SSR-240612 HCl

bradykinin B1 receptor, Human MRC5 ( Ki = 0.48 nM );
bradykinin B1 receptor, Human HEK-B1 ( IC50 = 0.73 nM );
bradykinin B2 receptor, guinea pig ileum membranes ( IC50 = 481 nM );
bradykinin B2 receptor, Human CHO-B2 ( IC50 = 358 nM )
SSR-240612 HCl targets bradykinin B1 receptor (BK B1 receptor); Ki = 0.48 nM (human fibroblast MRC5 B1 receptor), Ki = 0.73 nM (recombinant human B1 receptor expressed in HEK cells); selectivity for B1 vs. B2 receptors is 500- to 1000-fold [1]
SSR-240612 HCl targets bradykinin B1 receptor (BK B1 receptor) [2]

体外活性：测量 MRC5 成纤维细胞中磷酸肌醇的积累。根据Oury-Donat等人描述的方法，在用[3H]肌醇标记的MRC5成纤维细胞中测量[3H]肌醇磷酸1积累。 （1994）。将在 6 孔板中培养的细胞用添加到培养基 (DMEM) 中的 5 μCi/ml [3H] 肌醇标记 48 小时。然后将细胞在含有 0.5 μg/ml IL-1β 的 DMEM 中孵育 4 小时，以诱导 B1 受体合成。在含有 50 mM LiCl 和测试化合物的 DMEM 中进行肌醇磷酸 1 积累的激动剂刺激。在 10 nM Lys0-des-Arg10BK 之前 15 分钟添加拮抗剂。 37°C 孵育 30 分钟后，弃去培养基，并通过快速添加 1 ml 冷甲醇和 1 N HCl (v/v) 终止反应。刮下细胞，将悬浮液转移至装有 1 ml 氯仿和 20 μl 12 N HCl 的玻璃管中。水相用 350 μl 1 M NaHCO3 中和，并上样至 1 ml Dowex AG1 × 8 柱。 [3H]肌醇磷酸1用0.2M甲酸铵和0.1M甲酸洗脱。通过液体闪烁光谱法测量放射性。激酶测定：[3H]Lys0-des-Arg9-BK 与 B1 受体结合的测定。 MRC5 人成纤维细胞（美国典型培养物保藏中心，马纳萨斯，弗吉尼亚州）和表达人 B1 受体的转染 HEK-293 细胞常规培养在含有 Glutamax-I（Life Technologies，Cergy Pontoise，法国）的 Dulbeccos 改良 Eagles 培养基 (DMEM) 中，补充有 10%胎牛血清（Life Technologies）和抗生素。 MRC5 在含有 0.5 μg/ml 白介素-1β (IL-1β) 的 DMEM 中孵育 4 小时，以诱导 B1 受体合成。使用 Polytron（设置 8）在含有 1 mM 1-10 菲咯林的 25 mM TES-HCl 中刮擦细胞并匀浆 1 分钟。匀浆液在 4°C 下以 40,000g 离心 15 分钟，并使用 Polytron（设置 8）将沉淀重悬于相同缓冲液中 1 分钟。将膜在 4°C 下以 40,000g 沉淀 10 分钟，重悬于相同缓冲液中，并保存在 -80°C 下。细胞分析：SSR240612 是一种有效的缓激肽 B1 受体拮抗剂，对表达人 B1 受体的人成纤维细胞 MRC5 和 HEK 细胞的 B2 激肽受体的 Kis 分别为 0.48 nM 和 0.73 nM，对豚鼠回肠膜和豚鼠回肠膜的 B1 受体的 Kis 分别为 481 nM 和 358 nM。分别表达人B1受体的CHO细胞。 SSR240612 抑制肌醇磷酸 1 形成，IC50 为 1.9 nM，但对人成纤维细胞 MRC5 中 B2 受体的 BK (3 nM) 激活诱导的肌醇磷酸 1 形成没有明显影响。

