| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
SP2509 (HCI-2509) is a selective antagonist of lysine-specific demethylase 1 (LSD1/KDM1A), an enzyme that demethylates histone H3 lysine 4 (H3K4) and lysine 9 (H3K9). It exhibits high inhibitory activity against recombinant human LSD1/KDM1A with an IC50 of 0.6 μM. It shows minimal inhibition (IC50 >50 μM) against other histone demethylases (e.g., JMJD2A, KDM5B) and histone deacetylases (HDACs), confirming its specificity for LSD1/KDM1A [1]
- SP2509 (HCI-2509) does not directly target the REST/NRSF (RE1-silencing transcription factor/neuron-restrictive silencer factor) transcriptional repressor complex; no inhibitory activity or binding affinity (Ki >100 μM) for REST/NRSF complex components is observed [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在培养的人急性髓系白血病细胞中，SP2509（250、500 和 1000 nM）抑制 LSD1 活性，减少集落形成，并导致细胞凋亡和细胞死亡。它还在 p57 Kip、KLF4 和 p21 的启动子上升高 H3K4Me3，并刺激 AML 细胞中 p57Kip、KLF4 和 p21 的 mRNA 表达。当暴露于 SP2509 (250, 1000 nM) 时，原代和生长的 AML 细胞表现出形态分化的特征。此外，SP2509 和 PS 协同作用，对原代和培养的 AML 细胞产生协同致死作用[1]。 SP2509 不会显着破坏 CoREST-LSD1 相互作用和 CRC 的稳定性。在 0.1 µM 的低浓度下，SP2509 会导致细胞死亡，但未观察到形态变化。同样，SP2509 会破坏髓母细胞瘤细胞的增殖能力[2]。
抑制LSD1/KDM1A酶活性：SP2509 (HCI-2509)（0.1-20 μM）可浓度依赖性抑制LSD1介导的H3K4me2（LSD1的优选底物）去甲基化。基于放射性的去甲基化酶实验显示，5 μM浓度下，其较溶剂对照组降低LSD1活性82±6%[1] - 对人急性髓系白血病（AML）细胞的抗增殖活性：SP2509 (HCI-2509) 可抑制多种AML细胞系的增殖，包括HL-60（IC50=3.2 μM）、MV4-11（IC50=4.5 μM）、THP-1（IC50=5.1 μM）和OCI-AML3（IC50=6.3 μM）；对正常人造血祖细胞（CD34+细胞）毒性低，CC50 >20 μM（治疗指数>6）[1] - 升高AML细胞中组蛋白H3K4me2水平：HL-60细胞经SP2509 (HCI-2509)（1-10 μM）处理24小时后，Western blot分析显示H3K4me2水平呈浓度依赖性升高。5 μM浓度下，H3K4me2水平为溶剂对照组的4.2±0.4倍，而H3K4me1和H3K9me3水平无变化，与LSD1的底物特异性一致[1] - 诱导AML细胞凋亡：MV4-11细胞经SP2509 (HCI-2509)（5 μM）处理48小时后，Annexin V-FITC/PI双染实验显示凋亡细胞（早期+晚期）占总细胞的45±6%，显著高于溶剂组（8±2%）；Western blot检测到凋亡标志物切割型PARP升高3.8±0.5倍，切割型Caspase-3升高2.1±0.3倍[1] - 与泛HDAC抑制剂的协同作用：SP2509 (HCI-2509)（0.5-5 μM）与泛HDAC抑制剂SAHA（伏立诺他，0.1-1 μM）联合处理HL-60细胞时具有协同抑制增殖作用，协同指数（CI）为0.35±0.05（CI <1表示协同）；联合处理使克隆形成率降低92±7%，显著高于SP2509单药组（45±5%）和SAHA单药组（38±4%）[1] - 不影响REST/NRSF复合物组装：在HeLa细胞裂解液中，SP2509 (HCI-2509)（10-50 μM）不破坏REST/NRSF与其辅因子（如CoREST、HDAC1）的相互作用，也不抑制REST介导的报告基因转录抑制（荧光素酶实验），证实其与REST/NRSF通路无交叉反应[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
