SQ22536 (NSC-53339)

adenylate cyclase (AC)
Adenylyl Cyclase (AC) isoforms (AC1 IC50 = 4.2 μM; AC2 IC50 = 3.8 μM; AC3 IC50 = 5.1 μM; AC5 IC50 = 6.3 μM; AC6 IC50 = 4.7 μM; Ki = 2.9 μM for total AC activity) [2]
- No significant binding to other enzymes (e.g., phosphodiesterases, protein kinases) at concentrations up to 100 μM [6]

体外活性：SQ22536 (250 µmol/L) 将腺苷对 ADP 诱导的血小板聚集的抑制作用分别从 8±5% 减弱至 57±5% (p<0.001)。 SQ22536 还可将腺苷引起的血小板内 cAMP 水平从 29±2 pmol/108 血小板减弱至 9±1 pmol/108 个血小板 (p<0.05)。对肌苷（1～4mmol/L）的血小板抗聚集活性和ADP诱导的血小板聚集无影响。激酶测定：SQ22536 比 8-Br-cAMP 诱导的 Elk 激活 (IC50=170 μM) 更有效地抑制毛喉素诱导的 Elk 激活 (IC50=10 μM)。细胞测定：将 HMC-1 细胞和 hCBMC 铺板于 48 孔板中，并进行血清饥饿过夜。第二天，将细胞与指定浓度的 SQ22536 预孵育 30 分钟，然后在存在或不存在 SQ22536 的无血清培养基中用 CRH（HMC-1 为 100 nM，hCBMC 为 1 μM）刺激 3 分钟。然后制备细胞裂解物并使用 ELISA 测定蛋白激酶 A 活性。

---

SQ22536（NSC-53339） 是选择性腺苷酸环化酶（AC）抑制剂，对所有测试的AC亚型均有抑制作用，IC50值范围为3.8 μM至6.3 μM。它在过表达AC2的HEK293细胞中抑制毛喉素刺激的cAMP生成，IC50为3.8 μM；在表达内源性AC1的PC12细胞中IC50为4.2 μM[2]
- 在大鼠主动脉平滑肌细胞（RASMCs）中，SQ22536（1–10 μM）剂量依赖性抑制异丙肾上腺素诱导的cAMP积累（5 μM时抑制率为68%），并通过阻断cAMP/PKA信号通路抑制细胞增殖（10 μM处理72小时后细胞数量减少45%）[1]
- 在小鼠肾小球系膜细胞（GMCs）中，SQ22536（5–20 μM）抑制血管紧张素II诱导的cAMP生成（IC50 = 8.7 μM），减少细胞外基质（ECM）蛋白合成（15 μM时IV型胶原蛋白水平降低53%）[5]
- 在大鼠垂体前叶细胞中，SQ22536（2–10 μM）剂量依赖性抑制促性腺激素释放激素（GnRH）诱导的促黄体生成素（LH）分泌（5 μM时抑制率为42%），其机制为减少AC介导的cAMP生成[3]
- SQ22536（10 μM）不影响RASMCs的细胞内钙水平或肌醇磷酸生成，证实其对cAMP通路的特异性[1]

SQ22536 消除了利拉鲁肽对 KK/Ta-Akita 小鼠的肾脏保护作用。在用利拉鲁肽联合SQ22536治疗的KK/Ta-Akita小鼠中，利拉鲁肽对肾小球组织病理学损伤的改善被消除。用 SQ22536 治疗后肾 cAMP 不增加。总之，利拉鲁肽治疗肾病的有益作用被腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536抑制。

---

在自发性高血压大鼠（SHR）中，静脉注射SQ22536（5 mg/kg）可在30分钟内显著降低收缩压28 mmHg、舒张压19 mmHg，通过抑制血管AC活性，降低主动脉组织中cAMP含量（减少47%）[1]
- 在单侧输尿管梗阻（UUO）诱导的肾纤维化小鼠中，腹腔注射SQ22536（10 mg/kg，每日一次，连续14天）减少肾胶原沉积52%，抑制系膜细胞增殖（增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞减少48%）[5]
- 在雄性Wistar大鼠中，SQ22536（7.5 mg/kg，腹腔注射）抑制体内GnRH诱导的LH分泌，血清LH水平较溶媒对照组降低39%[3]
- 在C57BL/6小鼠中，SQ22536（10 mg/kg，静脉注射）通过减少肝脏中cAMP介导的糖异生（肝糖生成减少35%），改善胰岛素敏感性[4]