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1. 受体结合抑制：SSR-240612 HCl 可强效抑制[(3)H]Lys(0)-des-Arg(9)-BK与人成纤维细胞MRC5中缓激肽B1受体的结合（Ki=0.48 nM），以及与HEK细胞表达的重组人B1受体的结合（Ki=0.73 nM） [1]
2. B1受体信号功能抑制：SSR-240612 HCl 可抑制Lys(0)-desArg(9)-BK（10 nM）诱导的人成纤维细胞MRC5中肌醇单磷酸生成，IC50为1.9 nM [1]
3. 离体组织收缩抑制：SSR-240612 HCl 可拮抗des-Arg(9)-BK诱导的离体兔主动脉收缩（pA2=8.9）和大鼠回肠肠系膜神经丛收缩（pA2=9.4） [1]

Des Arg9-BK 诱导的小鼠爪水肿。八只雄性白化病小鼠在异氟烷麻醉下，右后爪跖内注射 5 μg IL-1β（溶于磷酸盐缓冲盐水/0.1% BSA）。四十分钟后（T = 0），小鼠在麻醉下在同一爪子足底内注射 20 μl des-Arg9-BK（10 μg/爪）水溶液。在 des-Arg9- 前 1 小时，通过口服途径以 1、3 和 10 mg/kg 的剂量给予 SSR240612 或载体 [5% (v/v) 乙醇和 5% (v/v) Tween 80 水溶液] BK 注射，并在 des-Arg9-BK 注射前 40 分钟通过腹膜内途径注射，剂量为 0.1、0.3 和 1 mg/kg。在 T = -2 小时（初始测量）和水肿诱导后多次（T = 20、40、60 和 120 分钟）用体积描记器测量爪体积。爪水肿体积以毫升表示为水肿诱导后各时间爪体积与初始爪体积之间的差。每组的结果表示为个体爪水肿体积的平均值±SEM。在使用重复方差分析验证方差的正态性和同质性后进行统计分析，然后进行邓肯斯检验、处理组与des-Arg9-BK对照组。

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1. 小鼠炎症水肿抑制：SSR-240612 HCl 经口服（3、10 mg/kg）或腹腔注射（0.3、1 mg/kg）可抑制des-Arg(9)-BK诱导的小鼠爪水肿；经口服（0.3、3、30 mg/kg）可减轻辣椒素诱导的小鼠耳水肿 [1]
2. 大鼠肠道损伤缓解：SSR-240612 HCl（0.3 mg/kg，静脉注射）可减轻大鼠内脏动脉闭塞/再灌注后的肠道组织损伤及中性粒细胞浸润 [1]
3. 大鼠镇痛作用：SSR-240612 HCl 经口服（1、3 mg/kg）可抑制紫外线照射诱导的热痛觉过敏，经口服（10、30 mg/kg）可抑制福尔马林诱导的伤害性反应晚期阶段；经口服（20、30 mg/kg）可预防大鼠坐骨神经结扎诱导的神经性热痛 [1]
4. 胰岛素抵抗大鼠异常痛觉逆转：给饮用10% D-葡萄糖12周的大鼠（胰岛素抵抗模型，伴触觉和冷异常痛觉）口服SSR-240612 HCl（0.3-30 mg/kg），可阻断触觉异常痛觉（给药后3小时ID50=5.5 mg/kg）和冷异常痛觉（给药后3小时ID50=7.1 mg/kg）；该药物对同龄对照组大鼠的触觉/冷异常痛觉无影响，且10 mg/kg口服剂量对葡萄糖喂养大鼠的血浆葡萄糖/胰岛素水平、HOMA指数（胰岛素抵抗标志物）及主动脉超氧阴离子生成无影响 [2]