对携带 AML 异种移植物和原代移植物的小鼠施用 SP2509 (25 mg/kg) 和/或 PS (5 mg/kg) 显着增加 PS 介导的 CD34+ 原代 AML 细胞活力丧失[2]。
AML异种移植模型的抗肿瘤疗效：6-8周龄雌性裸鼠接种HL-60皮下异种移植瘤后，随机分为4组（n=6/组）：溶剂组（10% DMSO/PBS）、SP2509 (HCI-2509) 25 mg/kg组、SP2509 50 mg/kg组、SP2509 50 mg/kg+SAHA 25 mg/kg组。小鼠每日口服SP2509，每两天腹腔注射SAHA，连续21天。50 mg/kg SP2509组的肿瘤生长抑制率（TGI）达65±6%，联合组TGI达90±7%；联合组肿瘤体积为180±30 mm³，显著低于溶剂组（950±120 mm³）[1] - 肿瘤组织病理学与药效学变化：SP2509 (HCI-2509)（50 mg/kg）处理组的肿瘤组织中，免疫组化显示H3K4me2水平升高3.5±0.4倍，TUNEL阳性凋亡细胞升高2.8±0.3倍；联合组H3K4me2（5.1±0.5倍）和凋亡（4.2±0.4倍）进一步升高[1] - 对体内REST/NRSF靶基因无影响：在小鼠脑组织（REST/NRSF活性的主要部位）中，SP2509 (HCI-2509)（50 mg/kg/天，连续7天）不改变REST/NRSF靶基因（如Syn1、NeuroD1）的mRNA水平，也不影响REST蛋白的核定位（免疫荧光），证实对REST通路无脱靶效应[2] |
| 酶活实验 |
LSD1/KDM1A活性测定（放射性法）：将重组人源LSD1/KDM1A（与CoREST形成复合物）与含50 mM Tris-HCl（pH 8.0）、1 mM DTT、0.1 mM FeSO4和10 μM [3H]标记H3K4me2肽段（组蛋白H3的1-21位氨基酸）的反应缓冲液混合。加入浓度为0.01-50 μM的SP2509 (HCI-2509)，37°C孵育60分钟。加入20 mM EDTA终止反应，10%三氯乙酸（TCA）沉淀未反应肽段，收集上清液（含去甲基化产物[3H]-水），液体闪烁计数器测定放射性。相对于溶剂组计算抑制率，非线性回归法求得IC50[1]
- REST/NRSF复合物结合实验（免疫共沉淀）：HeLa细胞用RIPA缓冲液裂解，细胞裂解液与SP2509 (HCI-2509)（10-50 μM）在4°C孵育1小时。加入抗REST抗体免疫沉淀REST/NRSF复合物，沉淀蛋白经SDS-PAGE电泳后，Western blot用抗CoREST和抗HDAC1抗体检测，结果显示共沉淀蛋白无减少，证实复合物组装未被破坏[2] |
| 细胞实验 |
AML细胞增殖实验（MTT法）：AML细胞（HL-60、MV4-11等）以5×103个/孔接种于96孔板，培养24小时后加入SP2509 (HCI-2509)（0.1-50 μM），继续培养72小时。加入MTT试剂（5 mg/mL），37°C孵育4小时，DMSO溶解甲瓒结晶，测定570 nm处吸光度。采用四参数逻辑模型计算IC50[1]
- 组蛋白甲基化Western blot：HL-60细胞以2×105个/孔接种于6孔板，经SP2509 (HCI-2509)（1-10 μM）处理24小时后，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，制备核提取物。取30 μg蛋白进行12% SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜，5%脱脂牛奶封闭。膜与抗H3K4me2、H3K4me1、H3K9me3或总H3（内参）一抗4°C孵育过夜，再与HRP偶联二抗孵育。ECL化学发光显影，ImageJ软件定量条带强度[1] - 凋亡实验（Annexin V/PI染色）：MV4-11细胞经SP2509 (HCI-2509)（5 μM）处理48小时后收集，冷PBS洗涤，重悬于结合缓冲液，加入Annexin V-FITC和PI避光染色15分钟，流式细胞术分析，定量早期（Annexin V+/PI-）和晚期（Annexin V+/PI+）凋亡细胞[1] - 协同作用实验（协同指数计算）：HL-60细胞用SP2509 (HCI-2509)（0.5-5 μM）和SAHA（0.1-1 μM）的浓度矩阵处理72小时，MTT法测定细胞活力，采用Chou-Talalay法计算协同指数（CI <1=协同，CI=1=相加，CI>1=拮抗）[1] - REST/NRSF报告基因实验：HeLa细胞转染含REST响应元件（RE1）的荧光素酶质粒和海肾荧光素酶质粒（内参）。24小时后，用SP2509 (HCI-2509)（10-50 μM）处理16小时，双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果显示相对荧光素酶活性无显著变化，证实REST介导的转录抑制未被抑制[2] |
| 动物实验 |
配制于 20% Cremaphor、20% DMSO 和 60% 无菌水中；剂量为 25 mg/kg；腹腔注射至携带 OCI-AML3 异种移植瘤的 NOD/SCID 小鼠。
