑制formin介导的肌动蛋白或formin同源性2（FH2）结构域。它能阻止formin介导的肌动蛋白成核和带刺端延伸，并破坏裂殖酵母和哺乳动物NIH 3T3成纤维细胞中formin依赖的肌动蛋白细胞骨架结构。
| 靶点 |
Formin Homology 2 (FH2) domains of Formin family proteins [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
在U2OS细胞中，SMIFH2（25 μM；1-16小时）可引起动态细胞骨架重组[1]。SMIFH2（25 μM）不依赖于蛋白酶体，可降低p300、mDia2和p53的水平[1]。SMIFH2通过转录后、不依赖于蛋白酶体的机制影响细胞骨架重组，从而降低p53的表达和功能[1]。SMIFH2可诱导U2OS和HCT116细胞中肌动蛋白细胞骨架和微管的动态重塑。处理1小时后，F-肌动蛋白（鬼笔环肽信号）减少，聚合微管蛋白增加。2小时后，应力纤维和丝状伪足样突起形成。4-8小时后，可观察到片状伪足和丝状伪足样突起。微管在2小时时几乎检测不到，16小时后开始恢复。这导致肌动蛋白和微管交替进行解聚-重聚循环。[1]
- SMIFH2导致U2OS和HCT116细胞中高尔基复合体的分散和显著重塑，表现为Giantin染色强度降低和形态分散，从1小时开始出现，4小时时信号几乎完全消失，16小时后恢复。[1] - SMIFH2促进细胞迁移。手动追踪SMIFH2处理的U2OS细胞，发现其净位移和迁移速度增加，尤其是在处理3至5小时之间，这与伪足的形成相关。方向性未受到显著影响。[1] - SMIFH2抑制或延迟有丝分裂。在延时实验中，与DMSO对照组相比，SMIFH2处理的U2OS细胞进入有丝分裂的现象十分罕见。[1] - SMIFH2下调mDia2、p53和p300的蛋白水平。这种效应在多种细胞系（293T、A375、U2OS、MDA-MB-231、HCT116）和MEF细胞中均有观察到，且与p53的状态、表达水平或转录活性无关。这种下调是转录后调控，且不依赖于蛋白酶体，因为蛋白酶体抑制剂乳胞素未能恢复这些蛋白的水平。mDia1、mDia3、肌动蛋白、微管蛋白和巨蛋白的蛋白水平保持不变。[1] - SMIFH2减弱p53的转录活性。在转染了HDM2-荧光素酶报告基因的293T细胞中，SMIFH2处理降低了荧光素酶活性，表明p53介导的转录减少。这种效应与mDia2无关。[1] p53表达水平调节细胞对SMIFH2的反应。野生型和p53-/- HCT116细胞的并排比较显示，1小时时间点F-肌动蛋白的减少和微管信号的增加与p53表达相关。p53敲低的U2OS细胞在生长条件下表现出更明显的皮质肌动蛋白和应力纤维，并且是SMIFH2诱导的片状伪足突出所必需的。[1] |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： 293T、A375、U2OS 和 MDA-MB-231 细胞 测试浓度： 25 μM 孵育时间： 293T、U2OS 和 MDA-MB-231 细胞 5 小时；A375 细胞 2.5 小时 实验结果： mDia2、p53 和 p300 蛋白水平下调。 细胞培养和处理：U2OS、HCT116、293T、A375、MDA-MB-231 和 MEF 细胞培养于含 10% FCS 的 DMEM 或 DMEM/F12 培养基中。除非另有说明，细胞均用 25 µM SMIFH2（或 DMSO 作为对照）处理不同时间（1、2、4、8、16 小时）。在高剂量实验中，使用浓度高于 25 µM 的 SMIFH2 以观察细胞毒性。[1] - 免疫荧光和成像：将接种于明胶包被的盖玻片上的细胞用 4% 多聚甲醛 PIPES 缓冲液固定，进行透化处理，并用一抗（抗 β-微管蛋白、抗巨蛋白、抗 GM130、抗 TGN46）和二抗染色，同时用 TRITC 标记的鬼笔环肽（用于 F-肌动蛋白）和 DAPI（用于细胞核）染色。使用 Leica TCS SP5 共聚焦显微镜采集图像。[1] - Western 印迹：在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 JS 裂解缓冲液中制备总细胞裂解液。蛋白质经SDS-PAGE分离后，用针对mDia1、mDia2、mDia3、p53、p300、p21、β-肌动蛋白、β-微管蛋白、vinculin和β-连环蛋白的抗体进行免疫印迹分析。[1] - 随机细胞迁移实验：将U2OS细胞接种于明胶包被的培养板上，使其贴壁16小时。在DMSO或25 µM SMIFH2存在下，于湿润培养箱（37°C，5% CO2）中每5分钟对细胞进行成像。使用ImageJ软件手动追踪单个细胞。使用趋化性工具插件计算净位移、迁移速度和方向性。[1] - 有丝分裂实验：根据形态（从扁平铺展状态转变为圆形贴壁状态）手动计数进入有丝分裂的细胞。计算每小时进入有丝分裂的细胞百分比。 [1] - 荧光素酶活性检测：将 pGL3-HDM2-luc（HDM2-萤火虫荧光素酶报告基因）和海肾荧光素酶共报告基因转染至 293T 细胞。转染 24 小时后，用 DMSO 或 25 µM SMIFH2 处理细胞 5 小时。使用双荧光素酶报告基因检测系统测定萤火虫荧光素酶活性，并以总蛋白含量进行标准化。[1] - 基因敲低实验：使用 shRNA（TRCN0000150903 和 TRCN0000150850）在 MDA-MB-231 细胞中实现了 mDia2 的稳定敲低。使用 pRS-p53 逆转录病毒感染实现了 A375 和 MDA-MB-231 细胞中 p53 的稳定敲低。利用慢病毒shRNA（TRCN000003755和TRCN000003756）在U2OS细胞中实现了p53的稳定敲低。此外，还利用针对mDia2的siRNA在U2OS细胞中进行了瞬时敲低。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