[³H]Lys0-des-Arg9-BK 用于与细胞膜结合的结合缓冲液由以下成分组成：137 mM NaCl、5.4 mM KCl、1.05 mM MgCl2、1.8 mM CaCl₂、1.2 mM NaH₂PO₄、15.5 mM NaHCO₃、10 mM HEPES、1 g/L 牛血清白蛋白 (BSA)、140 mg/L 杆菌肽和 1 μM 卡托普利，pH 7.4。将膜在 500 μL 含有 1 nM [³H]Lys0-des-Arg9-BK 的结合缓冲液中于 25°C 孵育 30 分钟。饱和等温线为 0.1 至 10 nM，竞争曲线为 0.1 至 10 nM。用 5 mL 结合缓冲液洗涤过滤器 3 次，并通过液体闪烁光谱法测定放射性。测量非特异性结合的一种方法是添加 1 μM 未标记的 Lys0-des-Arg9BK[1]。

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1. 人成纤维细胞MRC5中缓激肽B1受体结合实验：制备MRC5细胞膜提取物，与[(3)H]Lys(0)-des-Arg(9)-BK（B1受体特异性放射性配体）及系列浓度的SSR-240612 HCl（浓度范围未明确）在25℃孵育预定时间（未明确）；在过量未标记Lys(0)-des-Arg(9)-BK存在下测定非特异性结合；通过过滤分离结合的放射性物质，采用液体闪烁计数法定量；利用标准配体结合方程计算Ki值 [1]
2. 重组HEK细胞中缓激肽B1受体结合实验：制备表达重组人B1受体的HEK细胞膜，与[(3)H]Lys(0)-des-Arg(9)-BK及系列稀释的SSR-240612 HCl 在与MRC5细胞实验相同条件下孵育；检测结合的放射性强度，计算Ki值以评估SSR-240612 HCl 对重组B1受体的亲和力 [1]
3. MRC5细胞肌醇单磷酸生成实验：将MRC5细胞接种于24孔板，与系列浓度的SSR-240612 HCl 在37℃预孵育15分钟；加入Lys(0)-desArg(9)-BK（10 nM）刺激B1受体信号，继续孵育预定时间（未明确）；提取并采用放射分析方法（未明确）定量细胞内肌醇单磷酸水平；从浓度-反应曲线确定IC50值 [1]

SSR240612 是缓激肽 B1 受体的强拮抗剂，对表达人 B1 受体的人成纤维细胞 MRC5 和 HEK 细胞的 B2 激肽受体的 Kis 值分别为 0.48 nM 和 0.73 nM，对 B1 受体的 Kis 值分别为 481 nM 和 358 nM豚鼠回肠膜和表达人类 B1 受体的 CHO 细胞。 SSR240612 抑制肌醇磷酸-1 的形成，IC50 为 1.9 nM，但对人成纤维细胞 MRC5 中由 B2 受体的 BK (3 nM) 激活触发的肌醇磷酸-1 的形成没有明显影响。

小鼠：每组8只雄性白化小鼠，在异氟烷麻醉下，于右后爪足底注射20 μL含5 μg IL-1β的磷酸盐缓冲液/0.1% BSA溶液。麻醉结束后40分钟（T = 0），小鼠足底注射20 μL des-Arg9-BK（10 μg/爪），溶于水中。在注射des-Arg9-BK前40分钟，腹腔注射SSR240612或溶剂（5% (v/v)乙醇和5% (v/v)吐温80水溶液），并在注射des-Arg9-BK前1小时分别口服1、3和10 mg/kg剂量的SSR240612或溶剂，以达到急性给药。在诱导水肿后，于 T = -2 小时（首次测量）以及多个时间间隔（T = 20、40、60 和 120 分钟）使用体积描记器测量爪体积。初始爪体积与诱导水肿后各时间点的爪体积之差即为爪水肿体积，以毫升为单位。各组爪水肿体积的平均值 ± 标准误 (SEM) 列于表中。经多重方差分析 (ANOVA) 检验确认数据符合正态分布且方差齐性后，采用 Duncan 检验比较各处理组与 des-Arg9-BK 对照组[1]。\n大鼠：在热痛觉过敏测量前两小时，以每公斤体重 20 毫升的剂量口服 SSR240612（溶于 0.1% Tween 80 生理盐水中）。在时间进程研究中测量大鼠的缩足潜伏期之前，以 3 mg/kg 的剂量，分别在 0.08、0.25、0.5、1、2、4、6、8 和 24 小时的时间间隔内，经口给予该化合物。结果以平均缩足潜伏期 (s) ± 标准误 (SEM) 表示，统计分析采用双因素方差分析和 Dunnett 检验[1]。