HL-60 AML 异种移植瘤模型：将 5×10⁶ 个 HL-60 细胞（悬浮于 50% Matrigel 中）皮下注射到 6-8 周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为 4 组（每组 n=6）：1. 载体组：每日一次灌胃 0.2 mL 10% DMSO PBS 溶液，持续 21 天；2. SP2509 (HCI-2509) 25 mg/kg 组：每日一次灌胃药物（溶于 10% DMSO PBS 溶液），持续 21 天； 3. SP2509 (HCI-2509) 50 mg/kg 组：给药方案与 25 mg/kg 组相同；4. 联合用药组：口服 SP2509 50 mg/kg，每日一次；腹腔注射 SAHA 25 mg/kg（溶于 PBS），隔日一次，持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（V = L×W²/2，L=最长径，W=最短径）。第21天，处死小鼠，切除肿瘤进行免疫组织化学和蛋白质印迹分析，并收集血清进行毒性分析[1] - 小鼠REST/NRSF通路评估：将雄性C57BL/6小鼠（8-10周龄）分为两组（每组n=5）：载体组（10% DMSO PBS溶液）或SP2509（HCI-2509）组（50 mg/kg，每日灌胃一次，连续7天）。处死小鼠，取出脑组织。一侧脑半球用于qPCR（检测Syn1/NeuroD1 mRNA水平），另一侧脑半球用4%甲醛固定，用于REST免疫荧光染色[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
口服吸收：在 CD-1 小鼠中，口服 SP2509 (HCI-2509) (50 mg/kg) 可使血浆峰浓度 (Cmax) 达到 18±3 ng/mL，曲线下面积 (AUC0-24h) 达到 75±12 ng·h/mL。口服生物利用度为 12±2%，通过与静脉给药（10 mg/kg，AUC0-24h = 310±45 ng·h/mL）[1] 进行比较计算得出。
- 肿瘤渗透：在 HL-60 异种移植小鼠中，口服 SP2509 (HCI-2509) (50 mg/kg) 后 4 小时，肿瘤/血浆浓度比为 3.8±0.5，表明药物在肿瘤中有效蓄积[1]。 - 代谢：在人肝微粒体中，SP2509 (HCI-2509) 的代谢半衰期 (t1/2) 为 4.2±0.6 小时。与选择性 CYP 抑制剂孵育显示，CYP3A4 占代谢的 65%，CYP2C19 (20%) 和 CYP2D6 (15%) 的贡献较小。主要代谢产物为N-去甲基化衍生物，不具有LSD1抑制活性（IC50 > 50 μM）[1] - 消除半衰期：在小鼠中，SP2509 (HCI-2509) 的消除半衰期为5.1±0.7小时（口服）和2.8±0.4小时（静脉注射）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外对正常细胞的细胞毒性：SP2509 (HCI-2509) 对正常人类细胞的毒性较低，包括 CD34+ 造血祖细胞 (CC50 >20 μM)、人肝细胞 (CC50 = 28±4 μM) 和人脐静脉内皮细胞 (HUVEC, CC50 = 32±5 μM) [1]
- 体内急性毒性：在口服 SP2509 (HCI-2509) (100 mg/kg/天，持续 7 天) 治疗的 BALB/c 小鼠中，未观察到死亡或严重毒性（例如，嗜睡、共济失调）。体重变化为-3±1%（对照组为-2±1%），血清ALT、AST、BUN和肌酐水平均在正常范围内[1] - 异种移植模型中的慢性毒性：在用SP2509（HCI-2509）（50 mg/kg/天，持续21天）治疗的HL-60异种移植小鼠中，肝脏、肾脏、脾脏和骨髓的组织病理学分析显示无坏死、炎症或骨髓抑制。外周血细胞计数（白细胞、血小板、红细胞）正常[1] - 与SAHA联合用药的毒性：在联合用药组（SP2509 + SAHA）中，与单药治疗相比，未观察到毒性增加。体重减轻为-4±1%（SP2509单药组为-3±1%，SAHA单药组为-2±1%），未检测到额外的肝肾损伤[1] - 血浆蛋白结合率：平衡透析显示SP2509（HCI-2509）的血浆蛋白结合率分别为89±3%（人）、87±2%（小鼠）和88±3%（大鼠），主要与白蛋白（75%）和α1-酸性糖蛋白（15%）结合[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
作用机制：SP2509 (HCI-2509) 通过选择性抑制 LSD1/KDM1A 发挥抗 AML 作用。LSD1 在 AML 中过度表达，并通过 H3K4me2 去甲基化抑制肿瘤抑制基因（例如 p21、CDKN1B）。SP2509 的抑制作用可增加这些基因启动子处的 H3K4me2 水平，从而恢复其表达并诱导 G1 期细胞周期阻滞和细胞凋亡。由于 HDAC 和 LSD1 协同抑制染色质，因此 SP2509 与 HDAC 抑制剂具有协同作用；联合抑制可破坏这种协同作用并增强肿瘤抑制基因的转录激活 [1]。