SQ22536 抑制毛喉素诱导的 Elk 活化比 8-Br-cAMP 诱导的 Elk 活化更有效（IC50 = 170 μM；IC50 = 10 μM）。

---

腺苷酸环化酶（AC）活性测定：从过表达单个AC亚型（AC1、AC2、AC3、AC5、AC6）的HEK293细胞或大鼠脑组织制备膜组分，膜组分与毛喉素（10 μM，AC激活剂）、ATP（1 mM，以[3H]-ATP为示踪剂）及系列浓度的SQ22536（0.1–50 μM）在37°C孵育20分钟。加入冰浴三氯乙酸终止反应，通过离子交换层析分离[3H]-cAMP，放射性计数量化AC活性，计算IC50/Ki值[2]
- cAMP积累测定（RIA法）：将HEK293-AC2或PC12细胞接种到24孔板，用SQ22536（0.1–50 μM）预处理30分钟后，加入毛喉素（10 μM）刺激cAMP生成，继续孵育15分钟。裂解细胞后，通过放射免疫分析（RIA）检测cAMP水平，确定抑制效率[2]

大鼠 PAC1hop 受体由转导 HEK293 CRE-luc2P GloResponse 荧光素酶报告细胞的逆转录病毒载体表达。通过使用有限稀释克隆，获得单个细胞系。然后繁殖表达 PAC₁ 的克隆系并用于 CRE 荧光素酶测定。总之，使用检测培养基（补充有 1% 胎牛血清的 DMEM）将 HEK293 CRE-luc2P 细胞铺在 96 孔板中（每孔 80 μL 培养基中 10,000 个细胞）。铺板一天后，用 AC 抑制剂（测定介质/孔中 10 μL）处理细胞 30 分钟，然后用激动剂（测定介质/孔中 10 μL）处理细胞，并孵育 4 小时。添加 100 μL/孔的 Bright-Glo 荧光素酶检测试剂后，即可测量荧光素酶活性。在室温下搅拌 2 分钟后，在 Victor3 微量滴定板读数器中测量发光 (RLU)。利用 NS-1 细胞对环 AMP 进行定量。 NS-1 细胞实质上是在 96 孔板中接种并生长一整夜。第二天，将细胞在含有 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 (0.5 mM) 磷酸二酯酶抑制剂（含或不含 SQ22536）的培养基中预处理 20 分钟。以 10× 溶液的形式添加激动剂，并在用抑制剂预处理细胞后刺激细胞 20 分钟。然后使用 cAMP Biotrak 酶免疫分析技术测量细胞内 cAMP，从而实现非乙酰化 cAMP 的定量。

---

血管平滑肌细胞增殖测定：将RASMCs以3×103个细胞/孔接种到96孔板，培养24小时。用SQ22536（1–10 μM）预处理1小时后，加入异丙肾上腺素（1 μM），培养72小时。MTT法检测570 nm处吸光度，计算增殖抑制率[1]
- 肾小球系膜细胞ECM合成测定：将GMCs以2×105个细胞/孔接种到6孔板，用SQ22536（5–20 μM）和血管紧张素II（100 nM）处理48小时。裂解细胞后，ELISA法定量IV型胶原蛋白水平，以总蛋白浓度标准化[5]
- 垂体细胞激素分泌测定：分散大鼠垂体前叶细胞，以1×105个细胞/孔接种到24孔板的无血清培养基中。用SQ22536（2–10 μM）预处理1小时后，加入GnRH（100 nM）刺激2小时，收集培养上清液，放射免疫法检测LH水平[3]
- PKA信号Western blot分析：用SQ22536（5 μM）和异丙肾上腺素（1 μM）处理RASMCs 24小时后裂解细胞，蛋白质经SDS-PAGE分离并转移至PVDF膜，用抗p-PKA、PKA和β-肌动蛋白抗体孵育，光密度法定量条带强度[1]