SMIFH2 的活性浓度在细胞内似乎下降得相对较快，因为肌动蛋白和微管的解聚-重聚循环很可能是由于细胞内 SMIFH2 的分解/失活所致。一项实验支持了这一观点，该实验表明，每 2 小时更换一次含 SMIFH2 的培养基会导致细胞骨架逐渐且持续地解聚，从而排除了培养基中化合物不稳定是造成这种现象的原因。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
高浓度SMIFH2（例如，大于25 µM，50 µM）可诱导所有测试细胞系（U2OS、HCT116、293T、A375、MDA-MB-231、MEF）快速死亡并产生细胞毒性作用。此过程与p53表达无关。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
SMIFH2 是一种细胞可渗透的小分子 Formin 同源结构域 2 (FH2) 抑制剂，最初被发现能够抑制 Formin 依赖的肌动蛋白聚合。它被用作 Formin 功能缺失研究中的药理学阻断剂。[1]
- 该研究建议使用较短的孵育时间（< 1 小时）和中等浓度（< 25 µM）的 SMIFH2，以最大程度地减少 p53 缺失和细胞毒性引起的混杂效应。在这些条件下，SMIFH2 仍然是研究 Formin 的有效工具。[1] - 该研究表明，SMIFH2 的作用并非完全归因于 Formin 抑制，因为它还会下调 p53 和 p300。在较长时间处理（> 1 小时）后观察到的细胞骨架重塑部分是由 p53 的缺失引起的。 [1] - 观察到的解聚-再聚合循环以及16小时后正常形态的恢复表明，SMIFH2对Formins的抑制是短暂且可逆的，这可能是由于细胞内药物衰减以及对不同Formins的亲和力差异所致。[1] |
| 分子式 |
C15H9N2O3SBR
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|---|---|
| 分子量 |
377.21256
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| 精确质量 |
375.952
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| CAS号 |
340316-62-3
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| PubChem CID |
2258538
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| 外观&性状 |
Light yellow to green yellow solid powder
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| LogP |
3.214
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| tPSA |
98.13
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
537
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C1/C(/C(NC(=S)N1C2=CC=CC(Br)=C2)=O)=C/C3=CC=CO3
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| InChi Key |
MVFJHEQDISFYIS-XYOKQWHBSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H9BrN2O3S/c16-9-3-1-4-10(7-9)18-14(20)12(13(19)17-15(18)22)8-11-5-2-6-21-11/h1-8H,(H,17,19,22)/b12-8+
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| 化学名 |
(5E)-1-(3-bromophenyl)-5-(furan-2-ylmethylidene)-2-sulfanylidene-1,3-diazinane-4,6-dione
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~331.38 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.51 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6510 mL | 13.2552 mL | 26.5104 mL | |
| 5 mM | 0.5302 mL | 2.6510 mL | 5.3021 mL | |
| 10 mM | 0.2651 mL | 1.3255 mL | 2.6510 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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