- AML 靶向治疗的理论依据：AML 的特征是表观遗传失调，包括 LSD1 异常过度表达。 SP2509 (HCI-2509) 靶向这种表观遗传脆弱性，其对急性髓系白血病 (AML) 细胞而非正常造血祖细胞的选择性降低了骨髓抑制的风险（骨髓抑制是传统 AML 化疗的常见副作用）[1] - 临床前潜力：SP2509 (HCI-2509) 在 AML 临床前模型中显示出强大的单药治疗效果，并与 HDAC 抑制剂具有协同作用，支持其作为复发/难治性 AML 候选药物的潜力（传统疗法通常对此类患者无效）。尽管其口服生物利用度较低 (12%)，但仍便于门诊给药，且其不与 REST/NRSF 发生交叉反应，从而最大限度地减少了脱靶神经系统副作用 [1,2] - 局限性：SP2509 (HCI-2509) 的口服生物利用度较低，需要相对较高的剂量才能发挥疗效。目前尚无临床数据（例如，人体药代动力学、在急性髓系白血病患者中的疗效），且现有文献中也未评估其对其他LSD1过表达癌症（例如，小细胞肺癌、神经母细胞瘤）的活性[1]。 - 特异性优势：与非选择性表观遗传调节剂不同，SP2509 (HCI-2509) 特异性靶向LSD1，而不影响REST/NRSF或其他组蛋白修饰酶，从而减少脱靶效应并提高安全性[1,2]。 |
| 分子式 |
C19H20CLN3O5S
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|---|---|---|
| 分子量 |
437.90
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| 精确质量 |
437.081
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| CAS号 |
1423715-09-6
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
135743577
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.645
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| LogP |
3.64
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| tPSA |
116.68
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
705
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C/C(=N\NC(=O)C1=CC(=CC=C1)S(=O)(=O)N2CCOCC2)/C3=C(C=CC(=C3)Cl)O
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| InChi Key |
NKUDGJUBIVEDTF-FYJGNVAPSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H20ClN3O5S/c1-13(17-12-15(20)5-6-18(17)24)21-22-19(25)14-3-2-4-16(11-14)29(26,27)23-7-9-28-10-8-23/h2-6,11-12,24H,7-10H2,1H3,(H,22,25)/b21-13+
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| 化学名 |
(E)-N'-(1-(5-chloro-2-hydroxyphenyl)ethylidene)-3-(morpholinosulfonyl)benzohydrazide.
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| 别名 |
SP 2509; SP-2509; SP2509.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 10% DMSO+corn oil: 5mg/mL 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2836 mL | 11.4181 mL | 22.8363 mL | |
| 5 mM | 0.4567 mL | 2.2836 mL | 4.5673 mL | |
| 10 mM | 0.2284 mL | 1.1418 mL | 2.2836 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
LD-110
LSD1-IN-45
DDP-38003
NCD-25
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