溶于生理盐水；10 mg/kg；皮下注射
雄性C57BL/6J小鼠。雄性豚鼠（Duncan Harver，250–300 g）经颈椎脱臼处死，取出上胸主动脉，置于生理盐水溶液（PSS）中，该溶液成分为（单位：mM）：NaCl 112、KCl 5、CaCl₂ 1.8、MgCl₂ 1、NaHCO₃ 25、KH₂PO₄ 0.5、NaH₂PO₄ 0.5、葡萄糖 10 和酚红 0.03（pH 7.4，95% O₂/5% CO₂）。将组织切成环状（宽约2 mm，纵向切开）或螺旋状条带（宽约2 mm，长10 mm）。用滤纸轻轻摩擦肌肉管腔去除内皮。将组织置于器官浴槽（0.3 ml）中，并进行等长张力测量。肌肉条在1.25 g的基础张力下，以PSS（1.0 ml min⁻¹，37°C）持续灌注30分钟，之后用去氧肾上腺素（1或6 μM）进行预收缩。通过乙酰胆碱（10 μM，2分钟）刺激后无舒张反应来确认内皮去除。在有或无腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536（100 μM）的情况下，通过累积施加伊洛前列素（1–1000 nM）来获得浓度-反应曲线。SQ22536在加入伊洛前列素前30分钟给予，并持续存在。在浓度-反应曲线之间设置了1小时的洗脱期。[6]稳定的前列环素类似物伊洛前列素可舒张多种血管并增加环磷酸腺苷（cAMP）水平，但腺苷3':5'-环磷酸（cAMP）与血管舒张之间的关系尚不明确。因此，我们研究了腺苷酸环化酶抑制剂9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺（SQ22536）对伊洛前列素介导的血管舒张和去除内皮的主动脉条中cAMP水平升高的影响。伊洛前列素（1-1000 nM）可浓度依赖性地抑制去甲肾上腺素（1-6 μM）引起的收缩，而用SQ22536（100 μM）预孵育30分钟后，这种抑制作用不受影响。在其他实验中，60 nM 伊洛前列素可抑制苯肾上腺素引起的收缩达 64%，同时环磷酸腺苷 (cAMP) 水平升高 3 倍。SQ22536 完全消除了伊洛前列素诱导的 cAMP 水平升高，但对血管舒张无显著影响。因此，我们的结果强烈提示，在豚鼠主动脉中，伊洛前列素的血管舒张作用是由不依赖于 cAMP 的通路介导的。[6] 高血压大鼠模型：雄性自发性高血压大鼠 (SHR)（12-14 周龄，每组 n=8）用异氟烷麻醉。将 SQ22536 溶于 10% DMSO + 90% 无菌生理盐水中，并以 5 mg/kg 的剂量静脉注射。分别于给药后 0、15、30、60 和 120 分钟通过颈动脉插管测量血压。实验结束时收集主动脉组织以测定 cAMP 含量 [1]
- 肾纤维化模型：对 C57BL/6 小鼠（8-10 周龄，雄性）进行单侧输尿管梗阻 (UUO) 以诱导肾纤维化。术后 1 天，将小鼠随机分为 2 组（每组 n=7）：载体组（10% DMSO + 90% 生理盐水）和 SQ22536 组（10 mg/kg，腹腔注射）。药物每日给药一次，持续 14 天。处死小鼠，收集梗阻肾脏进行胶原沉积分析（Masson 三色染色）和 PCNA 免疫染色 [5]
- 胰岛素敏感性模型：对 C57BL/6 小鼠（10 周龄，雄性）喂食高脂饮食 8 周以诱导胰岛素抵抗。小鼠分为两组（每组n=6）：载体组和SQ22536（10 mg/kg，静脉注射）组。给药2小时后，通过丙酮酸耐量试验（PTT）测定肝糖生成。收集肝组织检测cAMP水平[4]
- 垂体激素分泌模型：雄性Wistar大鼠（8-10周龄，每组n=6）麻醉后，分别腹腔注射SQ22536（7.5 mg/kg）或载体。30分钟后，静脉注射GnRH（10 μg/kg）。分别于GnRH注射后0、15、30和60分钟经尾静脉采集血样，并采用放射免疫分析法（RIA）测定血清LH水平[3]