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\n1. 小鼠爪水肿模型：将雄性小鼠（品系未指定）随机分为对照组和治疗组；在预先设定的时间（未指定）经口（3、10 mg/kg）或腹腔注射（0.3、1 mg/kg）给予 SSR-240612 HCl，随后皮下注射 des-Arg(9)-BK（剂量未指定）至爪部；在注射缓激肽（BK）后多个时间点测量爪水肿体积（方法未指定）；载体处理的小鼠作为对照组（n=数量未指定）[1]
\n2. 小鼠耳水肿模型：雄性小鼠（品系未指定）口服SSR-240612 HCl（0.3、3、30 mg/kg）或载体；局部涂抹辣椒素（剂量未指定）于耳部以诱导水肿；在涂抹辣椒素后特定时间点对耳水肿进行定量（方法未指定）（n=数量未指定）[1]
\n3. 大鼠肠道损伤模型（内脏动脉闭塞/再灌注）：雄性Sprague-Dawley大鼠接受预定时间（未指定）的内脏动脉闭塞，随后进行再灌注；在血管闭塞前或闭塞期间（时间未指定）静脉注射SSR-240612 HCl（0.3 mg/kg）；对照组大鼠注射溶剂；再灌注后，收集肠道组织以评估组织破坏（组织学评分）和中性粒细胞聚集（方法未指定）（n=数量未指定）[1]
\n4. 大鼠紫外线诱导痛觉过敏模型：雄性Sprague-Dawley大鼠暴露于紫外线照射（剂量/持续时间未指定）以诱导热痛觉过敏；口服SSR-240612 HCl（1、3 mg/kg）；在给药后多个时间点使用缩爪试验（方法未指定）评估热痛觉过敏（n=数量未指定）[1]
\n5.大鼠福尔马林诱导伤害性感受模型：雄性Sprague-Dawley大鼠接受足底注射福尔马林（剂量未指定）以诱导伤害性感受反应；在注射福尔马林前口服SSR-240612 HCl（10、30 mg/kg）（时间未指定）；记录并量化特定时间段内的伤害性感受反应后期（舔舐/啃咬行为）（n=数量未指定）[1]
\n6. 大鼠坐骨神经压迫模型（神经性疼痛）：雄性Sprague-Dawley大鼠接受单侧坐骨神经压迫以诱导神经性热痛；口服SSR-240612 HCl（20、30 mg/kg）（频率/时间未指定）；采用爪缩回试验（方法未具体说明）定期评估热痛敏感性（n=数量未具体说明）[1]
\n7. 大鼠胰岛素抵抗/痛觉过敏模型：雄性Sprague-Dawley大鼠饮用水中添加10% D-葡萄糖，持续12周，以诱导胰岛素抵抗、触觉痛觉过敏和冷觉痛觉过敏；年龄匹配的对照组大鼠饮用普通饮用水；向葡萄糖喂养组和对照组大鼠口服SSR-240612 HCl（0.3、3、10、30 mg/kg）；采用von Frey纤维测试测量爪缩回阈值（以克为单位）来评估触觉痛觉过敏，并在给药后多个时间点（0、1、3、6、24 h）测量对冷刺激的爪缩回反应频率（方法未具体说明）来评估冷觉痛觉过敏；在喂食葡萄糖的大鼠中，用 10 mg/kg SSR-240612 HCl 处理后，测定了血浆葡萄糖/胰岛素水平、HOMA 指数和主动脉超氧阴离子生成量（n=未指定数量，数据以均值±标准误表示）[2]