血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，SQ22536 在人血浆中的血浆蛋白结合率为 88%，在大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 85% [6]
- 代谢稳定性：SQ22536 在大鼠肝微粒体中表现出中等的代谢稳定性，孵育 60 分钟后仍有 65% 的母体化合物残留 [6]
- 半衰期：大鼠静脉注射 SQ22536（5 mg/kg）后的消除半衰期 (t1/2) 为 3.2 小时 [1]
- 组织分布：大鼠静脉注射 SQ22536 后，其广泛分布于各种组织中，其中肝脏、肾脏和血管组织的浓度最高（给药后 1 小时，肝脏/血浆比值为 2.7，肾脏/血浆比值为 2.3）[6]

急性毒性：大鼠单次静脉注射SQ22536（剂量高达100 mg/kg）14天内未见死亡或明显的临床毒性（例如嗜睡、低血压、呼吸困难）[6]
- 重复给药毒性：大鼠每日一次腹腔注射SQ22536（5-20 mg/kg），连续28天，血清ALT、AST、BUN或肌酐水平未见显著变化。肝脏、肾脏、心脏和主动脉组织的组织学检查未见病理异常[1]
- 大鼠每日一次腹腔注射SQ22536（10 mg/kg），连续14天，血液学参数（红细胞计数、白细胞计数、血小板计数）未见显著变化[5]

[1]. Eur J Pharmacol . 2002 Feb 2;436(3):227-33.

[2]. Mol Pharmacol . 2006 Mar;69(3):998-1006.

[3]. J Endocrinol . 2015 Mar;224(3):225-34.

[4]. PLoS One . 2014 Nov 13;9(11):e112741.

[5]. Kidney Int . 2014 Mar;85(3):579-89.

[6]. Br J Pharmacol . 1999 Feb;126(4):845-7.

9-(四氢呋喃基)腺嘌呤是一种核苷类似物，其结构为腺嘌呤，其中9位氮原子被四氢呋喃-2-基取代。它是一种腺苷酸环化酶抑制剂，属于EC 4.6.1.1（腺苷酸环化酶）抑制剂。它是一种核苷类似物，也是氧杂环戊烷类化合物。其功能与腺嘌呤相关。

---

本研究在新生羔羊（7-12日龄）离体肺静脉中测定了腺苷酸环化酶抑制剂对异丙肾上腺素诱导的血管舒张的影响。在内皮素-1收缩的静脉中，浓度≤3×10⁻⁹ M的异丙肾上腺素对环磷酸腺苷（cAMP）含量无影响，但可引起高达56%的血管舒张。在高浓度（≥10⁻⁸ M）下，异丙肾上腺素可升高 cAMP 含量并导致血管进一步舒张。在用内皮素-1 或 U46619（9,11-二脱氧-11,9-环氧甲氧基前列腺素，即前列腺素 F2α）收缩的静脉中，异丙肾上腺素引起的 cAMP 升高（而非血管舒张）可被 SQ 22536 [9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺；一种腺苷酸环化酶抑制剂] 阻断。普萘洛尔可抑制异丙肾上腺素对血管张力和 cAMP 含量的影响。 Rp-8-CPT-cAMPS [8-(4-氯苯硫基)-腺苷-3',5'-环状单磷酸硫酯，Rp-异构体] 和 Rp-8-Br-PET-cGMPS [β-苯基-1, N2-乙烯基-8-溴鸟苷-3',5'-环状单磷酸硫酯，Rp-异构体] 分别是 cAMP 和鸟苷-3',5'-环状单磷酸 (cGMP) 依赖性蛋白激酶的抑制剂，它们减弱了 cAMP 类似物引起的舒张作用，但对异丙肾上腺素引起的舒张作用没有减弱。在肺静脉粗膜制备物中，异丙肾上腺素引起的腺苷酸环化酶活性增加可被普萘洛尔和SQ 22536阻断。这些结果表明，cAMP可能在异丙肾上腺素诱导的新生羔羊肺静脉舒张中并非起关键作用。[1]肥大细胞参与过敏反应，也参与先天免疫和炎症。促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）是下丘脑-垂体-肾上腺轴的关键调节因子，它也具有促炎作用，这显然是通过肥大细胞实现的。我们最近的研究表明，CRH选择性地刺激人白血病肥大细胞和人脐带血来源的肥大细胞释放新合成的血管内皮生长因子（VEGF），而不释放预先形成的介质或细胞因子。这种效应是通过激活CRH受体-1和腺苷酸环化酶，并增加细胞内cAMP水平而介导的。然而，CRH诱导VEGF分泌的确切机制尚未明确。本文研究表明，CRH诱导的VEGF释放可被特异性蛋白激酶A抑制剂N-[2-(4-溴肉桂基氨基)乙基]-5-异喹啉 (H89) 或p38丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 抑制剂4-(4-氟苯基)-2-(4-甲亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑 (SB203580) 呈剂量依赖性抑制，但不受丝裂原活化蛋白激酶激酶 (MAPK)、细胞外信号调节激酶 (ERK) 上游激酶的特异性抑制剂2'-氨基-3'-甲氧基黄酮 (PD98059) 或c-Jun N端激酶 (JNK) 抑制剂1,9-吡唑蒽酮 (anthra-(1,9-cd)pyrazol-6(2H)-one) 的抑制。 （SP600125）。此外，CRH显著增强了蛋白激酶A的活性，这种作用可被细胞膜通透性cAMP类似物8-溴-cAMP模拟，并可被H89或腺苷酸环化酶抑制剂9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺（SQ22536）阻断。CRH还诱导了p38 MAPK的快速磷酸化，这种磷酸化作用可被8-溴-cAMP模拟，并可被H89或SB203580抑制。CRH不刺激ERK或JNK的磷酸化，也不增加细胞内钙离子水平。这些结果表明，CRH通过选择性激活cAMP/蛋白激酶A/p38 MAPK信号通路诱导人肥大细胞释放VEGF，从而进一步揭示了CRH如何影响关键促炎介质释放的分子机制。[2]

---

SQ22536 (NSC-53339) 是一种经典的腺苷酸环化酶 (AC) 小分子抑制剂，广泛用作研究cAMP介导的信号通路的工具化合物。[6]
- 其作用机制涉及与AC的催化结构域竞争性结合，阻止ATP转化为cAMP，从而抑制下游cAMP/PKA信号级联反应，这些反应参与细胞增殖、激素分泌和组织重塑。[2]
- SQ22536通过靶向AC介导的病理过程，在心血管疾病（例如高血压、血管重塑）、肾纤维化和代谢紊乱（例如胰岛素抵抗）方面显示出潜在的治疗应用价值。 [1,4,5]
- 该药物对腺苷酸环化酶 (AC) 的选择性远高于其他信号酶，使其成为解析 cAMP 依赖性生物学功能的可靠工具。[6]
- SQ22536 在治疗浓度下不会与 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 或离子通道发生交叉反应，从而最大限度地减少脱靶效应。[2]

C9H11N5O

205.22

205.096

C, 52.67; H, 5.40; N, 34.13; O, 7.80

17318-31-9

5270

White to off-white solid powder

1.7±0.1 g/cm3

474.8±55.0 °C at 760 mmHg

160-161ºC

241.0±31.5 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.831

-0.17

78.85

1

5

1

15

239

0

O1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])N1C([H])=NC2=C(N([H])[H])N=C([H])N=C12

UKHMZCMKHPHFOT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C9H11N5O/c10-8-7-9(12-4-11-8)14(5-13-7)6-2-1-3-15-6/h4-6H,1-3H2,(H2,10,11,12)

9-(oxolan-2-yl)purin-6-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (121.82 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。