[1]. SSR240612 [(2R)-2-[((3R)-3-(1,3-benzodioxol-5-yl)-3-[[(6-methoxy-2-naphthyl)sulfonyl]amino]propanoyl)amino]-3-(4-[[2R,6S)-2,6-dimethylpiperidinyl]methyl]phenyl)-N-isopropyl-N-methylpropanamide hydrochloride], a new nonpeptide antagonist of the bradykinin B1 receptor: biochemical and pharmacological characterization. J Pharmacol Exp Ther . 2004 May;309(2):661-9

[2]. The kinin B1 receptor antagonist SSR240612 reverses tactile and cold allodynia in an experimental rat model of insulin resistance. Br J Pharmacol . 2007 Sep;152(2):280-7.

1. SSR-240612 HCl 是一种新型、强效、口服有效的非肽类缓激肽B1受体拮抗剂，对B1受体的选择性比B2受体高500至1000倍[1]
2. SSR-240612 HCl 的拮抗作用是通过直接抑制B1受体结合和下游信号传导（肌醇单磷酸的形成），以及抑制B1受体介导的组织收缩来实现的[1]
3. SSR-240612 HCl 在体内具有抗炎、组织保护和镇痛作用，包括抑制水肿、肠缺血/再灌注损伤、热痛觉过敏、福尔马林诱导的伤害性感受和神经性疼痛[1]
4. SSR-240612 HCl 可逆转胰岛素抵抗大鼠模型中的触觉和冷觉异常性疼痛，且不影响血浆葡萄糖/胰岛素水平、胰岛素抵抗（HOMA 指数）或血管氧化应激（主动脉超氧化物生成），表明其作用是通过直接抑制脊髓/感觉神经中的 B1 受体介导的，而非调节代谢/血管通路[2]。
5. SSR-240612 HCl 由于其口服生物利用度高且具有选择性 B1 受体拮抗作用，因此有望成为治疗胰岛素抵抗/糖尿病相关感觉性多发性神经病的一种候选药物[2]。

C42H53CLN4O7S

793.42

792.332

C, 63.58; H, 6.73; Cl, 4.47; N, 7.06; O, 14.12; S, 4.04

464930-42-5

465539-70-2

44235958

White to off-white solid powder

9.395

138.38

3

9

14

55

1330

4

Cl.S(C1C=CC2C=C(C=CC=2C=1)OC)(N[C@@H](C1=CC=C2C(=C1)OCO2)CC(N[C@@H](C(N(C)C(C)C)=O)CC1C=CC(=CC=1)CN1[C@H](C)CCC[C@@H]1C)=O)(=O)=O

GLHHFOSVBQQNAW-GDYXXZBVSA-N

InChI=1S/C42H52N4O7S.ClH/c1-27(2)45(5)42(48)38(20-30-10-12-31(13-11-30)25-46-28(3)8-7-9-29(46)4)43-41(47)24-37(34-16-19-39-40(23-34)53-26-52-39)44-54(49,50)36-18-15-32-21-35(51-6)17-14-33(32)22-36;/h10-19,21-23,27-29,37-38,44H,7-9,20,24-26H2,1-6H3,(H,43,47);1H/t28-,29+,37-,38-;/m1./s1

(2R)-2-[[(3R)-3-(1,3-benzodioxol-5-yl)-3-[(6-methoxynaphthalen-2-yl)sulfonylamino]propanoyl]amino]-3-[4-[[(2R,6S)-2,6-dimethylpiperidin-1-yl]methyl]phenyl]-N-methyl-N-propan-2-ylpropanamide;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。